生、制首乌醇提物对小鼠肝脏的影响

【摘要】 目的：观察炮制对何首乌醇提物不同剂量长期给药对小鼠肝脏的影响。方法：生首乌醇提物、制首乌醇提物按大、中、小剂量灌胃，连续60 d，对受试动物进行血液生化指标及病理组织学的检测。结果：生首乌醇提物小剂量肝指数、病理学积分与空白组比较差异有统计学意义(P<0.01)，其他各给药组仅见趋势;生、制首乌醇提物各剂量组血液生化指标与空白组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论：生首乌醇提物临床等效量连续给药60d，对小鼠肝脏存在损伤。

【关键词】 生首乌;制首乌;醇提物;肝脏损伤

[ABSTRACT] Objective： To observe influence of ethanol extract of Polygonum multiflorum on mice liver before and after processing. Methods： Ethanol extracts of raw and processed Polygonum multiflorum at large， medium and small dosages were repeat administered to mice for a consecutive 60 days， then blood and tissues of the sacrificed animals were detected and compared. Results： Compared with the control group， the liver index and pathology of small dosage group were significantly different from that of the negative control group， while other groups only showed similar tendency. No significant difference was observed between the negative control group and other groups regarding to the biochemical indicators. Conclusions： Consecutive administration of ethanol extract of raw Polygonum multiflorum for 60 days can induce liver damages in health mouse.

[KEY WORDS] Raw Polygonum multiflorum; Processed Polygonum multiflorum; Hepatic damage

何首乌为蓼科植物何首乌Polygonum multiflorumThunb.的干燥块根。生首乌具有解毒、截疟，润肠之功效，制首乌具有补益精血，固肾乌须发之功效。临床多以制首乌入药，治疗肝肾不足，精血亏虚、须发早白等诸症，现代还用于治疗动脉硬化症、高脂血症等。随着临床应用的增加，何首乌不良反应的临床报道逐年增多，尤其是导致的肝脏损伤问题，引起人们的关注[1]。已有研究认为何首乌的毒性成分可能为蒽醌类，主要存在于醇提物中，为进一步验证其毒性成分，本实验室选取生、制首乌醇提物进行长期给药。本实验前期测得制首乌醇提物LD50为606 g/kg，生首乌醇提物LD50为288 g/kg，本实验根据其临床用量，结合LD50，设定大、中、小剂量组，大剂量接近各自LD50的1/2，中剂量为1/4，小剂量为临床等效量，给小鼠连续灌服60 d，以观察生首乌醇提物、制首乌醇提物不同剂量对小鼠肝脏的影响。

1 实验材料

1.1 实验动物

KM小鼠，雌雄各半，体重18～22 g。购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，合格证：SCXK(沪)2007-0005。

1.1.2 实验药品

生、制首乌均购自安徽丰原铜陵中药饮片有限公司，为药典收录品种蓼科植物何首乌Polygonum multiflorum Thunb. 的干燥块根。生首乌批号：100116。制首乌批号：091113。生首乌醇提物制备：取生首乌药材加8倍量的90%乙醇回流提取2次，1 h/次，合并滤液，回收乙醇后，浓缩至含生药量为20 g/mL(批号：20100210)。制首乌醇提物制备：同生首乌醇提物制备工艺，含生药量28.7 g/mL(批号：20100209)。临用前配成所需

浓度。

1.1.3 实验试剂

天门冬氨酸氨基转移酶测定试剂盒：日本世诺临床诊断制品株式会社 批号：F025、F020;丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒：日本世诺临床诊断制品株式会社 批号：L922、F020;总胆红素试剂盒：北京利德曼生化股份有限公司，批号：00911LY;生理盐水：山东华鲁制药有限公司，批号：B08110807。

1.1.4 仪器

日立7020全自动生化仪：日本日立公司;JA5003电子天平：上海精密仪器有限责任公司。

1.2 实验方法

1.2.1 毒性实验

实验动物按体重随机分为空白组;生首乌醇提物大、中、小剂量组分别为150 g/kg、75 g/kg、2.4 g/kg;制首乌醇提物大、中、小剂量组分别为300 g/kg、150 g/kg、2.4 g/kg，每组8只。每日称重、灌胃给药，给药体积为0.25 mL/10 g，连续60 d。于第60天各组小鼠眼眶静脉丛取血，检测ALT、AST以及TBIL，称量肝脏重量，计算脏器指数。脏器指数计算公式：脏器指数(MG/10G)=脏器重量/体重×100。

