线粒体活体染色及观察

小白鼠肝细胞线粒体的超活染色及观察

一、 实验目的

掌握动物细胞活体染色的原理和相关的技术。

二、 实验原理

活体染色是指对生活有机体的细胞或组织着色但又无害的一种染色法。它的目的是显示生活细胞内某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。

詹纳斯绿B（Janus green B）是毒性较小的碱性染料，可专一的对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。

三、 实验用品

1. 材料：

小白鼠肝脏 2. 试剂：

Ringer溶液：NaCl 0.85g + KCl 0.25g + CaCl2 0.03g + 蒸馏水100ml 1%、1/5000詹纳斯绿B溶液：称取50mg詹纳斯绿B溶于5ml Ringer溶液中，30-40℃加热，使之溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。取1%原液1ml加入49ml Ringer溶液，即为1/5000工作液装入棕色瓶中备用。 3. 器材：

显微镜、解剖盘、剪刀、吸管、载玻片、盖玻片、擦镜纸

四、 实验步骤

1. 用断头法处死小白鼠，置于解剖盘中，剪开腹腔，取出肝脏，选取边缘

较薄的肝组织0.5cm2，放入小烧杯中，用Ringer液冲洗去血污。 2. 滴加1/5000詹纳斯绿B溶液于双凹片的凹穴中，再将上述洗净肝组织移

入染液，染色20-30分钟，以细胞块边缘被染成蓝绿色为准。（注意：染色时要使组织块上面部分半露在染液外，不可完全淹没，以便使线粒体酶系得到氧化）

3. 吸去染液，将肝组织重置小烧杯中，滴加Ringer溶液0.5ml，用剪刀将

组织充分剪碎制悬液。

4. 取上述细胞悬液滴片，加盖玻片，高倍镜下观察。

五、 实验结果

在高倍镜下观察到了小鼠肝细胞，每个细胞中都有一些被染成蓝绿色的球状结构，为线粒体。如下页图所示：

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细胞生物学实验报告

高倍镜下线粒体超活染色图

分析与讨论

1. 在取肝脏时要注意大小，大概为指甲盖的1/3左右为宜，且不宜太厚，

防止里面的线粒体不宜被染色，影响实验结果的观察。

2. 在染色过程中要注意不可把肝脏小块全部浸没在染色液下，这样会使肝

脏小块进行有氧呼吸，则詹纳斯绿B无法被细胞色素氧化酶充分氧化，导致实验失败。

3. 染色过程中要注意滴加染液，防止染色液挥发干，使肝脏小块充分染色。4. 观察时要注意区分肝细胞和红细胞，肝细胞体积相对于红细胞来说较大。

2

肝细胞

线粒体

红细胞

六、