白花蛇舌草乙醇提取物对人肾癌细胞786-0体外增殖及小鼠肾癌细胞786-

山东医药２０１７年第５７卷第２３期　白花蛇舌草乙醇提取物对人肾癌细胞７８６—０体外　增殖及小鼠肾癌细胞７８６—０移植瘤生长的影响　张林超，赵俊峰，孙继建，潘世杰，高世玉，崔洪泉　（河南中医药大学第二附属医院，郑州４５０００２）　摘要：目的探讨白花蛇舌草乙醇提取物（ＥＥＨＤＨ）对人肾癌７８６－０细胞体外增殖及小鼠肾癌细胞７８６－０移植　瘤生长的影响。方法　①将人肾癌细胞７８６－０分为观察１…２　３　４组和对照组，观察１、２、３、４组分别加入终浓度为　１０、２０、４０、８０　ｍｇ／Ｌ的ＥＥＨＤＨ，对照组加入等体积培养液。培养２４、４８、７２　ｈ后采用ＭＴＩ＂法于４９０　ｎｍ处测量吸光　度值（ＯＤ４９ｏ值）。②取４２只昆明小鼠，随机分为７组，分别为模型组、ＥＥＨＤＨ低剂量组、ＥＥＨＤＨ中剂量组、ＥＥＨＤＨ　高剂量组、环磷酰胺组、ＥＥＨＤＨ中剂量联合环磷酰胺组、对照组，每组６只。除对照组小鼠正常饲养不处理外，余　３６只小鼠每只左后肢腋窝皮下接种０．２　ｍＬ肿瘤细胞悬液，２４　ｈ后称重。模型组灌胃等体积饮用水１４　ｄ；ＥＥＨＤＨ　低、中、高剂量组分别灌胃ＥＥＨＤＨ　５．０、１０．０、２０．０　ｇ／ｋｇ，１次／ｄ，共１４　ｄ；环磷酰胺组每２　ｄ灌胃１次２０　ｍｇ／ｋｇ环磷　酰胺，共灌胃７次；ＥＥＨＤＨ中剂量联合环磷酰胺组在１、３、５天灌胃环磷酰胺２０　ｍｇ／ｋｇ，第６天开始灌胃１０．０　ｇ／ｋｇ　的ＥＥＨＤＨ，１次／ｄ，共９次。末次给药２４　ｈ后给各组小鼠称重，处死动物称瘤重，计算ＥＥＨＤＨ低剂量组、ＥＥＨＤＨ　中剂量组、ＥＥＨＤＨ高剂量组、环磷酰胺组、ＥＥＨＤＨ中剂量联合环磷酰胺组抑瘤率。另分离各组小鼠胸腺、脾脏，精　密称重，计算胸腺指数、脾脏指数。结果　①相同培养时间条件下观察１…２　３　４组人肾癌细胞７８６－０的ＯＤ　值与　对照组相比均较低（Ｐ均＜０．０５）。人。肾癌细胞７８６－０的ＯＤ　。值随着培养时间的延长和ＥＥＨＤＨ剂量的增加而降　低（Ｐ均＜０．０５）。②实验结束时，模型组、ＥＥＨＤＨ低剂量组、ＥＥＨＤＨ中剂量组、ＥＥＨＤＨ高剂量组、环磷酰胺组、　ＥＥＨＤＨ中剂量联合环磷酰胺组瘤重分别为（２．３１－４－０．２８）、（１．９４±０．２２）、（１．５９±０．２６）、（１．５２　４－０．２３）、（０．９２±　０．２４）、（０．８６±０．２３）ｇ，ＥＥＨＤＨ低剂量组、ＥＥＨＤＨ中剂量组、ＥＥＨＤＨ高剂量组、环磷酰胺组、ＥＥＨＤＨ中剂量联合　环磷酰胺组抑瘤率分别为１６．０２％、３１．２２％、３４．２６％、６０．２０％、６２．７７％。ＥＥＨＤＨ中剂量联合环磷酰胺Ｑ值为　０．８７。模型组小鼠胸腺指数、脾脏指数与对照组相比均较高（Ｐ均＜０．０５）。环磷酰胺组小鼠胸腺指数、脾脏指数　与模型组相比均较低（Ｐ均＜０．０５）。ＥＥＨＤＨ低、中、高剂量组小鼠脾脏指数与模型组相比均较高（Ｐ均＜０．０５），　胸腺指数与模型组相比Ｐ均＞０．０５。ＥＥＨＤＨ中剂量联合环磷酰胺组胸腺指数、脾脏指数与环磷酰胺组相比均较　高（Ｐ均＜０．０５）。结论　ＥＥＨＤＨ在体外能明显抑制人肾癌细胞７８６－０的增殖，在体内能显著抑制小鼠。肾癌细胞　７８６－０移植瘤生长，其机制可能与ＥＥＨＤＨ提高脾脏功能有关。　关键词：白花蛇舌草；肾癌；免疫调节；抗肿瘤　ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－２６６Ｘ．２０１７．２３．００６　中图分类号：Ｒ２８５．５　文献标志码：Ａ　文章编号：１００２－２６６Ｘ（２０１７）２３－００２０４３４　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｅｔｈａｎｏＩ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　Ｈｅｄｙｏｔｉｓ　Ｄｉｆｕｓａｅ　Ｈｅｒｂａ　ｏｎ　Ｉｎ・ｖｉｔｒｏ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｒｅｎａｌ　ｃａｎｃｅｒ　７８６＿（）ｃｅｌｌｓ　ａｎｄ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　ｍｏｕｓｅ　ｒｅｎａＩ　ｃａｎｃｅｒ　７８６－（）ｃｅｌｌ　ｔｕｍｏｒ　ｘｅｎｏｇｒａｆｆ　ＺＨＡＮＧ　Ｌｉｎｃｈａｏ．