抗高浓度葡萄糖阻遏的纤维素酶高产菌的选育

维普资讯 http://www.cqvip.com 第３４卷第４期　山东大学学报（自然科学版）　１９９９年１２月　Ｄｅｃ．１９９９　Ｖｏ１．３４　Ｎｏ．４　ｊｏＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＳＨＡＮＤＯＮＧ　ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ　抗高浓度葡萄糖阻遏的纤维素　酶高产菌的选育　宋小炎　宋桂经　孙彩云　刘陶陶　韩　峰　（山东大学微生物技术国家重点实验室，济南２５０１００）　摘要　以本室保存的一株纤维素酶产量较高的拟康氏木霉为出发菌株，经紫外　诱变处理，用葡萄糖（梯度浓度）纤维素双层平板选育，在含葡萄糖（４％）纤维素　双层平板上获得一株葡萄糖浓度高达１０％仍能产生纤维素水解透明圈的突变　株ＵＶⅢ．培养６　ｄ，干曲的ＣＭＣ酶活、ＦＰ酶活和８Ｇ酶活分别可达１１４５．７　ｕ／　ｇ、５５．６　ｕ／ｇ和２４　ｕ　．分别是出发株的２．４倍、３．４倍和１２．６倍．　关键词纤维素酶；抗阻遏；葡萄糖　中图分类号Ｑ９３９　将可再生性资源纤维类废弃物转化成有用物质的纤维素酶，一直受到世界各国的普　遍重视．纤维素酶的生产受诱导［卜３］和阻遏的双重调节，在发现利用诱导提高酶产量不现　实的同时，许多研究者通过筛选抗阻遏突变株的方法提高了酶产量．酶合成的反馈阻遏指　酶的催化产物或代谢途径的末端产物，使该酶合成受阻的过程．阻遏物通过与调节基因产　生的阻遏蛋白结合而增加它与操作基因的亲和力，从而使在操作基因上游已与启动基因　结合的ＲＮＡ聚合酶不能通过操纵基因，所以不能达到结构基因上的结合位点，导致转录　不能进行，酶蛋白的合成也因而受阻．　阻遏蛋白基因和阻遏蛋白结合位点的基因序列［４－５］在产生纤维素酶的真菌中已经观　察到，且编码五碳代谢物结合的阻遏蛋白的基因还得以克隆．［　］而抗阻遏突变株的调节基　因遭到破坏，不能产生阻遏蛋白，则阻遏物一阻遏蛋白复合物不能形成，从而不能结合到　操纵基因上，ＲＮＡ聚合酶顺利通过操纵基因，转录得以进行，因而更有利于酶的产生．　最著名的是从Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｒｅｅｓｅｉ　ＱＭ６ａ菌株出发的系列突变株如ＱＭ９４１４、Ｃ一　５、　ＮＧ１４，【　Ｊ以及从ＱＭ９４１４的单克隆分离株ＫＹ７４６及其诱变选育得到的抗阻遏突变　株ＫＤＤ一１０和ＤＧＤ一１６、　Ｊ　Ｎ一２５、Ｋ１４、ＫＤＲ１１和ＫＤＲ２７，【１０Ｊ每次菌种选育后产酶　活性得到了一定的提高．其它真菌的研究也有类似结果．拟康氏木霉Ｒｉｆａｉ菌株ＡＳ３．　３００２和木３经诱变后各得到的突变株ＥＡ３—８６７和Ｎ２—７８，对阻遏敏感性降低，ＣＭＣ　酶活和滤纸酶活分别提高了１４．６倍和５．３倍．