川芎嗪对膝骨性关节炎大鼠软骨VEGF表达的影响

中国骨质疏松杂志９０４　２０１８年７月第２４卷第７期　Ｊｕｌｙ　２０ｌ８，Ｖｏｌ　２４，Ｎｏ．７　Ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ　ｏｎｌｉｎｅ　ｗｗｗ．ｗａｎｆａｎｇｄａｔｅ．ｃｏｒｎ．ｃｎ　ｄｏｉ　１　１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００６—７１０８．２０１　８．０７．０１３　·论著·　川芎嗪对膝骨性关节炎大鼠软骨ＶＥＧＦ表达的影响　李飞龙　＇　谢平金　’　＇　柴生颈　２．广州中医药大学，广东广州５１０４０５　３．广州中医药大学岭南医学研究中心中医骨伤科学实验室，广东广州５１０４０５　刘治军　，　陈群群　刘柄辰　＇。’　１．广州中医药大学第三附属医院骨科，广东　广州５１００００　中图分类号：Ｒ３６５　用机制。方法文献标识码：Ａ　文章编号：１００６－７１０８（２０１８）０７—０９０４—０６　摘要：目的　观察川芎嗪治疗膝骨关节炎大鼠（ＫＯＡ）模型关节软骨中￣ＥＧＦ蛋白表达的变化，并探讨川芎嗪治疗ＫＯＡ的作　制作大鼠膝关节炎模型，将建模成功的大鼠纳入模型对照组，常规饲养，川芎嗪高剂量组、川芎嗪低剂量组、　阳性对照组分别行川芎嗪和塞来昔布灌胃干预，正常组和模型组行等量生理盐水，予以干预６周，实验结束后，分别行各组大　鼠ＨＥ切片软骨Ｍａｎｋｉｎ评分、Ｗｅｓｔｅｒｎ　Ｂｌｏｔ检测软骨组织ＶＥＧＦ表达的变化。结果　软骨Ｍａｎｋｉｎ评分中，川芎嗪各剂量组和　阳性对照组均高于正常组、且均低于模型组（Ｐ＜０．０５），而阳性对照组评分低于川芎嗪低剂量组，但高于川芎嗪高剂量组（Ｐ＜　０．０５）。正常组、川芎嗪各剂量组及阳性对照组中软骨ＶＥＧＦ相对表达量均低于模型组，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；与阳　性对照组相比，川芎嗪高剂量组ＶＥＧＦ表达量明显低于阳性对照组（Ｐ＜０．０５）、而川芎嗪低剂量组其表达则高于阳性对照组。　结论　川芎嗪对可能通过下调早期ＫＯＡ大鼠ＶＥＧＦ的表达，抑制早期软骨血管新生而减轻炎症，这可能是在某种程度上减轻　关节软骨退变、修复软骨损伤的作用机制之一。　关键词：川芎嗪；膝骨性关节炎；ＶＥＧＦ　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｌｉｇｕｓｔｒａｚｉｎｅ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＶＥＧＦ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃａｒｔｉｌａｇｅ　ｉｎ　ｒａｔｓ　ｗｉｔｈ　ｋｎｅｅ　ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ　ＬＩ　Ｆｅｉｌｏｎｇ’．－，ＸＩＥ　Ｐｉｎｇｊｉｎ　，　，ＣＨＡＩ　Ｓｈｅｎｇｔｉｎｇ　＇　，ＬＩＵ　Ｚｈ￣ｕｎ　一，ＣＨＥＮ　Ｑｕｎｑｕｎ　一，ＬＩＵ　Ｂｉｎｇｃｈｅｎ　，　＇　１．Ｔｈｅ　Ａｆｉｌｉｆａｔｅｄ　Ｏｒｔｈｏｐｅｄｉｃｓ　ａｎｄ　Ｔｒａｕｍａ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　５　１００００，Ｃｈｉｎａ　２．Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　５　１０４０５，Ｃｈｉｎａ　３．Ｔｈｅ　Ｌａｂ　ｏｆ　Ｏｒｔｈｏｐｅｄｉｃｓ　ａｎｄ　Ｔｒａｕｍａｔｏｌｏｇｙ，Ｌｉｎｇｎａｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｅｎｔｅｒ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　５　１０４０５，Ｃｈｉｎａ　｝Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ａｕｔｈｏｒ：ＣＨＡＩ　Ｓｈｅｎｇｔｉｎｇ．Ｅｍａｉｌ：ｃｓｔ０１９２＠ｑｑ．ｃｏｍ　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｏｂｓｅｒｖｅ　ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｂｏｎｅ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃ　ＶＥＧＦ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｊｏｉｎｔ　ｃａｒｔｉｌａｇｅ　ｏｆ　ｒａｔ　ｋｎｅｅ　ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ（ＫＯＡ）ｍｏｄｅｌ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｌｉｇｕｓｔｒａｚｉｎｅ，ａｎｄ　ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　ｌｉｇｕｓｔｒａｚｉｎｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　ＫＯＡ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｒａｔ　ｋｎｅｅ　ａｒｔｈｒｉｔｉｓ　ｍｏｄｅｌ　ｗａｓ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．Ｒａｔｓ　ｗｉｔｈ　ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌ　ｍｏｄｅｌｉｎｇ　ｗｅｒｅ　ｉｎｃｌｕｄｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｍｏｄｅｌ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ，ｗｉｔｈ　ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ　ｂｒｅｅｄｉｎｇ．Ｒａｔｓ　ｉｎ　ｌｉｇｕｓｔｒａｚｉｎｅ　ｈｉｇｈ—ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐ，ｌｉｇｕｓｔｒａｚｉｎｅ　ｌｏｗ—ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐ，ａｎｄ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ　ｒｅｃｅｉｖｅｄ　ｌｉｇｕｓｔｒａｚｉｎｅ　ａｎｄ　ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ　ｌａｖａｇｅ　ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｒａｔｓ　ｉｎ　ｎｏｒｍａｌ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｍｏｄｅｌ　ｇｒｏｕｐ　ｒｅｃｅｉｖｅｄ　ｓａｍｅ　ａｍｏｕｎｔ　ｏｆ　ｎｏｒｍａｌ　ｓａｌｉｎｅ　ｆｏｒ　６　ｗｅｅｋｓ．