ＺＨＡＯ　Ｊｕｎｆｅｎｇ，ＳＵＮ　Ｊｑｉａｎ，ＰＡＮ　Ｓｈｑｉｅ，ＧＡＯ　Ｓｈｉｙｕ，ＣＵＩ　Ｈｏｎｇｑｕａｎ　（Ｔｈｅ　Ｓｅｃｏｎｄ　Ａｆｉｌｆｉａｔｅｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｈｅｎａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ　４５０（３０２，Ｃｈｉａ）ｎ　Ａｂｓｔｒａｃｔ：０ｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｅｔｈａｎｏｌ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　Ｈｅｄｙｏｔｉｓ　Ｄｉｆｆｕｓａｅ　Ｈｅｒｂａ（ＥＥＨＤＨ）ｏｎ　ｉｎ—ｖｉｔｒｏ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｒｅｎａｌ　ｃａｎｃｅｒ　７８６－０　ｃｅｌｌｓ　ａｎｄ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　ｍｏｕｓｅ　ｒｅｎａｌ　ｃａｎｃｅｒ　７８６－０　ｃｅｌｌ　ｔｕｍｏｒ　ｘｅｎｏｇｒａｆｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ①　Ｒｅｎａｌ　ｃａｎｃｅｒ　７８６－０　ｃｅｌｌｓ　ｗｅｒｅ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　ｔｈｅ　ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ｇｒｏｕｐｓ　１，２，３，４，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ．Ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｏｂｓｅｒｖａ—　ｔｉｏｎ　ｇｒｏｕｐｓ　１，２，３，ａｎｄ　４　ｗｅｒｅ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ　ａｄｄｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｆｉｎａｌ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　１０，２０，４０，ａｎｄ　８０　ｍｇ／Ｌ　ＥＥＨＤＨ，　ｗｈｉｌｅ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ　ｗｅｒｅ　ａｄｄｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｖｏｌｕｍｅ　ｏｆ　ｃｕｈｕｒｅ　ｆｌｕｉｄ．Ｗｅ　ｍｅａｓｕｒｅｄ　ｔｈｅ　ＯＤ４９０　ｏｆ　４９０　ｎｍ　ａｔ　２４，　４８．ａｎｄ　７２　ｈ　ａｆｔｅｒ　ｃｕｈｕｒｅ　ｂｙ　Ｍ耵．（￣）Ｆｏｒｔｙ—ｔｗｏ　Ｋｕｎｍｉｎｇ　ｍｉｃｅ　ｗｅｒｅ　ｒａｎｄｏｍｌｙ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　７　ｇｒｏｕｐｓ：ｔｈｅ　ｍｏｄｅｌ　ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ　ｌｏｗ—ｄｏｓｅ　ＥＥＨＤＨ　ｇｒｏｕｐ，ｍｅｄｉｕｍ—ｄｏｓｅ　ＥＥＨＤＨ　ｇｒｏｕｐ，ｈｉｇｈ—ｄｏｓｅ　ＥＥＨＤＨ　ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ　ｃｙｃ１ｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ　ｇｒｏｕｐ，ｍｅｄｉｕｍ一　基金项目：河南省中医药科学研究专项课题（２０１４ＺＹ０２０５０）。　第一作者简介：张林超（１９７２一），男，研究生学历，医学硕士，副主任医师，主要研究方向为’肾肿瘤的诊疗及预防。Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｌｃｄｏｃｔｏｒ＠１６３．