一、填空题（每题2分，共50分）
1. 果蝇具有丰富的外表型态差异，包括______、_____、_____，_______与
______。
2. FISH技术的全称是____________________________。
3. 细菌转导实验中所用的菌株分别是：____________和_____________ ,用的
培养基是__________培养基。
4. 转座子引起的插入突变实验中所用的菌株分别是：_________ 和
_________。 5. 在提基因组DNA时，为保证DNA的完整性应该采取的步骤
有 ， ， 。
6. DNA凝胶电泳可以以 和 为凝胶介质，当DNA为＞ bp时,
用 作为介质，当DNA为＜ bp时，用 作为介质。
7. 抽提DNA纯化时，一般采用 抽提，采用 体积；沉淀DNA
用 ，体积 ；洗涤沉淀时用 。
8. DNA纯度一般用 比值来衡量，当比值在 表示DNA很纯，当 表
示 不干净，当 表示含 过多。
9. 衡量DNA得率或浓度时应该用 值来进行计算，公式表示为 。 10. 进行电泳加样时，要将DNA样品与 混合，其主要成分为 ，如要
加样10µlDNA要加 µl混合。
11. 在提取DNA时，酚∕氯仿的作用是 ，其比例应为 ，可选择使用酚
︰氯仿︰异戊醇 ，酚的饱和是用 ，在使用酚时应注意 ，一般用的酚需要 酚，要用 瓶子来装。
12. 酚是蛋白变性剂，用酚抽提细胞 DNA时，具有两方面的作用：(1) (2) 。
13. 提质粒DNA时，加入STE的作用是 ；加入溶液Ⅰ的作用是 ，现
象 ；加入溶液Ⅱ作用 ，现象 ，成分主要为 ，提供 环境；加入溶液Ⅲ作用是 ，现象 ，成分主要是 ，目的是 。
14. 质粒DNA有以下状态 、 、 、 ，进行电泳时
跑的最快在最前面，其次为 、 ，最后为 。 15. 实验过程中常用的枪头有以下几种： µl用 色枪头， µl用
色枪头， µl用 __色枪头。
16. 转化时用的感受态细菌需要用 处理，转化细菌时需要进行 ， 时间
为 秒，目的是 。
17. 胶回收DNA时需注意 ， ，应尽量将 足够小 彻底，其
中加入 与 ，质量比应为 。洗涤液中含有 ，洗脱液可以用 代替。
18. 酶切DNA时，如DNA不纯可通过 ， ， 进行克服。 19. 连接反应时，外源DNA与质粒DNA的摩尔比例应为 ，连接反应时体
系常用 。
20. 在酶切反应管加完各种反应物后，需要离心2秒钟，其目的
是 _______________和_______________。
21. 用乙醇沉淀 DNA时，通常要在DNA溶液中加入单价的阳离子，如 NaCl
和 NaAc，其目的是 。
22. PCR反应过程分为三个步骤，即 ， 和 。 23. PCR反应受 ， ， ， ， 等因素的影响。
24. 部分酶切可采取的措施有：(1) (2) (3) 等。
25. 限制性内切核酸酶通常保存在 浓度的甘油溶液中。 二、简答题（每题5分，共40分） 26. 请列出雌雄果蝇主要特征。
27. 简述染色体组型分析的分组排队原则。
28. 噬菌体效价和转导频率如何计算？如何计算Tn5易位插入突变总频率？ 29. 为了选择下面两种突变型，应对只含有葡萄糖、硫酸铵以及无机离子的基本
培养基作何调整?①leu—，亮氨酸营养缺陷型；②gal—，不能以半乳糖作为唯一碳源的突变型。
30. 请你用HindⅢ设计一个质粒的DNA酶切反应体系。 31. 简述一个完整外源DNA的克隆过程。
32. 一个携带有氨苄和卡那霉素抗性基因的质粒被仅在卡那霉索基因中有识别
位点的EcoRⅠ消化。消化物与酵母 DNA连接后转化对两种抗生索都敏感的E coli菌株。
(l)利用哪一种抗生素抗性选择接受了质粒的细胞? (2)怎样区分接受了插入酵母 DNA的质粒的克隆?