1.2.2 病理组织学检查

取部分肝脏固定于10%福尔马林溶液内，常规取材，脱水，石蜡包埋，制片，HE染色，由病理专业人员在光学显微镜下阅片，检查肝细胞有无变性(水肿、脂变)、嗜酸性变、坏死;有无肝窦扩张、淤血，枯否氏细胞有无增生;门管区有无纤维组织增生及炎细胞浸润。根据病变轻重程度，依次半定量为轻微(±)0.5分，轻度(1+)1分，中度(2+)2分，重度(3+)3分，无病变组织为阴性0分。

1.3 统计学处理

计量资料以(x-±s)表示，用单因素方差分析进行组间比较，病理组织学检查评分采用秩和检验，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 对血液生化指标的影响

给药60 d后，各给药组与空白组ALT、AST、TBIL差异均无统计学意义(P均>0.05)。见表1。表1 生、制首乌醇提物对小鼠血液生化的影响

2.2 对脏器系数的影响

给药60 d后，与空白组相比，生首乌醇提物小剂量肝指数明显减小，差异有统计学意义(P<0.01)。见表2。

2.3 病理组织学检查

各给药组病变主要表现为肝细胞变性，变性的类型以肝细胞水肿为主，其次为脂变、

嗜酸性变。水肿或脂变的肝细胞主要围绕在中央静脉周围，少数小鼠出现点状或小灶状坏死。生首乌醇提物小剂量组与空白组相比，差异有统计学意义(P<0.01)，见表3、图1A～G。 表2 生、制首乌醇提物对肝指数的影响表3 生、制首乌醇提物对肝脏形态学的影响 图1 生、制首乌醇提物对小鼠肝毒性HE染色病理组织学检查的影响

3 讨论

近10年，何首乌及其制剂造成肝脏损伤的报道日趋增多，英国MHRA警告何首乌存在肝损害，澳大利亚、意大利、荷兰、韩国等国也相继有关于何首乌引起肝脏损伤的临床报道，其安全性问题引起了人们的重视[2,3]。国内鄢良春等[1]总结了近20年何首乌引起肝脏损伤的临床特点，主要包括黄疸、尿色变深、恶心、呕吐、乏力、虚弱、腹痛、食欲减退等，出现上述症状的时间是2周到3个月不等。多数患者服用的何首乌剂量较高，但一些患者在正常剂量范围(6～12 g)内服用何首乌相关药物也会引发肝脏损伤[4]。国内所报道的肝损伤均较轻，经对症治疗后多可恢复，或停药后即可自行恢复，偶有少数重症病例[5]。有关实验室研究方面，张瑞晨等[6]利用生、制首乌不同提取物对人正常肝细胞进行实验，发现脂溶性成分可使细胞阻滞于S期，并诱导细胞凋亡。胡锡琴等[7]应用制首乌水煎液长期给大鼠灌胃，大鼠在血液生化指标未见异常的情况下，肝脏出现脂肪变性，偶见肝细胞轻度萎缩或有炎细胞浸润。

本实验结果发现小鼠口服生、制首乌醇提物不同剂量60 d后，生首乌醇提物小剂量组肝指数明显下降，病理学积分与空白组有统计学差异，其他组仅见趋势，各给药组的生化指标与空白组比较均未见统计学差异。通常胞内酶ALT、AST在急性肝损伤、重度损伤时从肝细胞内释放入血，血清中ALT、AST能明显升高，而在慢性轻度损伤时，血清中酶升高不明显，提示何首乌产生肝脏损伤可能是非急性肝损伤，生化指标表现不显著。

在相同给药剂量下，生首乌醇提物组、制何首乌醇提物组引起的肝脏损伤无差异，可能传统的炮制对于何首乌致肝毒性的成分未起到减毒的作用，其炮制对化学成分的改变有待进一步深入研究。生首乌醇提物小剂量对肝脏的损伤最为严重，其毒性未呈现剂量依赖关系。传统中药化学成分和药理活性通常十分复杂，可能在不同的剂量、患者体质等因素作用下，会对机体产生不同的作用。临床用量下，何首乌的化学成分可能诱导肝药酶产生更多的活性代谢物质，这些代谢中间产物可能是毒性成分，随着剂量的增大，药物可能抑制肝药酶，产生活性代谢物质减少，毒性相应减少[8]。何首乌引起肝毒性还可能与机体自身状态有关，随着患者机体状态不同可能会产生不同程度的损伤，个体差异较大，何首乌具有免疫调节作用[9]，具备导致药物特异质反应或免疫介导肝损伤的条件。

本实验结果提示我们，在临床使用何首乌时应监测其产生肝损害的不良反应，积极探讨其毒性机制，为何首乌安全用药提供一定的参考。

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[6]佚名.李 玥 生、制首乌醇提物对小鼠肝脏的影响.中医药期刊学会http://www.yixue58.com/neike/html/?1712.html