ｃｏｎ　２０　山东医药２０１７年第５７卷第２３期　ｄｏｓｅ　ＥＥＨＤＨ　ｃｏｍｂｉｎｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ　ｇｒｏｕｐ，ａｎｄ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ　ｗｉｔｈ　ｓｉｘ　ｉｎ　ｅａｃｈ　ｇｒｏｕｐ．Ｅｘｃｅｐｔ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｍｉｃｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ　ｗｅｒｅ　ｎｏｒｍａｌｌｙ　ｆｅｄ，ｔｈｅ　ｒｅｓｔ　ｏｆ　３６　ｍｉｃｅ　ｗｅｒｅ　ｉｎｊｅｃｔｅｄ　ｗｉｔｈ　０．２　ｍＬ　ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌｌ　ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ　ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓｌｙ　ａｔ　ｌｅｆｔ　ｈｉｎｄ　ｌｅｇ　ａｘｉｌｌａｅ　ａｎｄ　ｗｅｉｇｈｅｄ　ａｔ　２４　ｈ．Ｍｉｃｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｍｏｄｅｌ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ　ｗｅｒｅ　ｇｉｖｅｎ　ｔｈｅ　ｓａｌｎｅ　ｖｏｌｕｍｅ　ｏｆ　ｄｒｉｎｋｉｎｇ　ｗａｔｅ　ｂｙ　ｇａ—　ｖａｇｅ　ｆｏｒ　１４　ｄ．Ｍｉｃｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｌｏｗ．，ｍｅｄｉｕｍ一，ａｎｄ　ｈｉｇｈ—ｄｏｓｅ　ＥＥＨＤＨ　ｇｒｏｕｐｓ　ｗｅｒｅ　ｉｇｖｅｎ　５．０，１０．０，ａｎｄ　２０．０　ｇ／ｋｇ　ＥＥＨＤＨ，　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｏｎｃｅ　ａ　ｄａｙ，ｆｏｒ　１４　ｄ．Ｍｉｃｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｙｃｌ０ｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ　ｇｒｏｕｐ　ｗｅｒｅ　ｉｇｖｅｎ　２０　ｍｅ，／ｋｇ　ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ　ｏｎｃｅ　ｅｖｅｒｙ　２　ｄａｙｓ　ｆｏｒ　７　ｔｉｍｅｓ．Ｍｉｃｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｍｅｄｉｕｍ．ｄｏｓｅ　ＥＥＨＤＨ　ｃｏｍｂｉｎｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ　ｇｒｏｕｐ　ｗｅｒｅ　ｉｇｖｅｎ　２０　ｍｇ／ｋｇ　ＣＴＸ　ｏｎ　ｄａｙ　１，３，ａｎｄ　５，ｆｏｌｌｏｗｅｄ　ｂｙ　１０．０　ｇ／ｋｇ　ｏｎ　ｄａｙ　６，ｏｎｃｅ　ａ　ｄａｙ　ｆｏｒ　９　ｔｉｍｅｓ．Ａｔ　２４　ｈ　ａｆｔｅｒ　ｔｈｅ　ｌａｓｔ　ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，ｗｅ　ｋｉｌｌｅｄ　ｔｈｅ　ｍｉｃｅ　ｔｏ　ｗｅｉｇｈ　ａｎｄ　ｃａｌｃｕｌａｔｅ　ｔｈｅ　ａｎｔｉ—ｔｕｍｏｒ　ｒａｔｅ　ｉｎ　ｅａｃｈ　ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅｎ　ｗｅ　ｓｅｐａｒａｔｅｄ　ｔｈｅ　ｔｈｙｍｕｓｅｓ　ａｎｄ　ｓｐｌｅｅｎｓ，ｗｅｉｇｈｅｄ　ｐｒｅｃｉｓｅｌｙ．ａｎｄ　ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ　ｔｈｅ　ｔｈｙｍｕｓ　ｉｎｄｅｘ　ａｎｄ　ｓｐｌｅｅｎ　ｉｎｄｅｘ．