Ａｔ　ｔｈｅ　ｅｎｄ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ，ＨＥ　ｓｌｉｃｅｓ　ｆｒｏｍ　ｒａｔｓ　ｏｆ　ｅａｃｈ　ｇｒｏｕｐ　ｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ｃａｒｔｉｌａｇｅ　Ｍａｎｋｉｎ　ｓｃｏｒｅ．　Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔｔｉｎｇ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｔｅｓｔ　ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　ＶＥＧＦ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃａｒｔｉｌａｇｅ　ｔｉｓｓｕｅ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｃａｒｔｉｌａｇｅ　Ｍａｎｋｉｎ　ｓｃｏｒｅｓ　ｉｎ　ｅａｃｈ　ｌｉｇｕｓｔｒａｚｉｎｅ　ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ　ｗｅｒｅ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｂｌａｎｋ　ｇｒｏｕｐ，ｂｕｔ　ｗｅｒｅ　ｌｏｗｅｒ　ｔｈａｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｍｏｄｅｌ　ｇｒｏｕｐ　（尸＜０．０５）．Ｔｈｅ　ｓｃｏｒｅｓ　ｉｎ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ　ｗｅｒｅ　ｌｏｗｅｒ　ｔｈａｎ　ｉｎ　ｌｉｇｕｓｔｒａｚｉｎｅ　ｌｏｗ—ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐ，ｂｕｔ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｉｎ　ｌｉｇｕｓｔｒａｚｉｎｅ　ｈｉｇｈ—ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５）．Ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ　ｏｆ　ｃａｒｔｉｌａｇｅ　ＶＥＧＦ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｎｏｒｍａｌ　ｇｒｏｕｐ，ｅａｃｈ　ｌｉｇｕｓｔｒａｚｉｎｅ　ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ　ｗｅｒｅ　ｌｏｗｅｒ　ｔｈａｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｍｏｄｅｌ　ｇｒｏｕｐ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ　ｗｅｒｅ　ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｐ＜０．０５）．Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｃａｒｔｉｌａｇｅ　ＶＥＧＦ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｈｉｇｈ—ｄｏｓｅ　ｌｉｇｕｓｔｒａｚｉｎｅ　ｇｒｏｕｐ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｌｏｗｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜　０．０５），ｂｕｔ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｌｏｗ—ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐ　ｗａｓ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｌｉｇｕｓｔｒａｚｉｎｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｓ　基金项目：２０１６年度广州中医药大学中医骨伤重点学科开放基金（ＹＢ１６）；国家自然科学基金（８１３０２９９１，８１３７３６５３）；广东省科技计划项　目（２０１６Ａ０２０２１６０２４）；广东省中医药科研项目（２０１７０２８３）　｛通讯作者：柴生颞，Ｅｍａｉｌ：ｅｓｔ０１９２＠ｑｑ．ｃｏｎ　生垦量亟堕松杂志２０１８年７月第２４卷第７期Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓ，Ｊｕｌｙ　２０１８，Ｖｏｌ　２４，Ｎｏ．７　９０５　ｅａｒｌｙ　ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｏｆ　ｃａｒｔｉｌａｇｅ　ｔｏ　ｒｅｄｕｃｅ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ　ｂｙ　ｄｏｗｎ—ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＶＥＧＦ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ＫＯＡ　ｒａｔｓ，ｗｈｉｃｈ　ｔｏ　ｓｏｍｅ　ｅｘｔｅｎｔ　ｍａｙ　ｂｅ　ｏｎｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ｏｆ　ｒｅｄｕｃｉｎｇ　ｊｏｉｎｔ　ｃａｒｔｉｌａｇｅ　ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｒｅｐａｉｒｉｎｇ　ｃａｒｔｉｌａｇｅ　ｄａｍａｇｅ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｌｉｇｕｓｔｒａｚｉｎｅ；Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｋｎｅｅ；ＶＥＧＦ　膝骨关节炎（ｋｎｅｅ　ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ，ＫＯＡ）作为膝关　节软骨变性、破坏及关节周围骨质增生为特征的慢　离心机（ＳＣＩｌｏｇｅｘ）；磁力搅拌器（常州澳华仪器有限　公司）；脱色摇床（北京六一仪器厂）；电泳仪（北京　性关节病¨　，多见于６０岁以上人群　，临床上表现　为膝关节局部疼痛、晨僵、肿胀、活动受限，严重者可　六一仪器厂）；水浴锅（姜堰市天力医疗器械厂有限　公司）；暗匣（广东粤华医疗器械厂有限公司）；感光　出现关节的畸形。随年龄增长而发生率明显增加，　胶片（Ｋｏｄａｋ）；封口机ＰＦ（温州市江南机械厂）；低　是引起老年人关节疼痛和功能障碍的主要原因，并　最终可导致残疾的风险Ｅ　３　３。ＫＯＡ的发病率目前正　快速增长，故对于如何早期防治ＫＯＡ已成为当前研　究热点。