体细胞Barr小体观察

体细胞Barr小体观察

体细胞Barr小体观察

一 .目的:

1.学习人类X染色体的检测方法；

2.认识雌性哺乳动物X染色体失活假说和剂量补偿效应的机制。

二．原理:

在XY型性决定的生物个体中，雌性个体的细胞中有两条X染色体，而雄性个体的细胞中仅有一条X染色体。由于两种个体在X染色体的数量上是不相等的，因而雌、雄个体X染色体上的基因产物也可能是不相等的。针对这一现象，Muller于1932年提出剂量补偿效应，说明可以使具有两份基因的个体和具有一份基 因的个体表现出相同表型的一种遗传机制的观点。1949年，M．L．Barr等人发现，在猫的雌性个体内，神经细胞核膜内缘有一染色很深的小体(后来定名为x小体或Barr氏小体)，而雄性个体细胞中则没有。以后在人类女性口腔上皮细胞中，也发现了类似的结构。经研究认为这是失活的异固缩状态的x染色质，并发现它属于延迟复制的染色体。X小体的数目在正常女性中是X染色体数目减去一。经观察，X小体一般1-1.5微米，呈三角形或卵圆形。

20世纪60年代以来，不少学者曾提出了一些假说来解释这一现象。其中比较著名的假说是由M．F．Lyon于1961年提出的Lyon假说（Lyon hypothesis）：

1.正常雌性哺乳动物的体细胞中，两条X染色体中只有一条在遗传上有活性，另一条在遗传上无活性。

2.X染色体的失活是随机的。

3.失活发生在胚胎发育早期，X染色体一经失活，其后代细胞中该染色体均处于失活状态。

4.杂合体雌性在伴性基因的作用上是嵌合体。

一些学者以另一些事实来反对Lyon的假说。因为X染色体的失活是个比较复杂的生物学问题，目前对这一现象仍然存在着一些难以解释的疑点。例如，是否所有组织的全部细胞中，在任何时间都存在这种X小体，失活的X小体是如何进行复制的?等等。虽然对X小体存在着一些不同看法，但目前X染色质的检查，在医学遗传的研究中，临床和法医诊断上仍具有一定的意义。

三．材料：

人体口腔上皮细胞或毛囊细胞 四．器具和药品：

器具：显微镜、载 片、盖片、无 菌牙签等。

药品： (1)1N或5N盐酸或浓盐酸和95％乙醇 1：1的混合液

(2)改良苯酚品红染色液 五．过程

1．口腔粘膜细胞Barr氏小体显示方法：

（1）取材与固定

实验前用可食用水漱口，然后以无菌牙签刮取口腔颊部粘膜(第一次的刮取物弃去)，将刮取物均匀涂于载玻片上，放在空气中干燥。或以酒精灯外焰烤干，注意材料不可过热加温。

（2）染色与观察：用改良苯酚品红染液染色10－15分钟，倾斜载玻片，倒掉染液。用吸水纸轻轻擦拭干载玻片上的染液。放于显微镜下观察。

注意事项：

在制作的玻片标本中，选择细胞轮廓清楚、染色清晰，核大，核质呈均匀细网状的细胞100个，统计巴氏小体的频率(可与男性细胞对照观察)。

2．发根毛囊细胞Barr氏小体显色方法： 取材和染色

取带有发根的头发，长2—3cm，围绕发根部的1圈长2—3mm的白色物体，即是毛囊细胞团，将其放置于载片上。在毛囊细胞处滴加一滴浓盐酸和95％乙醇1：1的混合液。约10min以后，可使毛囊细胞得到充分软化。以清水冲洗2-3遍，将酸解液冲洗干净。拿起上述发根的梢部，将其上毛囊细胞轻轻蹭于另一干净载片上即可达到转移的目的。若用刀片或镊子将毛囊细胞刮下，可造成细胞的堆积，同样会出现多层细胞的现象。另外，l根发根的毛囊细胞可以转移到3—4张载片上，以达到充分利用实验材料的目的。观察时又可以看到清晰的单层涂布细胞，便于观察统计。此时，可滴加1滴染液于待

测细胞上，注意染液不可过多，以免细胞流失。约10min后，加盖玻片即可进行观察。

３．观察：

巴氏小体为女性细胞中所特有的染色体结构，是l条X染色体呈异固缩状态所形成，各实验室所统计的观察率不尽相同，从30％一50％不等，有些实验室中在男性的细胞中发现X小体有2%的出现率，但小体结构不规范、典型。巴氏小体常位于核膜内侧。直径为lμm左右，其形状有微凸形、三角形、卵形、短棒形和双球形等。观察时需注意巴氏小体与细胞的比例。正常女性细胞中仅可观察到1个巴氏小体，而正常男性细胞中无巴氏小体或仅在个别细胞中有不典型的巴氏小体存在。

六： 注意事项

1．在实验中取材时应该注意安全；

2．如果用毛囊细胞进行试验，采样前应清 洗头发，因出油后拔取毛发时不易带出毛囊细胞。

七：实验报告

1.你统计的X小体的频率如何？为什么不是所有的细胞都可观查到X小体？

2.请根据所学知识及观察结果填写下表： X小体数目 性别表现 性染色体组成 体细胞中染色体总数 0 2 3 3

正男性常 正常女性 有缺陷的男性 有缺陷的女性 有缺陷的男性 有缺陷的女性 有缺陷的男性 有缺陷的女性 XXX