Ｒｅｓｕｌｔｓ①Ｕｎｄｅｒ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅ　ＯＤ４９ｏ　ｏｆ　ｒｅｎａｌ　ｃａｎｃｅｒ　７８６－０　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ｇｒｏｕｐｓ　１，２，３，ａｎｄ　４　ｗａｓ　ｌｏｗｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｒｇｏｕｐ（ａｌｌ　Ｐ＜０．０５）．Ｔｈｅ　ＯＤｄａｎ　ｏｆ　ｒｅｎａｌ　ｃａｎｃｅｒ　７８６－０　ｃｅｌｌｓ　ｗａｓ　ｒｅｄｕｃｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｉｎｃｒｅｓａｅｄ　ｄｕｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ　ｎａｄ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ＥＥＨＤＨ　ｄｏｓｅ（ａｌｌ　Ｐ　＜０．０５）．②Ａｔ　ｔｈｅ　ｅｎｄ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ，ｔｈｅ　ｔｕｍｏｒ　ｗｅｉｇｈｔ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｍｏｄｅｌ　ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ　ｌｏｗ・ｄｏｓｅ　ＥＥＨＤＨ　ｇｒｏｕｐ，ｍｅｄｉｕｍ—　ｄｏｓｅ　ＥＥＨＤＨ　ｇｒｏｕｐｓ，ｈｉｇｈ—ｄｏｓｅ　ＥＥＨＤＨ　ｇｒｏｕｐ，ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ　ｇｒｏｕｐ，ａｎｄ　ｍｅｄｉｕｍ—ｄｏｓｅ　ＥＥＨＤＨ　ｃｏｍｂｉｎｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｙｃｌｏ－　ｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ　ｇｒｏｕｐ　ｗａｓ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ（２．３１±０．２８），（１．９４±０．２２），（１．５９±０．２６），（１．５２±０．２３），（０．９２±０．２４），　（０．８６±０．２３）ｇ．Ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｒａｔｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｌｏｗ—ｄｏｓｅ　ＥＥＨＤＨ　ｇｒｏｕｐ，ｍｅｄｉｕｍ—ｄｏｓｅ　ＥＥＨＤＨ　ｇｒｏｕｐｓ，ｈｉｇｈ—ｄｏｓｅ　ＥＥＨＤＨ　ｒｇｏｕｐ，　ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ　ｇｒｏｕｐ，　ａｎｄ　ｍｅｄｉｕｍ－ｄｏｓｅ　ＥＥＨＤＨ　ｃｏｍｂｉｎｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ　ｇｒｏｕｐ　ｗｅｒｅ　１６．０２％，　３１．２２％，３４．２６％，６０．２０％，ａｎｄ　６２．７７％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　Ｑ　ｖａｌｕｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｅｄｉｎａ・ｄｏｓｅ　ＥＥＨＤＨ　ｗａｓ　０．８７．Ｔｈｅ　ｍｏｕｓｅ　ｔｈｙｍｕｓ　ｉｎｄｅｘ　ｎａｄ　ｓｐｌｅｅｎ　ｉｎｄｅｘ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｏｄｅｌ　ｒｇｏｕｐ　ｗｅｒｅ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈｏｓｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｒｇｏｕｐ（ｂｏｔｈ　Ｐ＜０．０５）．