川芎嗪作为活血化瘀类中药川芎中提取的　一种有效活性生物碱，在治疗ＫＯＡ的临床及实验研　究已有相关报道。本研究通过观察川芎嗪对实验性　大鼠ＫＯＡ关节软骨组织学评分、ＶＥＧＦ表达水平的　影响来探讨其防治早期ＫＯＡ的机制，为治疗膝骨性　关节炎提供有效途径和应用依据。　１材料和方法　１．１　材料　１．１．１　动物：健康３月龄雄性大鼠５０只，体重１８０　～２２０　ｇ，由广州中医药大学实验动物中心提供。　１．１．２主要试剂：磷酸川芎嗪片（丽珠集团利民制　药厂，国药准字：Ｈ４４０２４３４８）；塞来昔布（辉瑞制药　有限公司，国药准字Ｊ２０１４００７２）；木瓜蛋白酶（上海　源叶科技有限公司Ｓ１００１１，ＣＡＳ：９００１—７３－－４）；石蜡　（国药化学试剂有限公司）；苏木素伊红染色试剂盒　（北京雷根生物技术有限公司）；中强度ＲＩＰＡ裂解　液（ＦＤ００８；弗德生物）；蛋白酶抑制剂混合物　（ＦＤ１００１；弗德生物）；１００　ｍｍｏｌ／Ｌ　ＰＭＳＦ（ＦＤＩＯ０；弗　德生物）蛋白磷酸酶抑制剂混合物（ＦＤ１００２；弗德生　物）；ＢＣＡ蛋白定量试剂盒（ＦＤ２００１；弗德生物）；５　Ｘ蛋白上样缓冲液（ＡＲ１１１２；博士德）；预染蛋白　Ｍａｒｋｅｒ（Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ）；Ｔｒｉｓ—ｂａｓｅ（Ｖ９００４８３；Ｖｅｔｅｃ）；甘　氨酸（Ｇ８００８８０；Ｍａｃｋｌｉｎ）；过硫酸铵（Ａ８０１０３５；　Ｍａｃｋｌｉｎ）；ＳＤＳ（Ｂｉｏｓｈａｒｐ）；丙烯酰胺（０３４１—１　ｋｇ；　Ａｍｒｅｓｃｏ）；Ｎ．Ｎ一甲叉双丙烯酰胺（Ｎ８１３０８６．１００　ｇ；　Ｍａｃｋｌｉｎ）；ＰＶＤＦ膜０．４５　ｍ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）；ＰＶＤＦ膜　０．２２　Ｉｘｍ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）；脱脂奶粉（２３２１００；ＢＤ）；　ＴＷＥＥＮ　２０（Ｂｉｏｓｈａｒｐ）；显影定影试剂（国产）ＴＲＩｚｏｌ　Ｒｅａｇｅｎｔ（ＤＰ４２４；天根）。　１．１．３　主要设备：纯水仪（重庆艾科浦）；电子天平　（梅特勒一托利多仪器（上海）有限公司）；台式高速　温冰箱（西门子）；扫描仪（Ｃａｎｏｎ）；多功能酶标仪　（上海现科仪器有限公司）；灰度分析软件（Ｉｍａｇｅ　Ｊ）。轮转式石蜡切片机（德国Ｌｅｉｃａ）。　１．１．４溶液配制：转移缓冲液（２　Ｌ）：甘氨酸２８．８　ｇ，Ｔｒｉｓ４．８４　ｇ，甲醇４００　ｍＬ，加去离子水定溶至２　０００　ｍＬ；电泳缓冲液（２　Ｌ）：Ｔｒｉｓ　６．０６　ｇ，甘氨酸　３７．５４　ｇ，ＳＤＳ　２　ｇ，加去离子水定溶至２　０００　ｍＬ；ＴＢＳ　缓冲液（１　Ｌ）：１　ｍｏｌ／Ｌ　Ｔｒｉｓ—ＨＣ１（ｐＨ＝７．５）１０　ｍＬ　ＮａＣ１　８．８　ｇ加去离子水定溶至１　０００　ｍＬ；３０％丙烯　酰胺（１　Ｌ）：丙烯酰胺２９０　ｇ，ＢＩＳ　１０　ｇ，加去离子水充　分溶解后定溶至１　０００　ｍＬ；非磷酸化蛋白酶抑制剂：　每１　ｍＬ　ＲＩＰＡ试剂中加入５　Ｌ蛋白酶抑制剂和１０　ＩｘＬ　１００　ｍＭ的ＰＭＳＦ，混匀；磷酸化蛋白酶抑制剂：　每１　ｍＬ　ＲＩＰＡ试剂中同时加入５　Ｌ蛋白酶抑制剂、　１０　Ｌ　１００　ｍＭ的ＰＭＳＦ、５　Ｌ磷酸化蛋白酶抑制　剂，混匀。　１．２　方法　１．２．１　分组与造模：将实验动物依据随机分配的原　则分为正常组、模型对照组、高剂量组、低剂量组和　阳性对照组。每组１Ｏ只，除正常组外，均采用木瓜　蛋白酶关节腔注射建立大鼠ＫＯＡ模型。在无菌条　件下用０．９％ＮａＣＩ溶液配４％（Ｗ／Ｖ）木瓜蛋白酶溶　液，于４℃恒温冰箱储存，至实验前４　ｈ取出室温放　置。将大鼠腹腔注射１０％水合氯醛麻醉，麻醉成功　后双膝关节备皮、消毒、屈曲约４５。，从髌骨下缘前　内侧的膝眼向髁间窝方向进针，明显有落空感后，针　尖抵达股骨内侧髁再回撤２　ｍｉＴｔ，并注射木瓜蛋白　酶，分别向双侧膝关节腔注入４％木瓜蛋白酶０．２　ｍＬ。每隔３　ｄ注射１次，连续注射３次（即第１天、　第４天、第７天注射）。注射后１周，观察各组大鼠　膝关节外观，并在各组各取１只大鼠处死后，取关节　软骨行ＨＥ切片，验证造模是否成功。　１．２．２干预方法：验证造模成功后开始灌胃给药治　疗，高剂量组、低剂量组按人和动物间体表面积折算　的等效剂量比值计算，分别给予灌胃磷酸川Ｉ芎嗪片　Ⅲ１］　骨质疏松杂志２０１８年７月第２４卷第７期Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｏｓｌｅｏｐｏｒｏｓ，Ｊｕｌｙ　２０１　８，Ｖｏｌ　２４，Ｎｏ．７　ＴＭＰ　ｌ００和５０　ｍｇ／ｋｇ（分别相　于临床用药量的２０　和１０倍），每天用药１次；阳性对照组灌服塞来昔　布剂量为２４　ｍｇ／ｋｇ，每目定时给药１次，正常组、模　型组灌服等量的生理盐水，每天１次，连续灌胃６周　后处死，右膝胫骨平台行组织切片观察，左膝取软骨　组织进行Ｗｅｓｔｅｒｎ　Ｂｌｏｔ蛋白检测。所有ＳＤ大鼠均　喂养在恒温、恒湿的清洁环境巾，环境温度为（２５－４－　１）。Ｃ，湿度为６８％，每天１２　ｈ光照／黑暗，任意进食　饲养者提供的大鼠标准饲料和自来水。　１．２．３检测指标：①大体形态及切片染色观察。治　疗结束后，遵循安乐死的原则将各组实验鼠处死，解　剖各组实验鼠双侧膝关节并暴露关节软骨，肉眼观　察　节软骨光滑度、色泽、表面是否有糜烂及溃疡、　足　有纤维性增生及边缘是否有骨赘形成等。右侧　膝关节胫骨平台经４％多聚甲醛４℃同定、脱钙、脱　水、透明、浸蜡、包埋，制作成石蜡标本，行４～６　Ｉｘｍ　厚切　。Ｈｌ　：染色后在光镜下观察各组切片染色情　况，　ｌ｛改良Ｍａｎｋｉｎ法　对软骨组织结构、细胞、染　色　及潮线的完帑性评分，评分越高说日』】软骨退变　越　重。②Ｗｅｓｔｅｒｎ　Ｂｌｏｔ检测。取左侧膝关节胫，舀　平台火节软骨组织一８０℃保存备用，并根据说明书　制伞蛋白提取液，将软　目’组织置于全蛋白提取液　，利，『１】匀浆器于冰　破碎软骨组织。匀浆后，采用　｛　色法测定样品蛋　｛浓度。加入５×ＳＤＳ蛋　白ｊＩ一　缓．　液（５：１），１Ｏ０　ｏＣ煮沸５　ｍｉＩｌ。一２０℃保　存备川　分别至于浓缩胶和分离胶中电泳，３５０ｍＡ　转膜７０　ｉｎ。３７封闭液中封闭１　ｈ；将ＰＶＤＦ膜分别　放人装仃３　ｍＬ稀释后的ＶＥＧＦ抗体（稀释比例１：　１　０００，转膜条件：３００　ｍＡ恒流转膜３０　ｒａｉｎ，厂家：　Ａｂｃａｍ，货号：Ａｂ４６１５４），２５　ｍＬ　ＴＢＳＴ洗涤ＰＶＤＦ膜　３次，每次５　ｒａｉｎ；将ＰＶＤＦ膜放入含有３　ｍＬ辣根过　氰　嗨标记的稀释二抗溶液的小槽内，置于摇床　平缓摇动４０　ｍｉｎ（二抗：ＨＲＰ　Ｇｏａｔ　ａｎｔｉ—Ｒａｂｂｉｔ　ｉ若　』家：ＢＯＳＴＥＲ，货号：ＢＡｌ０５４，稀释比例：ｌ：　、，）ｎｎｎ，孵育惫件：享温孵育４０　ｍｉｎ）２５　ｍＬ　ＴＢＳＴ洗　涤ＰＶＤＦ膜３次，每次７　ｒａｉｎ；用化学发光显色后进　行图像分析，经软件分析，以ＶＥＧＦ／ｆ３一ａｃｔｉｎ比值表　示ＶＥＧＦ蛋白表达水平。　１．３统计学处理　应用ＳＰＳＳ１　９．０统计学软件进行数据分析，计量　资料数据以均数±标准差表示。若数据呈正态分布　且方差齐性，多组问比较采用单因素方差分析，多重　比较采用ＬＳＤ检验；若数据呈正态分布但方差不　齐，多组问比较采用Ｗｅｌｃｈ法和Ｂｒｏｗｎ—Ｆｏｒｓｙｔｈｅ法，　多重比较采用Ｄｕｎｎｅｔｔ　Ｔ３检验；以Ｐ＜０．