33. 你打算扩增下图所示的两段序列之间的 DNA，请设计一对引物序列。 5’-GACCTGTGGAAGC-----CATACGGGATTG-3’ 3’-CTGGACACCTTCG-----GTATGCCCTAAC-5’ 三、实验设计（10分）
种子在储藏过程中发生了某种变化，使得长成的水稻很容易被一种病原菌感染。据推测可能是某一化学诱导的突变导致一个具有抗菌功能的关键酶丢失。请设计一个实验验证这种推测是否正确，如何使种子重新获得对这种病的抗性?
提示：根瘤农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)具有通过其 Ti质粒将细菌 DNA带入植物基因组的独特功能。 附加题：谈谈你对该门实验课的建议或意见。
参考答案：
一、 填空题
1．眼色、眼形、翅形、刚毛的形状和数目 2．荧光原位杂交技术 3．gal+、gal-、 EMB 4．Tn5、 FD1006
5．低温、动作轻柔、抑制酶活
6．琼脂糖、聚丙烯酰胺，100、琼脂糖、100、聚丙烯酰胺 7．苯酚、一倍、无水乙醇、两倍、70%乙醇
8．OD260/OD280、1.8-2.0、〈1.8、DNA、〈1.6、蛋白质
9．OD、DNA浓度（μg/ml）=（OD260-OD330）×50μg/ml×稀释倍数（100） 10． 上样缓冲液、溴酚兰、1
11． 蛋白质变性、24：1、25：24：1、Tris、防止氧化、饱和、棕色 12． 蛋白质变性、细胞破壁
13． 缓冲液、溶菌、溶液浑浊、细胞破壁蛋白变性、溶液变粘稠、SDS、碱性、中和、絮状沉淀、乙酸、使染色体和蛋白质变性沉淀，使质粒DNA析出 14． ccc、oc、lc、l、ccc、oc、lc、l 15． 1000、蓝、200、黄、10、白
16． CaCl2、42℃热激、90、使质粒DNA转化入细胞
17． 去除杂质、提高得率、DNA胶切块、溶解、胶块、溶解液、1：3、70%乙醇、无菌水
18． 酚抽提、乙醇沉淀、加RNA酶 19． 1：1、T4DNA连接酶 20． 混匀、浓缩
21． 中和DNA电荷促沉淀 22． 变性、退火、延伸
23． 温度、Mg+、dNTP、模板、引物 24． 降低反应温度、缩短时间、减少用量 25． 50% 二、 简答题 26．雌果蝇
– 个体较大
– 腹部末端较尖
– 腹部背面有五条黑条纹
– 外生殖器较简单，有阴道板和肛上板等结构 – 腹部腹面有6个腹片
– 无性梳 雄果蝇
– 个体较小
– 腹部末端较钝
– 腹部背面有三条黑条纹，最后一条极宽，并延伸到腹面 – 外生殖器较复杂，有生殖弧、肛上板、阴茎等结构 – 腹部腹面有4个腹片 – 前腿跗节上有性梳 27．分组排队原则
着丝粒类型相同，相对长度相近的分一组 同一组的按染色体长短顺序配对排列 各指数相同的染色体配为一对 可根据随体的有无进行配对
将染色体按长到短排队，短臂向上 28．效价(单位/ml)=斑数x稀释倍数x取样量
转导频率=(转导子数/ml)/(噬菌体数/ml)x100%
Tn5易位插入突变总频率=F’因子上lac基因插入突变数（B板上菌落数）
/F’因子转移数（A板上菌落数）x100%
29．在①培养基中添加亮氨酸进行负筛选；在②培养基中以半乳糖代替葡萄糖进行负筛选
30．5’-GACCTGTGGAAGC- 3’
5’-CAATCCCGTATG- 3’ 三、 实验设计
提示：可根据抗菌酶基因合成引物对水稻种子基因组进行PCR克隆该基因片段，测序分析该基因是否突变或缺失。可以通过PCR克隆野生种子的该基因完整片段，与Ti质粒载体重组转化该基因缺陷的水稻种子，重新获得抗菌特性。
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