Ｔｈｅ　ｍｏｕｓｅ　ｔｈｙｍｕｓ　ｉｎｄｅｘ　ｎａｄ　ｓｐｌｅｅｎ　ｉｎｄｅｘ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｈｙｍｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ　ｇｒｏｕｐ　ｗｅｒｅ　ｌｏｗｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈｏｓｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｏｄｅｌ　ｒｇｏｕｐ（ｂｏｔｈ　Ｐ＜０．０５）．　Ｔｈｅ　ｓｐｌｅｅｎ　ｉｎｄｅｘ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｌｏｗ一，ｍｅｄｉｕｍ一，ａｎｄ　ｈｉｇｈ－ｄｏｓｅｓ　ＥＥＨＤＨ　ｇｒｏｕｐｓ　ｗａｓ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｏｄｅｌ　ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜　０．０５），ａｎｄ　ｎｏ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ｗａｓ　ｆｏｕｎｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｍｏｕｓｅ　ｔｈｙｍｕｓ　ｉｎｄｅｘ　ａｓ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｏｄｅｌ　ｒｇｏｕｐ（Ｐ＞　０．０５）．Ｔｈｅ　ｍｏｕｓｅ　ｔｈｙｍｕｓ　ｉｎｄｅｘ　ａｎｄ　ｓｐｌｅｅｎ　ｉｎｄｅｘ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｅｄｉｕｍ—ｄｏｓｅ　ＥＥＨＤＨ　ｃｏｍｂｉｎｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ　ｇｒｏｕｐ　ｗｅｒｅ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ　ｇｒｏｕｐ（ｂｏｔｈ　Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　ＥＥＨＤＨ　ｃａｎ　ｓｉｎｇｉｉｆｃａｎｔｌｙ　ｉｎｈｉｂｉｔ　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｒｅｎａｌ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　７８６－０　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ａｎｄ　ｉｎｈｉｂｉｔ　ｔｈｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　ｍｏｕｓｅ　ｒｅｎａｌ　ｃａｎｃｅｒ　７８６－０　ｃｅｌｌ　ｔｒａｎｓ—　ｐｌａｎｔａｔｉｏｎ　ｔｕｍｏｒ　ｉｎ　ｖｉｖｏ．ｔｈｒｏｕｇｈ　ｔｈｅ　ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ｓｐｌｅｅｎ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｈｅｄｙｏｔｉｓ　Ｄｉｆｆｕｓａｅ　Ｈｅｒｂａ；ｒｅｎａｌ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ；ｉｍｍｕｎｏｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ；ａｎｔｉｔｕｍｏｒ　白花蛇舌草为茜草科耳草属植物白花蛇舌草的　１．１．２主要药品与试剂　白花蛇舌草购自河南省　全草，现代药理研究表明，白花蛇舌草具有抗肿瘤、　中医院药房（产地：广西），白花蛇舌草乙醇提取物　免疫调节、抗氧化、杀菌消炎等药理活性¨　，其中以　（ＥＥＨＤＨ）的制备参考文献　ｊ。新生牛血清购自杭　抗肿瘤作用尤为突出［２，３　３。肾细胞癌（肾癌）是泌尿　州四季青生物有限公司，０．２５％胰蛋白酶消化液购　系统常见肿瘤之一，对放、化疗均不敏感。早期肾癌　自Ｇｅｎｖｉｅｖｏ公司，ＨＥＰＥＳ购自Ｇｉｂｃｏ公司。　治疗手段主要采取手术切除治疗，可取得较好的疗　１．１．