０５为差异　有显著性意义。Ｗｅｓｔｅｒｎ　Ｂｌｏｔ检测及ＰＣＲ结果采用　ＧｒａｐｈＰａｄ　Ｐｒｉｓｍ　５软件进行数据分析，组问比较采用　双尾ｔ检验。Ｐ＜０．０５为差异具有统计学意义。　２　结果　２．１软骨组织学观察　实验结束后，除正常组外，各组均出现不同程度　的软骨损伤，主要以股骨内踝及内侧胫骨平台显著。　如表ｌ及图ｌ示，各组软骨Ｍａｎｋｉｎ评分中，川芎嗪　各剂量组和阳性对照组均高于正常组、且均低于模　型组（Ｐ＜０．０５），而阳性对照组评分低于川芎嗪低　剂量组，但高于川芎嗪高剂量组（Ｐ＜０．０５）。　表１实验结束后软骨组织Ｍａｎｋｉｎ评分（　±ｓ）　Ｔａｂｌｅ　１　Ｍａｎｋｉｎ　ｓｅｏＦｅ　ｏｆ　ｃａｒｔｉｌａｇｅ　ｔｉｓｓｕｅ　ｏｆ　ｒａｔｓ　ｉｎ　ｅａｃｈ　ｇｒｏｕｐ　注：与　常组比较，　Ｐ＜０．０５；与模型组比较，‘ｆＪ＜０．０５；与阳　性对照组比较　Ｐ＜０．０５　２．２　Ｗｅｓｔｅｒｎ　Ｂｌｏｔ检测软骨组织ＶＥＧＦ蛋白表达　结果　如图２、　３所示，正常组、川芎嗪各剂量组及　阳性对照组中软骨ＶＥＧＦ相对表达量均低于模型　组，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；与阳性对照组相　比，川芎嗪高剂量组ＶＥＧＦ表达量明显低于阳性对　照组（Ｐ＜０．０５）、而川芎嗪低剂量组其表达则高于　阳性对照组（Ｐ＜０．０５）。　３　讨论　中医认为ＫＯＡ属于“膝痹病”、“骨痹”、“痹证”　等范畴，并以肝肾亏虚为木、瘀血阻滞为标，而发病　早期以瘀血阻滞为关键病机。根据传统中医理论，　结合临床体会，我们认为治疗』一早期活血化瘀、是防　治ＫＯＡ发病的重要环节。中药川芎，归肝、胆、心　经，具有活血化瘀行气，祛风止痛功效。《本草纲　目》云“ＪＩ　Ｊ芎，血中气药也。肝苦急，以辛补之，故血　虚者宜之。辛以散之，故气郁者宜之”。川芎嗪（四　甲基毗嗪，ｌｉｇｕｓｔｒａｚｉｎｅ）是从中药川芎中提取的一种　有效活性生物碱，近年相关研究发现，具有改善关节　内微循环，降低骨内压作用，保护和修复早期ＯＡ关　一　Ｂ模型组×２　（’高荆最组ｘ２０（　）低剂犀组ｘ２０（　阳性对照组×２００　图ｌ　符　Ｈ　ｐ：诳　ＬＪｊ片　ｇ　ｒｔ‘　ｌＪＩｔｓ‘’ｔ　‘’　ｒｌｉｌｄ　ｔ、ｔｉｓｓｕｒ　ｉＩＩ　ｎＩ１＾ＩＩｔ’ｔ、ｉｌ（ｈ　ｇｌ　三　靛　圆Ｊ　常组　降低　ｊ　父１７炎火　液『Ｉｌ　Ｎ（）、ｔ＇ＧＥ２的水平，埘减　轻【）Ａ炎　仃ｌ　Ｉ　父　·定的作川…　小研究通过小瓜　作为诱　人鼠膝日．划，　’天１７炎的　‘　小　验采川小瓜　Ｉ　Ｉ　固模型组　目高剂量组　皿Ⅱ低剂量组　Ｅ：习阡＿Ｉ性组　法，　广泛川Ｊ　研究　溶液火　崆　射　作人鼠Ｋ（）Ａ模型，　ｆ：　６　Ｊ州Ｊ．　ｆ　ＨＩ　：染包切片软坩Ｍ；－ｌｌ，ｋｉｎ　分．Ｍａｎｋｉｎ　高．说［ｉ爿软　ｌｌｊ　ｊ＝＝ｌ，ｉｆ’ｊ　图２　符　久敝软ｒＩｊｌ川　、ＩＣＧＩ　、ｎ０　注：　０帧Ｊ　＜０．０５　分越　＜卡Ｉ！　越，　呕　其中『Ｆ常　＜ＪＩｌｆｆ　水平　嗪高剂　＜　性对照绀＜ＪＩ　≥嗪低刹　ｌＬ较，　１’＜Ｏ　０５：　＿ｊｌ：¨　＂照　Ｉ比较．／　组低（Ｐ＜０．０５）　这充分说『Ｊｌ】，川芎嗪能减轻父１　软骨退变【１Ｊ适　ｊ提高ｍ药浓度能更好的减轻火１７软　Ｆｉｇ．２　ＴＩ１ｐ　ｔ·ｘｐｒ｛、ｓｓ．Ｉ１『　、ｌ’ｔ　Ｉ　ｆ１ｆｌ、　’＇ｌ　Ｉｌ１ｌ［－ｃａｒｌｉｌａｇ￣　骨邀变程度　【Ｊｆ　ｒａｌｓ　ｉｎ　ｄｉｔｆ　·ＩＩ　ｎｌ‘　ｘ【ｌ¨ｉｍ，、ｎｔａｔ　ｇｔＯｌｌｐ￣　正常的　软坩ｌ大】促　锊，Ｌ成ｌ　子与抗　：，卜　（）＿、　成　ｆ处ｒ动念甲衡，　仃　Ｉ　管分布　Ｉｌｆ　ｌ　ＩＦ常组　ＶＦ（；Ｆ　情况Ｆ．　Ｉｈｉｊ　／软　ｌｒｄｊ　－ｈ　ｉ合处技＿｝｝｜｝膜中　管生成ｌＪＩ】　增　２模型组　３高剂量纰　４低剂萤组　多。‘，　其一Ｉ　Ｖ　（　Ｆ　１　ｌ：拨或　接的参卜了ｒ　ｔｆＬＩ．管新　的　天　，ｌ　·个环１　感觉ｆｆＩＩ　随苻新　㈠　：Ｋ入　『｛＿ａｃｔｍ　Ｉ（ＩＬ管新　既　敛结　的破坏，还导致疼痛的发　存ｆｌＪｆ究＆Ｉ　ｊ，Ｖ　ｐ：（　ｌ　０Ａ　ｒｆ１不仪能　导　５阳性对照缎　图３　软坩¨　｝　ＩＵ泳　ｍ僻，卜成．促进软中ｊ　ｉｌｆｔ竹　．还有＿ｌ丁能参　软　ＩＩ＿ｉｌＪ　Ｆｉｇ．３　Ｔ　｛‘ｈ　‘‘ＩｔｌｌＩｌＩ１…ｔ　Ｈｉ　ｔ　ｈａ，Ｉ【】ｆ＇Ｖ　，｝、ｔ·、『）ｒｃｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｌ　ｔ　ａＩ．ｔｉｌａｇｉ，ｍｕ　ｓ【ｌｒ　ｒｉｌｌｓ　ｉｎ　ｆ　１（’ｎＩ　ｔ．、ｌｌｌ　ｌｌｌ－ｌ１１ＩｌＪ　ｇｔ‘ｏｕｐｓ　化及软骨卜　｝｛　化的病变…　Ｊａｎｓｅｎ等　’研究　Ｐｆａｎ，ｌｅ，‘　发现，ＶＥＧＦ　ｆ７Ｊ　能参　ｊ　Ｊ　ＯＡ的早期改变，并且随替　软骨破坏的级圳越高，ＶＥ（．Ｆ的表达越高等　太丌』］，父　的严　内轼张，Ｊ　ｆ』ＩＪ显较低。并且　（）Ａ　节软什　“；　能够抑制壤顷降　．ｊ１１Ｊ制细胞凋　；减轻火节软　邀　身修复　小　题组　俊．ｊｉ｜ｌｌ　Ｊ‘促进软骨的自　Ｊ研究，Ｊ】　发肌川芎嗪能明　瞍成饥卡ＩＩ火　Ｈ＿ｒｏｌＩｉｌ｜ａ、Ａｔａｗｉａ等　究　叫，～ＥＧＤ　是促进ｍ管，Ｉ－成的重嘤　ｆ，　低氧　９Ｏ８　中国骨质疏松杂志ｓｔｅ２Ｏ１８年７月第２４卷第７期　Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｏｏｐｏ　！，　！　，　！　，　！　环境下表达增高。血管生成和炎症在ＯＡ进程中紧　密结合，炎症可以刺激血管生成，血管生成所致的压　迫力和缺氧可以促进炎症，也可以促进软骨细胞肥　大和软骨内骨化，影响到疾病的发展和疼痛　。本　实验研究发现、川芎嗪各剂量组及阳性对照组中软　骨ＶＥＧＦ相对表达量均低于模型组，差异有统计学　意义（Ｐ＜０．０５）；与阳性对照组相比，川芎嗪高剂量　组ＶＥＧＦ表达量明显低于阳性对照组（Ｐ＜０．０５）、　而川芎嗪低剂量组其表达则均高于阳性对照组。这　表明适当提高川芎嗪血药浓度，可能通过下调　ＶＥＧＦ的表达，从而减少软骨血管侵袭，降低炎症反　应，这可能是在某种程度上减轻关节软骨退变、修复　软骨损伤作用的机制之一。但ＶＥＧＦ表达下调后能　否进一步激活软骨细胞特异性的下游靶基因、实现　的具体途径如何，还有待进一步的研究。下一阶段　将重点研究川芎嗪含药血清调节软骨细胞的分子机　制，为川芎嗪在防治ＯＡ方面，提供新的科学依据和　实验方法。　【　参　考　文　献　】　中华医学会风湿病学分会．骨关节炎诊断及治疗指南　Ｊ］．中　华风湿病学杂志，２０１０，１４（６）：１４　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ　Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ．Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ａｎｄ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ　ｆ　Ｊ　１．Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ　Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ，２０１０，１４（６）：１４（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）　［２］　胥少汀，葛宝丰，徐印坎．