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沙门菌属和志贺菌属检验

2024-03-30 来源:好走旅游网
沙门菌属和志贺菌属检验

步骤和方法 1.形态观察

(1)革兰染色:沙门菌属细菌为革兰阴性细长杆菌。志贺菌属细菌为革兰阴性杆菌,散在分布。

(2)观察鞭毛染色标本片:镜下可见沙门菌属细菌具有周鞭毛。志贺菌属细菌无鞭毛。

2.菌落观察

(1)沙门菌属:将本菌接种在SS、MAC平板上经35℃孵育18~24h。由于本菌不分解乳糖并产碱,故在SS和MAC平板上形成无色、半透明、光滑湿润、凸起的小菌落,产生H2S的菌落可在SS平板上形成中心带黑褐色的小菌落。

(2)志贺菌属:将本菌接种在SS和MAC平板上经35℃孵育18~24h。由于志贺菌不分解乳糖,宋内志贺菌某些菌株可迟缓发酵乳糖,故其在SS平板和MAC平板上形成无色透明的、中等大小的菌落。除宋内志贺菌菌落外均为光滑型菌落。

3.生化反应

氧化酶试验:方法同大肠埃希菌。沙门菌属和志贺菌属细菌氧化酶试验均为阴性。初步试验鉴定:挑取志贺菌和沙门菌的单个菌落分别接种在KIA、

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MIU和硝酸盐培养基上,经35℃孵育18~24h,同时做触酶试验。其结果见表2—4。 表2-4 志贺菌属和沙门菌属的基本生化反应 KIA 斜底产面 层 气 MIU 氧化触硝酸盐H2S 动吲脲力 哚 酶 - +/- - - + + 酶 酶 还原 志贺菌 K A -/+ - 伤寒沙门菌 乙型副伤寒菌 K A - +/- + - - - + + K A + + + - - - + + 最终鉴定:须做全面生化反应和血清学试验。 4.血清学试验 (1)志贺菌属的分型鉴定:凡生化反应符合志贺菌属者均需做血清学鉴定。取1环志贺菌四种多价血清于载玻片一端,再取少许待测菌与之混合,同时在玻片另一端取待测菌与生理盐水混合对照。结果:对照呈均匀混浊,待检菌与志贺菌四种多价血清混合后,数分钟内出现肉眼可见的颗粒状凝集物即为阳性。继之用A、B、C、D群最常见的单价血清凝集定种。 2 / 6

结果判断、解释和报告:

①分离培养未见可疑菌落或经鉴定不符合志贺菌属鉴定依据者可报告“未分离到志贺菌属细菌”。

②经分离鉴定后符合鉴定依据者,可报告“分离出××志贺菌”,若进一步做多种生化反应与因子血清分型后,可报告:“分离出××志贺菌×型”。

(2)沙门菌属的分型鉴定:如果生化反应与形态学检查疑为沙门菌,可选用沙门菌的多价诊断血清进行玻片凝集。首先选用A~F组多价“O”诊断血清做玻片凝集试验。在试验时应以生理盐水作对照。血清凝集试验在5~10min内不出现凝集者可确定为阴性。但若生化反应比较典型,应考虑选用Vi凝集试验。若凝集,则用无菌生理盐水将菌洗下,制成浓厚的悬液,加热100℃、30min,再与A~F组多价“O”诊断血清做凝集试验。若与A~F组多价“O”血清发生凝集,应再与沙门菌单价因子血清分别做玻片凝集试验,以确定该菌株属于哪一组。一般先选用本地区检出率最高菌型的相应血清做玻片凝集反应。

若已确定哪一沙门菌种后,再分别先用H因子血清检查第I相抗原,然后检查第Ⅱ相抗原,最后确定该菌种属于哪一型沙门菌。

结果判断、解释和报告:

①分离培养未发现可疑菌落或经鉴定不符合沙门菌属细菌鉴定

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依据者,可报告“未分离出沙门菌”。 ②生化反应符合沙门菌、玻片凝集试验结果阳性,可初步报告为:“分离到××沙门菌”,或“×群沙门菌”。 5.肥达试验 (1)原理:用已知的伤寒沙门菌O、H抗原,甲、乙型副伤寒沙门菌的H抗原(PA、PB)与肠热症患者血清做定量试管凝集试验,以出现“2+”凝集的最高血清稀释度为效价,测定相应抗体含量,用以辅助诊断肠热症。 (2)试验方法:为单管稀释法。准备4排小试管,每排7支并标记,另取中号试管1支,加生理盐水3.8ml与被检血清O.2ml,混匀,即为1:20稀释,总量为4ml。然后取出2ml按每管0.5m1分别放人各排小试管中的第1支试管中。再于上述中号试管内加生理盐水2ml混匀,此种血清即为1:40稀释,吸取此稀释度血清2ml,按每管0.5m1分别加到各排小试管中的第2支试管中。以此类推连续稀释到各排小试管第6支试管为止,第7支小试管只加入0.5ml生理盐水做阴性对照。然后按表2-5操作。 表2-5血清学试验(肥达试验)方法 试验管(每管0.5ml稀释血清) 1:20 1:40 1:80 1:1:对照管 生理盐水 0.5 160 320 0.5 0.5 1:640 O抗原 0.5 0.5 0.5 0.5 4 / 6

H抗原 0.5 0.5 0.5 PA抗原 0.5 0.5 0.5 PB抗原 0.5 0.5 0.5 血清最终稀释 0.5 0.5 0.5 1:0.5 0.5 0.5 1:0.5 0.5 0.5 1:0.5 0.5 0.5 1:40 1:80 1:160 320 640 1280 - 振荡片刻,置于45℃水浴箱中2h或37℃水浴箱4h,取出置室温或放冰箱中过夜,次日观察并记录结果。 (3)结果判断解释和报告:先观察对照管,正确结果应无凝集反应,再分别与对照管比较观察各试管凝集情况。根据液体透明度和凝集块多少,以4+、3+、2+、+、-符号记录。 4+:上清液完全澄清,细菌凝集块全部沉于管底。 3+:上清液澄清度达75%,大部分细菌凝集成块沉于管底。 2+:上清液澄清度达50%,约50%细菌凝集成块沉于管底。 +:上清液体混浊,管底仅有少部分细菌凝集成块,上清液澄清度仅有25 %。 -:液体均匀}昆浊,无凝集块。 以呈现2+凝集现象的血清最高稀释倍数作为该血清的凝集效价。一般认为,伤寒沙门菌O抗体凝集价在1:80以上,H抗体在1:160以上,甲、乙、丙型副伤寒沙门菌凝集价在1:80以上才有诊断意义。 5 / 6

注意事项

1.加入诊断菌液时,由对照管开始往前,每管各加O.5ml。 2. 结果观察时不要振荡试管,先观察,必要时再轻摇试管使凝块从管底升起,最后按液体的清浊,凝块的大小进行记录,对照管(不凝集)与试验管同时对着光线往暗处看液体透明度和凝集块。

3.“H”凝集呈絮状,以疏松之大团铺于管底,轻摇试管即能荡起,而且极易散开。

4.“O”凝集呈颗粒状,以坚实凝片沉于管底,轻摇试管不易荡起,且不易散开。

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