３主要仪器　ＣＯ　恒温细胞培养箱购自美国　效；对于晚期肾癌、转移肾癌的治疗效果目前仍不是　Ｔｈｅｒｍｏ公司；超净工作台购自中国苏州安泰空气设　很满意，故寻求新的治疗方法　Ｊ。用白花蛇舌草提　备厂；超纯水系统购自美国ＰＡＬＬ公司；双蒸水仪购　取物治疗肾细胞癌的疗效尚不明确。本研究观察了　自美国Ｒｅｓｅａｒｃｈ公司；倒置显微镜购自日本Ｃａｎｏｎ　白花蛇舌草乙醇提取物（ＥＥＨＤＨ）对人肾癌细胞　公司；Ｍｕｔｔｉｓｋａｎ　Ｆｃ型酶标仪购自赛默飞世尔（上　７８６－０体外增殖及小鼠体内肾癌细胞７８６－０移植瘤　海）仪器有限公司。　生长的影响，探讨用白花蛇舌草提取物治疗肾癌的　１．２　ＥＥＨＤＨ对人肾癌细胞７８６－０体外增殖能力的　可行性。现报告如下。　影响观察采用ＭＴＦ法。取人肾癌细胞７８６－０用　１材料与方法　含１０％灭活胎牛血清的ＲＰＭＩ１６４０培养液（含双　１．１材料　抗）在３７℃恒温、５％ＣＯ：饱和湿度培养箱中培养。　１．１．１试验动物和细胞来源　ＳＰＦ级ＢＡＬＢ／ｃ—ｎｕ　分别取对数生长期的肿瘤细胞，制成单细胞悬液，分　小鼠４２只，雌雄兼有，体质量１８—２５　ｇ，由北京维通　别接种于９６孔培养板，每孑Ｌ接种约５×１０　个细胞，　利华试验动物有限公司提供，动物合格证号：ＳＹＸＫ　培养２４　ｈ贴壁后，分为观察１、２、３、４组和对照组，　（豫）２０１１－０００２。人肾癌细胞７８６－０购自郑州鼎国　观察１、２、３、４组分别加入终浓度分别为ｌ０、２０、４Ｏ、　生物技术有限公司。　８０　ｍｇ／Ｌ的ＥＥＨＤＨ，对照组加入等体积的培养液；　２１　山东医药２０１７年第５７卷第２３期　每组设６个复孔。培养２４、４８、７２　ｈ后，取出培养　板，每孔加５　ｍｇ／ｍＬ的Ｍ１Ｔｒ２０　，在培养箱中继续　孵育４　ｈ，结束培养，弃去上清液，每孔加ＤＭＳＯ１５０　Ｌ，微孔板振荡器振荡１０　ｒａｉｎ，于４９０　ｎｍ处测量吸　光度值（０Ｄ４９ｏ值）。　２结果　２．１　ＥＥＨＤＨ对人肾癌细胞７８６－０体外增殖的影响　培养２４、４８、７２　ｈ后各组人肾癌细胞７８６－０的　ＯＤ　。值见表１。如表１可见，相同培养时间条件下　观察１、２、３、４组人肾癌细胞７８６－０的０Ｄ４９ｏ值与对　照组相比均较低（Ｐ均＜０．０５）。人肾癌细胞７８６－０　的ＯＤ　∞值随着培养时间的延长和ＥＥＨＤＨ剂量的　增加而降低（Ｐ均＜０．０５）。　表１培养２４、４８、７２　ｈ后各组人肾癌细胞７８６－０的　１．３　ＥＥＨＤＨ对小鼠体内人肾癌细胞７８６－０移植瘤　生长及胸腺、脾脏的影响观察　收集对数生长期人　肾癌细胞７８６－０，以无菌生理盐水调整细胞浓度至１　×１０。／ｍＬ，每只小鼠腹腔接种０．５　ｍＬ细胞悬液，制　成瘤源动物。接种６　ｄ后无菌条件下抽取瘤源小鼠　ＯＤ４９０值比较（　±　）　腹水，立即置于无菌管中，取少量腹水，台盼蓝染色　计数，选用活细胞数大于９５％的良好腹水，用生理　盐水稀释成２　Ｘ　１０　／ｍＬ细胞悬液，取４２只昆明小　鼠，随机分为７组，分别为模型组、ＥＥＨＤＨ低剂量　组、ＥＥＨＤＨ中剂量组、ＥＥＨＤＨ高剂量组、环磷酰胺　组、ＥＥＨＤｔｔ中剂量联合环磷酰胺组、对照组，每组　６只。除对照组小鼠正常饲养不处理外，余３６只　小鼠每只左后肢腋窝皮下接种０．２　ｍＬ肿瘤细胞　悬液，２４　ｈ后称重。模型对照组灌胃等体积饮用　水１４　ｄ；ＥＥＨＤＨ低、中、高剂量组分别灌胃ＥＥＨ．　ＤＨ　５．０、１０．０、２０．０　ｇ／ｋｇ，１次／ｄ，共１４　ｄ；环磷酰　胺组每２ｄ灌胃１次２０　ｍｇ／ｋｇ环磷酰胺，共灌胃７　次，ＥＥＨＤＨ中剂量联合环磷酰胺组在１、３、５天灌　胃环磷酰胺２０　ｍｇ／ｋｇ，第６天开始灌胃１０．０　ｇ／ｋｇ　的ＥＥＨＤＨ，１次／ｄ，共９次。末次给药２４　ｈ后给　各组小鼠称重，颈椎脱臼处死动物，切开肿瘤部　位，剥离瘤块，用滤纸吸净其上液体，瘤块称重，计　算ＥＥＨＤＨ低剂量组、ＥＥＨＤＨ中剂量组、ＥＥＨＤＨ　高剂量组、环磷酰胺组、ＥＥＨＤＨ中剂量联合环磷　酰胺组（公式中以治疗组指代）抑瘤率。抑瘤率　（％）＝（模型组平均瘤重一治疗组平均瘤重）／模　型组平均瘤重×１００％。计算Ｑ值评价中剂量　ＥＥＨＤＨ和环磷酰胺联合用药的效果是拮抗、相加　还是协同作用。Ｑ＝ＥＡＢ／［ＥＡ＋（１一ＥＡ）ＥＢ］，公　式中的ＥＡ为ＥＥＨＤＨ中剂量组的抑瘤率，ＥＢ为　环磷酰胺组的抑瘤率，ＥＡＢ为ＥＥＨＤＨ中剂量联　合环磷酰胺组的抑瘤率。Ｑ值０．８５～１．２５则二者　联合用药的效果为相加作用，Ｑ值＞１．２５则二者联　合用药的效果为协同作用，Ｑ值＜０．