实用骨科学［Ｍ］．北京：人民军医出　版社，２０１ｌ：１３３７　ｘｕ　ｓＴ，Ｇｅ　ＢＦ，Ｘｕ　ＹＫ．Ｐｒａｃｔｉｃａｌ　Ｏｒｔｈｏｐｅｄｉｃｓ［Ｍ］．Ｂｅｉｊｉｎｇ：　Ｐｅｏｐｌｅｇ　Ｍｉｌｉｔａｒｙ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｐｒｅｓｓ，２０１１：１３３７．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）　［３］　Ｌｏｅｓｅｒ　ＲＦ，Ｇｏｌｄｒｉｎｇ　ＳＲ，ＳｃａｎｚｅｌｌｏＣＲ，ｅｔ　ａ１．Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ：Ａ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｊｏｉｎｔ　ａｓ　ａｎ　ｏｒｇａｎ［Ｊ］．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ，　２０１２，６４（６）：１６９７—１７０７．　［４］　Ｍａｎｋｉｎ　Ｈｅｎｒｙ　Ｊ，Ｄｏｆｆｍａｎ　Ｈｏｗａｒｄ，Ｌｉｐｐｉｅｌｌｏ　Ｌｏｕｉｓ，ｅｔ　ａ１．　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ａｎｄ　ｍｅｔａｂｏｌｉｃ　ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｉｅｓ　ｉｎ　ａｒｔｉｃｕｌａｒ　ｃａｒｔｉｌａｇｅ　ｆｒｏｍ　ｏｓｔｅｏ·ａｒｔｈｒｉｔｉｃ　ｈｕｍａｎ　ｈｉｐｓ：ｉｉ．ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ　ｗｉｔｈ　ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ａｎｄ　ｍｅｔａｂｏｌｉｃ　ｄａｔａ『Ｊ］．Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｏｎｅ　ａｎｄ　Ｊｏｉｎｔ　Ｓｕｒｇｅｒｙ，１９７ｌ，５３（３）：５２３—５２７．　（５］　李应池，王晓霞，邱桐，等．川芎嗪对鼠骨关节炎软骨组织病　理学和ＩＬ一１口表达的影响［ｊ］．中国中医骨伤科杂志，２０１１，　１９（７）：７—１０．　Ｌｉ　ＹＣ，Ｗａｎｇ　ＸＸ，Ｑｉｕ　Ｔ，ｅｔ　ａｌ　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｌｉｇｕｓｔｒａｚｉｎｅ　ｉｕｊｅｅｔｉｏｎ　ｏｎ　ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＩＬ－１　Ｂ　ｉｎ　ｃａｒｔｉｌａｇｅ　ｉｎ　ｒａｔ　ｍｏｄｅｌ　ｏｆ　ｕｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ『Ｊ］．Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｔｒａｕｍａｔｏｌｏｇｙ＆Ｏｔｑ．ｈｏｐｅｄｉｃｓ，２０１１，１９（７）：７—１０．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）　［６］　Ｌｉａｏ　ＳＬ　Ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙ１ｐｙｒａｚｉｎｅ　ｒｅｄｕｃｅｓ　ｉｓｃｈｅｍｉｃ　ｂｒａｉｎ　ｉｎｊｕｒｙ　ｉｎ　ｒａｔｓ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｅｅ　Ｌｅｔｔｅｒ，２００４，３７２（１－２）：４０－４５．　［７］　王文瑞，刘宏泽，卫小春，等．川芎嗪防治膝关节软骨退变的　实验研究［Ｊ］．中国骨伤，２００４，１７（０２）：２Ｏ一２２．　Ｗａｎｇ　ＷＲ，Ｌｉｕ　ＨＺ，Ｗｅｉ　ＸＣ，ｅｔ　ａ１．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｓｔｕｄｙ　ｏｔ’　ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　ａｎｄ　ｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ　ｅｆ　ｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｌｉｇｕｓｔｒａｚｉｎｅ　Ｏ２２　ＯＡ　ｃａｒｔｉｌａｇｅ　ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｋｎｅｅ［Ｊ］．Ｃｈｉｎａ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｏｒｔｈｏｐａｅｄｉｅｓ　ａｎｄ　Ｔｒａｕｍａｔｏｌｏｇｙ，２００４．１７（２）：２０—２２．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）　［８］　王锁良，于民，吴施慧　关节内注射川芎嗪对兔膝关节软骨退　变的影响［Ｊ］．西安交通大学学报（医学版），２００６，２７（０１）：　６２Ｉ６５．　Ｗａｎｇ　ＳＩ　，Ｗａｎｇ　Ｍ，Ｗｕ　ＳＨ．Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｉｎｔｒａ—ａｒｔｉｃｕｌａｒ　ｉｉｇｕｓｔｒａｚｉｎｅ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｏｎ　ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ　ｃａｒｔｉｌａｇｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒａｈｂｉｔｇ　ｋｎｅｅ　［Ｊ］．Ｊｏｕ　ｒｎａｌ　ｏｆ　Ｘｉ　ａｎ　Ｊｉａｏｔｏｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ），　２００６＋２７（１）：６２－６５．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）　［１０］　梁桂洪，孙赫，黄宇新，等川芎嗪对实验性骨关节炎模　大　鼠关节液中ＮＯ和ＰＧＥ２的调节作用［Ｊ］．动物医学进展，　２０１４，３５（９）：６６—６９．　Ｌｉａｎｇ　ＧＨ，Ｓｕｎ　Ｈ，Ｈｕａｎｇ　ＹＸ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ｅｆｔｋ￣ｃｔ　ｏｆｌｉｇｕｓｔｒａｚｉｎｅ　Ｏ１２　ｔｈｅ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＮＯ　ａｎｄ　ＰＧＥ２　ｉｎ　ｔｈｅ　ｊｏｉｎｔ　ｆｌｕｉｄ　ｏｆ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ　ｍｏｄｅｌ　ｒａｔｓ［Ｊ］．Ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ｉｎ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ。　２０１４，３５（９）：６６—６９．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）　汀宗保，徐亚林，廖威明，等．小瓜蛋白酶孱导大鼠膝早期骨　关　炎软骨表面的电镜扫描［Ｊ］【｛１　组织ｌ一程研究，２０１４，　ｌ８（２）：１７７—１　８２．　Ｗａｎｇ　ＺＢ，Ｘｕ　ＹＩ　，Ｌｉａｏ　ＷＭ，ｅｔ　ａ１．（：ａｒｔｉｌａｇｅ　ｓｋｔｒｌ＇ａｃ￣．’（　ｌ　ｅａｒｌ￣　ｏｓｔｅｏａｒｌｈｒｉｔｉｓ　ｉｎ　ｒａｔｓ　ｉｎｄｕｃｅ　ｒＩ　ｂｙ　ｐａｐａｉｎ　ｕｎｄｅ　ｒ　ｓｃａｎｎｉｎｇ　ｅｌｅｃｈＯｉｌ　ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅｆ　Ｊ］．Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｕｕｒｎａ｜ｏｆ　Ｔｉｓｓｕｅ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　Ｉ／ｅｓ￣，ａｒｃｈ，　２０１４，１８（２）：１７７一Ｉ　８２（ｉ　２１　Ｃｈｉｎｅｓｅ）　［１２］　段文秀，汪宗保，张浩，等．木瓜蛋一酶诱导早．期膝骨荧　炎　校　大鼠软，肖　超微结构的动态变化（Ｊ］．巾闰组织１．　研究，　２０１５，１９（１８）：２７８９　２７９３．　Ｄｕａｎ　ＷＸ，Ｗａｎｇ　ＺＢ，Ｚｈａｎｇ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．Ｄｙｎａｍｉｃ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　ｒａｌ　ｃａｒｔｉｌａｇｅ　ｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｅａｒ１）＇ｐｒｏｃｅｓｓ　ｏｆ　ｐａｐａｌｎ—ｉｎｄｕｃｅｄ　ｋｎｅｅ　ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ［Ｊ］Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｔｉｓｓｕｅ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１５，１９（１８）：２７８９·２７９３．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）　［１　３］　Ｍａｐｐ　ＰＩ，Ａｖｅｒｙ　ＰＳ，ＭｃＷｉｌｌｉａｍｓ　Ｉ）Ｆ，ｅｔ　ａ１．Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｉｎ　ｔｗｏ　ａｎｉｍａｌ　ｍｏｄｅｌｓ　ｏｆ　ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ［Ｊ］　Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ　Ｃａｒｔｉｌａｇｅ，　２００８，ｌ６（１）：６１—６９．　［１４］　Ｗａｌｓｈ　ＤＡ，Ｂｏｎｎｅｔ　ＣＳ，Ｔｕｕｌｅｒ　Ｅ１　，ｅｔ　ａ１．Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｙｎｏｖｉｕｉｎ　ａｎｄ　ａｔ　ｔｈｅ　ｏｓｔｅｏｃｈｏｎｄｒａｌ　ｊｕｎｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ［ｊ］．　Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ　Ｃａｒｔｉｌａｇｅ，２００７，１５（７）：７４３—７５１．　［１５］　Ｍａｐｐ　ＰＩ．Ｗａｌｓｈ　ＤＡ　Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ａｎｄ　ｔａｒｇｅｌｓ　０ｆ　ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ　ａｎｄ　ｎｅｒｖｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｉｎ　ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ　ｌ　Ｊ］Ｎａｔｕｒｅ　Ｒｅｖｉｅｗｓ　Ｒｈｅｕｍａｔ￣ｄｏｇｙ，　２０１２，８（７）：３９０－３９８　［１６］　Ｄａｖｉｄ　Ａ　Ｗａｌｓｈ，Ｄａｎ　Ｆ　ＭｅＷｉｌｌｉａｍｓ，Ｍａｔｔｈｅｗ　Ｊ　Ｔｕｒｌｅｙ，ｅｔ　ａｌ　Ａｎｇｉ０ｇｅｎｅｓｉｓａｎ（１　ｕｅｒｖｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ　ａｔ　ｔｈｅ　ｏｓｔｅｏｅｈｏｎｄｒａｌ　ｊｕｎｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ　ａｒｔｈｒｉｔｉｓ　ａｎｄ　ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ［Ｊ］．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ，　２０１０．４９（１０）：１　８５２一Ｉ８６Ｉ．　［１７］　Ｍｕｒａｔａ　Ｍ，Ｙｕｄｏｈ　Ｋ，Ｍａｓｕｋｏ　Ｋ．Ｔｈｅ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｒｏｌｅ　ｏｆ　ｖａｓｃｕｌａｒ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ（ＶＥＧＩ￣　）ｉｎ　ｃａｒｔｉｌａｇｅ：ｈｏｗ　ｔｈｅ　ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ　ｆａｃｔｏｒ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　ｉｎｖｏｌｖｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｏｆ　ｏｓｔｅｏａｒｉｈｒｉｔｉｓ［Ｊ］？Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｃａｒｔｉｌａｇｅ，２００８，１　６（３）：２７９．　［１　８］　Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ　Ｓ，Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ—Ａｃｈｅｒｍａｎｎ　１　，Ｔａｋａｈａｓｈｉ　Ｋ，ｅｔ　ａｌ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ａｎｄ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｏｓｔｅｏｐｈｙｔｅ　ｔｂｒｍａｔｉｏｎ　ｄｕｒｉｎｇ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ＿Ｊ］．Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｃａｒｔｉｌａｇｅ，２００２，　中国骨质疏松杂志２０１　８年７月第２４卷第７期　Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓ，Ｊｕｌｙ　２０１８，Ｖｏｌ　２４，Ｎｏ．７　９０９　１０（３）：１８０．　ｓｙｎｏｖｉｏｃｙｔｅ—ｌｉｋｅ　ｃｅｌｌｓ　ｆｒｏｍ　ｐｌａｓｍａｃｙｔｏｉｄ　ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ　ｃｅｌｌｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｂｏｎｅ　ｍａｒｒｏｗ　ｉｎ　ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ　ａｒｔｈｒｉｔｉｓ　ａｎｄ　ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ．　Ｃｌｉｎ　Ｉｍｍｕｎｏ１．２Ｏ１１．１４０：２７６－２８３．　［１９］　Ｌｕｄｉｎ　Ａ，Ｓｅｌａ　ＪＪ，Ｓｅｂｒｏｅｄｅｒ　Ａ，ｅｔ　ａｌ　Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｖａｓｃｕｌａｒ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ　ｉｎｔｏ　ｋｎｅｅ　ｊｏｉｎｔｓ　ｉｎｄｕｃｅｓ　ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ　ｉｎ　ｍｉｃｅ［Ｊ］．Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｃａｒｔｉｌａｇｅ，２０１３，２１（３）：４９１４９７．　［２０］　Ｊａｎｓｅｎ　Ｈ，Ｍｅｆｆｅｒｔ　ＲＨ，Ｂｉｒｋｅｎｆｅｌｄ　Ｆ，ｅｔ　ａ１．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｖａｓｃｕｌａｒ　［２３］　Ａｔａｗｉａ　ＲＴ，Ｍｏｓｌｉ　ＨＨ，Ｔａｄｒｏｓ　ＭＧ，ｅｔ　ａ１．Ｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｓｉｌｙｍａｒｉｎ　ｏｎ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｍｅｄｉａｔｏｒｓ　ｉｎ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｌｙ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｅｎｉｇｎ　ｐｒｏｓｔａｔｉｃ　ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ：ｅｍｐｈａｓｉｓ　ｏｎ　ＰＴＥＮ，ＨＩＦ·１　ａｌｐｈａ，　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ（Ｖ　ＥＧＦ）ｉｎ　ｍｏｄｅｒａｔｅ　ｏｓｔｅｏａｒｔｂｒｉｔｉｓ　ｉｎ　ａ　ｒａｂｂｉｔ　ｍｏｄｅｌ［Ｊ］．Ａｎｎａｌｓ　ｏｆＡｎａｔｏｍｙ，２０１２，１９４（５）：４５２４５６．　［２１］　Ｐｆａｎｄｅｒ　Ｄ．Ｓｗｏｂｏｄａ　Ｂ．Ｃｒａｍｅｒ　Ｔ．Ｔｈｅ　ｒｏｌｅ　ｏｆ　ＨＩＦ一１　ａｌｐｈａ　ｉｎ　ａｎｄ　ＮＦ—ｋａｐｐａＢ．Ｎａｕｎｙｎ　Ｓｃｈｍｉｅｄｅｂｅｒｇｓ　Ａｒｃｈ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，２０１４，　３８７（１２）：１１３ｌ一１１４０．　ｍａｉｎｔａｉｎｉｎｇ　ｃａｒｔｉｌａｇｅ　ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ　ａｎｄ　ｄｕｒｉｎｇ　ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｏｆ　［２４］　Ｂｏｎｎｅｔ　ＣＳ，Ｗａｌｓｈ　ＤＡ．　Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ，ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ　ａｎｄ　ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ［Ｊ］．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ　Ｒｅｓ　Ｔｈｅｒ，２００６，８（１）：１０４．１０４．　［２２］　Ｈｉｒｏｈａｔａ　Ｓ，Ｎａｇａｉ　Ｔ，Ａｓａｋｏ　Ｋ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｙｐｅ　ｂ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ，２００５，４４（１）：７－１６　（收稿日期：２０１８４）３—２３；修回日期：２０１８４）４．１８）　（上接第８９５页）　就可以做挺胸运动，接着做腹横肌训练、五点支撑　法；等疼痛基本消失，指导病人进行体位转换训练后　就可以指导患者进行姿势矫正训练。功能锻炼处方　单卡片上设有指导、跟踪、监督的日期及责任人，并　对职责进行明确，有利于锻炼的落实。根据不同病　种制定的功能锻炼处方单还可以用于临床教学使　Ｚｈｏｕ　ＨＢ，Ｌｅｉ　Ｌ，Ｆｅｎｇ　ＮＰ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｆｆａｌｌ　ｒｉｓｋ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｏｆ　ｅｌｄｅｒｌｙ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ［Ｊ］．Ｃｈｉｎａ　Ｊ　Ｐｒｅｙ　Ｃｏｎｔｒ　Ｃｈｒｏｎ　Ｄｉｓ，２０１６，２４（５）：３５１—３５３（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）　［４］　刘艳，刘文文，王莲莲．老年人跌倒的危险因素及护理干预　［Ｊ］．现代医药卫生，２０１５，３１（５）：６８８４￣９０．　Ｌｉｕ　Ｙ，Ｌｉｕ　ＷＷ，Ｗａｎｇ　ＬＬ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ｆａｌｌ　ｒｉｓｋ　ｆａｃｔｏｒｓ　ａｎｄ　ｎｕｒｓｉｎｇ　ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｌｄｅｒｌｙ［Ｊ］．Ｊ　Ｍｏｄ　Ｍｅｄ　Ｈｅａｌｔｈ，　２０１５，３１（５）：６８８－６９０．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）　用。图文并茂的卡片让老年骨质疏松患者更乐于接　受，时时温故，使得医护患三方在核心稳定训练上的　配合力度大大加强，保证了核心稳定性训练的效果。　［５］　张景兰，陈宏，王燕．老年人跌倒危险凶素评估及护理干预研　究进展［Ｊ］．中国护理管理，２０１２，１２（８）：５７－６０．　Ｚｈａｎｇ儿．Ｃｈｅｎ　Ｈ．