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蛋白质透析

2022-06-20 来源:好走旅游网
 蛋白质透析

在蛋白质的研究中,经常要进行蛋白质脱盐,即将蛋白质同其它盐类小分子分离开.蛋白质脱盐的方法很多,各有优缺点。以下仅介绍常用的透析和凝胶过滤方法,可根据实验条件和要求选用。

(一)蛋白质透析

一. 目的

学习透析的基本原理和操作。 二. 原理

蛋白质是大分子物质,不能透过透析膜而小分子物质可以自由透过。在分离提纯蛋白质的过程中,常利用透析的方法使蛋白质与其中夹杂的小分子物质分开。 三. 仪器、试剂、材料

1. 仪器

烧杯;玻棒;离心机;离心管;冰箱;电炉。 2. 试剂

1%氯化钡溶液;硫酸铵粉末;1mol/L EDTA;2%NaHCO3。 3. 材料

透析管(宽约2。5cm,长12-15cm)或玻璃纸;皮筋;鸡蛋清溶液:将新鲜鸡蛋的蛋清与水按1:20混匀,然后用六层纱布过滤. 四. 操作方法

1. 透析管(前)处理:先将一适当大小和长度的透析管放在1mol/L EDTA溶液中,煮

沸10分钟,再在2% NaHCO3溶液中煮沸10分钟,然后再在蒸馏水中煮沸10分钟即可.

2. 取5ml蛋白质溶液于离心管中,加4g硫酸铵粉末,搅拌使之溶解。然后在4℃下静

置20分钟,出现絮状沉淀。

3. 离心:将上述絮状沉淀液以1000转/分的速度离心20分钟.

4. 装透析管:离心后倒掉上清夜,加5ml蒸馏水溶解沉淀物,然后小心倒入透析管中,

扎紧上口。

5. 将装好的透析管放入盛有蒸馏水的烧杯中,进行透析,并不断搅拌。 6. 每隔适当时间(5-10分钟),用氯化钡滴入烧杯的蒸馏水中,观察是否有沉淀现象。 五. 结果处理

记录并解释实验现象。 六. 注意事项

1. 硫酸铵盐一定要充分溶解,才能使蛋白质沉淀下来。 七. 思考题

在透析袋处理过程中, EDTA和NaHCO3起何作用?

EDTA,二价金属离子螯合剂,除去钙镁等二价离子,防止他们跟目的样品螯合,影响活性

NaHCO3,中和乙酸,延长透析袋寿命.

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