８５则二者联合　用药的效果为拮抗作用　Ｊ。另分离各组小鼠胸腺、　脾脏，精密称重，计算胸腺指数、脾脏指数。脏器指　数（ｍｇ／ｇ）＝脏器重量（ｍｇ）／体质量（ｇ）。　１．４统计学方法采用ＳＰＳＳ１８．０统计软件。数据　以　±Ｓ表示。组间比较采用方差分析。Ｐ＜０．０５　为差异有统计学意义。　２２　注：对照组比较，　Ｐ＜０．０５。　２．２　ＥＥＨＤＨ对小鼠体内人肾癌细胞７８６－０移植瘤　瘤重的影响实验结束时，模型组、ＥＥＨＤＨ低剂量　组、ＥＥＨＤＨ中剂量组、ＥＥＨＤＨ高剂量组、环磷酰胺　组、ＥＥＨＤＨ中剂量联合环磷酰胺组小鼠瘤重分别　为（２．３１±０．＂２８）、（１．９４－Ｉ－０．２２）、（１．５９±０．２６）、　（１．５２±０．２３）、（０．９２±０．２４）、（０．８６±０．２３）ｇ，ＥＥ—　ＨＤＨ低剂量组、ＥＥＨＤＨ中剂量组、ＥＥＨＤＨ高剂量　组、环磷酰胺组、ＥＥＩｔＤＨ中剂量联合环磷酰胺组抑　瘤率分别为１６．０２％、３１．２２％、３４．２６％、６０．２０％、　６２．７７％。ＥＥＨＤＨ中剂量联合环磷酰胺Ｑ值为　０．８７。　２．３　ＥＥＨＤＨ对荷人肾癌细胞７８６－０移植瘤小鼠胸　腺指数、脾脏指数的影响　各组小鼠胸腺指数、脾脏　指数见表２。由表２可见，模型组小鼠胸腺指数、脾　脏指数与对照组相比较均较高（Ｐ均＜０．０５）。环　磷酰胺组组小鼠胸腺指数、脾脏指数与模型组相比　均较低（Ｐ均＜０．０５）。ＥＥＨＤＨ低、中、高剂量组小　鼠脾脏指数与模型组相比均较高（Ｐ均＜０．０５），胸　腺指数与模型组相比Ｐ均＞０．０５，ＥＥＨＤＨ中剂量　组联合环磷酰胺组胸腺指数、脾脏指数与环磷酰胺　组相比均较高（Ｐ均＜０．０５）。　３讨论　肾癌约占我国全年新发恶性肿瘤的２．２％，发　病率呈逐年上升的趋势　Ｊ，其发病原因未明，而治　疗方案仍以手术为主，但对于晚期肿瘤、转移肿瘤目　前仍无有效的治疗手段。随着医学技术的发展，传　统中药材逐渐成为当今治疗肿瘤的重要手段。中药　材不仅对肿瘤具有显著的抑制作用，不易产生耐药　山东医药２０１７年第５７卷第２３期　表２各组小鼠胸腺指数、脾脏指数比较（ｉ±　）　组别　胸腺指数　（ｍｇ／ｇ）　模型组　环磷酰胺组　ＥＥＨＤＨ低剂量组　ＥＥＨＤＨ中剂量组　本研究结果显示，ＥＥＨＤＨ中剂量和环磷酰胺　联合用药抑制人肾癌细胞７８６－０小鼠移植瘤的Ｑ值　为０．８７，说明ＥＥＨＤＨ中剂量和环磷酰胺联合用药　对人肾癌细胞７８６－０小鼠移植瘤的抑制作用是相加　作用。　脾脏指数　（ｍｇ／ｓ）　理想的抗肿瘤药物应该能提高机体的免疫机　２　１　２　２　２　２　２　●　●　●　■　●　●　　■ＥＥＨＤＨ高剂量组　ＥＥＨＤＨ中剂量联合环磷酰胺组　５　４　５　６　６　对照组　●　●　●　●　●　能。本研究结果显示，实验结束时模型组小鼠胸腺　指数、脾脏指数较对照组增加，这可能与移植瘤形成　后机体免疫系统的反应有关；环磷酰胺组胸腺指数、　０　０　２　８　６　５　８　１　８　士　±　±　±　±　±　±　Ｏ　Ｏ　０　Ｏ　０　０　Ｏ　●　　●注：与对照组比较，４　Ｐ＜０．０５；与模型组比较，‘尸＜０．０５；与环　　２　３　３　３　２　３　２　６　２　６　８　６　６　磷酰胺组比较，　Ｐ＜０．Ｏ５。＃　｝　▲　　＃　十　＃　＃　▲　＃　７●　　６●　　８　●　８　●　８　●　８　●　５　●　性，并且对机体的损伤以及不良反应小。白花蛇舌　１　２　１　３　４　１　１　２　６　６　５　６　６　６　草属于茜草科植物，目前已广泛应用于肺癌、肝癌、±±±±±±±　１●　　Ｏ　●　１　●　ｌ　●　ｌ　●　１　●　Ｏ　●　　白血病、胃肠道癌等疾病的治疗，ｌ４　９　８　２　３　２　３　６　１　８　８　４　▲　▲｝　▲　｝　▲▲　＃　▲　并且取得良好的治　＃　疗效果。随着研究深入，发现白花蛇舌草具有较强　的抗肿瘤活性。张鹏等　发现白花蛇舌草核苷对　人非小细胞肺癌细胞株Ａ５４９及人红白血病细胞株　Ｋ５６２的抑制作用，证明白花蛇舌草有抗肿瘤活性。　曾永长等　采用白花蛇舌草提取物对直结肠癌细　胞ＨＣＴ．１１６、肺癌细胞Ａ５４９以及肝癌细胞ＨｅｐＧ２　进行体外抗肿瘤试验，发现中高剂量白花蛇舌草提　取物的抑瘤作用显著，体内实验发现能抑制肿瘤生　长，其可通过调节机体免疫实现抗肿瘤作用。Ｌｉｎ　等¨。。证实白花蛇舌草提取物可抑制结肠癌细胞增　殖，诱导细胞凋亡。　