Ｗａｎｇ　Ｙ．Ｆａｌｌ　ｒｉｓｋ　ｆａｃｔｏｒｓ　ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ　ａｎｄ　４　结论　老年人跌倒是一个重要的公共卫生问题。加强　老年骨质疏松症患者的护理干预，增加核心稳定训　ｎｕｒｓｉｎｇ　ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ　ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ａｍｏｎｇ　ｔｈｅ　ｅｌｄｅｒｌｙ［Ｊ］．Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｎｕｒｓｉｎｇ　Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ，２０１２，１２（８）：５７＿６Ｏ．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）　［６］　吴青，朱汉民．骨质疏松基础防治措施对老年人２５一羟基维　生素Ｄ水平和下肢肌力及平衡功能的影响［Ｊ］　中华老年医　学杂志，２０１４，３３（１０）：１１３５—１１３８　Ｗｕ　Ｑ，Ｚｈｕ　ＨＭ．Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｂａｓｉｃ　ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ　ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ　ｏｎ　２５一ｈｙｄｒｏｘｙ　ｖｉｔａｍｉｎ　Ｄ　ｌｅｖｅｌ，ｌｏｗｅｒ　ｌｉｍｂ　ｍｕｓｃｌｅ　ｓｔｒｅｎｇｔｈ　ａｎｄ　ｉｔｓ　练，形成多手段联合护理，并通过卡片制作弱化核心　稳定训练动作难度，确保训练实施，能够提高老年患　者平衡能力和下肢肌力，有利于腰背部活动功能的　恢复，可以确实减少跌倒发生率。在前期研究的基　础上，制定更为规范和准确的老年骨质疏松症患者　护理路径，从而进行推广是我们后续工作的主要　内容　【　参　考　文　献　】　Ｄｕｃｋｈａｍ　ＲＬ，Ｍａｓｕｄ　Ｔ，Ｔａｙｌｏｒ　Ｒ，ｅｔ　ａ１．Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ　ｃｏｎｔｙｏｌｌｅｄ　ｔｙｉａｌ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ　ｏｆ　ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｈｏｍｅ—ｂａｓｅｄ　ｆａｌｌｓ　ｂａｌａｎｃｅ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ａｍｏｎｇ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｅｌｄｅｒｌｙ　ｐｅｏｐｌｅ［Ｊ］．Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｇｅｒｉａｔｒｉｃｓ，２０１４，３３（１０）：１１３５—１１３８．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）　［７］　Ｆｒａｎｋ　Ｃ，Ｋｏｂｅｓｏｖａ　Ａ，Ｋｏｌａｒ　Ｐ．Ｄｙｎａｍｉｃ　ｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌａｒ　ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｓｐｏｒｔｓ　ｒｅｈａｂｉｌｉｔａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｉｎｔ　Ｊ　Ｓｐｏｒｔｓ　Ｐｈｙｓ　Ｔｈｅｒ，　２０１３，８（１）：６２－７３．　［８］　Ｊｅｎｓｅｎ　ＭＰ，Ｋａｒｏｌｙ　Ｐ，Ｂｒａｖｅｒ　Ｓ．Ｔｈｅ　ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｐａｉｎ　ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ：ａ　ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｓｉｘ　ｍｅｔｈｏｄｓ［Ｊ］．Ｐａｉｎ，１９８６，２７　（１）：１１７—１２６．　［９］　Ｈａｇｉｎｓ　Ｍ．Ｌａｍｂｅｒｇ　Ｅ　Ｍ．Ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ　ｗｉｔｈ　ｌｏｗ　ｂａｃｋ　ｐａｉｎ　ｂｒｅａｔｈｅ　ｄｉｆｅｒｅｎｔｌｙ　ｔｈａｎ　ｈｅａｌｔｈｙ　ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ　ｄｕｒｉｎｇ　ａ　ｌｉｆｔｉｎｇ　ｔａｓｋ［Ｊ］．Ｊ　Ｏｒｔｈｏｐ　Ｓｐｏｒｔｓ　Ｐｈｙｓ　Ｔｈｅｒ，２０１１，４１（３）：１４１—１４８．　ｐｒｅｖｅｔｉ０ｎｅｘｅｒｃｉｓｒｐ　ｒ【】ｇｒａｍｍｅｓ　ｏｎ　ｂｏｎｅ　ｈｅａｌｔｈ　ｉｎ　ｏｌｄｅｒ　ｐｅｏｐｌｅ：ｔｈｅ　ＰｒｏＡｃｔ６５＋ｂｏｎｅ　ｓｔｕｄｙ［Ｊ］．Ａｇｅ　ａｎｄ　Ａｇｅｉｎｇ，２０１５，５５（５）：　４２１＿４３９．　［１０］　Ｋｏｌａｒ　Ｐ，Ｓｕｌｃ　Ｊ，Ｋｙｎｃｌ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｐｏｓｔｕｒａｌ　Ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｄｉａｐｈｒａｇｍ　ｉｎ　Ｐｅｒｓｏｎｓ　Ｗｉｔｈ　ａｎｄ　Ｗｉｔｈｏｕｔ　Ｃｈｒｏｎｉｃ　Ｌｏｗ　Ｂａｃｋ　Ｐａｉｎ　［２］　Ｂｏｎａｉｕｔｉ　Ｄ．Ａｒｉｏｌｉ　Ｇ，Ｄｉａｎａ　Ｇ，ｅｔ　ａ１．ＳＩＭＦＥＲ　Ｒｅｈａｂｉｌｉｔａｉｏｎ　［Ｊ］．Ｊ　Ｏｒｔｈｏｐ　Ｓｐｏ￣ｓ　Ｐｈｙｓ　Ｔｈｅｒ，２０１２，４２（４）：３５２—３６２．　Ｋｏｌａｒ　Ｐ，Ｓｕｌｃ　Ｊ，Ｋｙｎｃｌ　Ｍ．Ｓｔａｂｉｌｉｚｉｎｇ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｄｉａｐｈｒａｇｍ：　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ　ｉｎ　ｐ０ｓｔｍｅｎ０ｐａｕｓａｌ　ａｎｄ　ｓｅｎｉｌｅ　ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ　［Ｊ］．Ｅｕｒｏｐａ　Ｍｅｄｉｃｏｐｈｙｓｉｃａ，２００５，４１（４）：３１５－３２８．　ｄｙｎａｍｉｃ　ＭＲＩ　ａｎｄ　ｓｙｎｃｈｒｏｎｉｚｅｄ　ｓｐｉｒｏｍｅｔｒｉｅ　ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ［Ｊ］．Ｊ　Ａｐｐｌ　Ｐｈｙｓｉｏｌ，２０１０，１０９（４）：１０６４—１０７１．　［３］　周海滨，雷林，冯浓萍，等．社区老年骨质疏松患者跌倒的危　险因素研究［Ｊ］．中国慢性病预防与控制杂志，２Ｏｌ６，２４（５）：　３５１．３５３．　（收稿日期：２０１８－０１—１２；修回日期：２０１８＿ｏｌ－２８）