本研究先观察了ＥＥＨＤＨ对人肾癌细胞７８６－０　体外增殖能力的影响，结果显示观察１、２、３、４组人　肾癌细胞７８６－０的０Ｄ４９ｏ值与对照组相比均较低；人　肾癌细胞７８６－０的ＯＤ　帅值随着培养时间的延长和　ＥＥＨＤＨ剂量的增加而降低。说明在体外ＥＥＨＤＨ　对人肾癌细胞７８６－０增殖有明显的抑制作用，且此　抑制作用具有浓度时间依赖性。　抗肿瘤药物体内药效一般选实体瘤、腹水瘤、血　液肿瘤３种模型证实药效　，本研究选用人肾癌　细胞７８６－０移植瘤模型对ＥＥＨＤＨ的体内药效进行　观察。结果显示，实验结束时，模型组、ＥＥＨＤＨ低　剂量组、ＥＥＨＤＨ中剂量组、ＥＥＨＤＨ高剂量组、环磷　酰胺组、ＥＥＨＤＨ中剂量联合环磷酰胺组瘤重分别　为（２．３１±０．２８）、（１．９４±０．２２）、（１．５９±０．２６）、　（１．５２±０．２３）、（０．９２±０．２４）、（０．８６±０．２３）ｇ，ＥＥ—　ＨＤＨ低剂量组、ＥＥＨＤＨ中剂量组、ＥＥＨＤＨ高剂量　组、环磷酰胺组、ＥＥＨＤＨ中剂量联合环磷酰胺组抑　瘤率分别为１６．０２％、３１．２２％、３４．２６％、６０．２０％、　６２．７７％。ＥＥＨＤＨ高、中剂量组抑瘤率均高于　３０％，按照中药疗效评价标准　应当判定为有明显　的抑瘤效果。　脾脏指数显著降低，是由于环磷酰胺可以与其抑制　免疫系统功能，导致免疫器官萎缩。ＥＥＨＤＨ低、　中、高剂量组小鼠脾脏指数增加，说明应用ＥＥＨＤＨ　可以提高小鼠免疫功能，进而提高小鼠机体的抗肿　瘤能力。ＥＥＨＤＨ低、中、高剂量组胸腺指数与模型　组相似，其原因可能是ＥＥＨＤＨ能促进胸腺细胞向　脾脏和外周血释放，促使胸腺内成熟和较成熟的Ｔ　细胞减少　，是其增强机体细胞免疫功能的机制之　一。　参考文献：　［１］中华本草编辑委员会．中华本草［Ｍ］．上海：上海科技出版社，　１９９９：４３３．　［２］李文婷，戴紫函，程海波，等．白花蛇舌草活性成分及其协同抗　肿瘤机制研究进展［Ｊ］．世界科学技术冲医药现代化，２０１５，１７　（３）：６７０－６７４．　［３］毛宇，徐芳，徐小娟，等．白花蛇舌草抗肿瘤成分及其作用机理　研究进展［Ｊ］．现代预防医学，２０１５，４２（１７）：３１２８－３１３２．　［４］Ｓｉｅｇｅｌ　Ｒ，Ｍａ　Ｊ，Ｚｏｕ　Ｚ，ｅｔ　ａ１．Ｃａｎｃｅｒ　ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ，２０１４［Ｊ］．ＣＡ　Ｃａｎｃ—　ｅｒ　Ｊ　Ｃｌｉｎ，２０１４，６４（１）：９－１３．　［５］张振芳，赵宏伟，柴煊，等，白花蛇舌草对葡聚糖硫酸钠诱导的　慢性溃疡性结肠炎小鼠的影响［Ｊ］．中草药，２０１５，４６（１２）：　３５２０－３５２５．　［６］刘吉成，苏富琴，孙建宁．姬松茸复合多糖对环磷酰胺的增效作　用及其机制［Ｊ］．中国临床康复，２００６，１０（１９）：１１８　１２１１．　［７］赫捷，赵平，陈万青．中国肿瘤登记年报［Ｍ］．北京：军事医学科　学出版社，２０１１：７６－７８．　［８］张鹏，赵启韬，杨培民，等．白花蛇舌草核苷体外抗肿瘤作用实　验研究［Ｊ］．时珍国医国药，２０１２，２３（８）：１９０１—１９０２．　［９］曾永长，梁少瑜，罗佳波，等．白花蛇舌草提取物（ＨＤＮＦ）体内　外抗肿瘤实验研究［Ｊ］．中药材，２０１１，３４（４）：５９４－５９７．　［１０］Ｌｉｎ　ＪＭ，Ｌｉ　ＱＹ，Ｃｈｅｎ　ＨＷ，ｅｔ　ａ１．Ｈｅｄｙｏｔｉｓ　ｄｉｆｕｓａ　Ｗｉｌｌｄ．ｅｘｔｒａｃｔ　ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｎｄｕｃｅｓ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｖｉａ　ＩＬ－６一ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ　ＳＴＡＴ３　ｐａｔｈｗａｙ　ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．　Ｏｎｃｏｌ　Ｌｅｔｔ，２０１５，９（４）：１９６２—１９７０．　［１１］韩锐．抗癌药物研究与实验技术［Ｍ］．北京：北京医科大学、中　国协和医科大学联合出版社，１９９７：２７１１－２７２１．　［１２］诸葛定娟，程敏，董文彬，等．虫草多糖对荷瘤小鼠Ｔ淋巴细胞　及其亚群数量与功能的影响［Ｊ］．中国现代应用药学，２０１６，５　（３３）：５２８－５３３．　（收稿日期：２０１７－０３　２２）　２３