［ｕ］本实验通过筛选抗高浓度葡萄糖阻遏　突变株ＵＶｌｌ１，使纤维素酶的合成能力成倍提高．　维普资讯 http://www.cqvip.com 第４期　宋小炎等：抗高浓度葡萄糖阻遏的纤维素酶高产菌的选育４８９　１　材料与方法　１．１菌种　出发菌株为本室分离保存的拟康氏木霉Ｔｒｉｃｈｏｄｒｍａ　ｐｓｅｕｄｏｋｏｎｉｎｇｉｉ　ＴＨ．　１．２培养基配方及培养条件　１．２．１斜面培养基：麸皮１０　ｇ加水适量煮沸３０　ｍｉｎ，过滤取汁，定容至１０％，加琼脂粉　１．５％，分装灭菌，备用．　１．２．２平板分离培养基（每皿）：下层培养基为含１．３％琼脂和一定浓度葡萄糖，用Ｍａｎ—　ｄｅｌｓ液调制而成；［　］上层培养基含１．０％球磨纤维素粉ＣＦｌｌ、１．３％琼脂、０．２％的Ｔｒｉ—　ｔｏｎ　Ｘ一１００、加与下层相同浓度的葡萄糖液．　１．２．３固体培养基：以４：６的麸皮和玉米皮，按固液比为１：１加入含１．５％硫酸铵、１．３％磷酸　二氢钠、０．５％ＭｇＳＯ４・７Ｈ２０、０．３％ＣａＣＩ２的无机盐溶液．　１．２．４培养条件：２８～３０℃．　１．３粗酶液制备　按固体曲干重加入适量的自来水，浸泡６０　ｍｉｎ，纱布过滤并３０００　ｒｐｍ离心１５　ｍｉｎ，　取其上清液．　１．４纤维素酶活力测定　１．４．１　ＣＭＣ酶活：取０．９　ｍｌ含ＣＭＣ—Ｎａ（Ｓｉｇｍａ产品）１．１　ｍｇ／ｍｌ的醋酸一醋酸钠缓　冲溶液（ｐＨ４．８），５０℃保温２　ｍｉｎ，加适度稀释的粗酶液０．１　ｍｌ，５０℃恒温反应１５　ｍｉｎ，　将酶灭活后以ＤＮＳ法测定还原糖含量．以１　ｍｉｎ产生相当于１／￣ｍｏｌ葡萄糖的还原糖量　定为１单位（ｕ）．　１．４．２　ＦＰＡ酶活：取５０．０　ｍｇ　Ｗｈａｔｍａｎ　Ｎｏ．１滤纸（ｍａｉｄｓｔｏｎｅ，ＵＫ）条，０．９　ｍｌ　ｐＨ４．８　的醋酸一醋酸钠缓冲液，５０℃保温２　ｍｉｎ，加适度稀释的粗酶液０．１　ｍｌ，混匀，５０℃恒　温反应１５　ｍｉｎ，然后以ＤＮＳ法测定还原糖含量．按以上同样的方法计算酶活性单位．．　１．４．３　ｊ３Ｇ酶活：取０．９　ｍｌ含Ｓａｌｉｃｉｎ（Ｆｌｕｋａ进口分装）１．１　ｍｇ／ｍｌ的ｐＨ４．８醋酸一醋　酸缓冲液，５０℃保温２　ｍｉｎ，加粗酶液适度稀释液０．１　ｍｌ，５０℃恒温反应１５　ｍｉｎ，然后　以ＤＮＳ法测定还原糖含量．按上述同样的方法计算酶活单位．　２结果与讨论　２．１葡萄糖对拟康氏木霉ＴＨ的纤维素酶合成的阻遏　将菌株ＴＨ接种在含０、０．２％、０．４％、０．６％葡萄糖的ＣＦｌｌ平板上，２８℃培养７　ｄ　（图１）．可清楚地观察到：菌株ＴＨ在不含葡萄糖的ＣＦ１１平板上，菌落周围出现了清晰地　透明圈；在含０．２％葡萄糖的平板上也有明显的透明圈，但较前者小得多；在含０．４％葡　萄糖的ＣＦ１１平板上仅有模糊的透明圈；而在含０．６％葡萄糖的ＣＦ１１平板上完全没出现　透明圈．表明０．６％的葡萄糖可完全抑制木霉ＴＨ在１％ＣＦ１１平板上合成纤维素酶．　维普资讯 http://www.cqvip.com ４９０　山东大学学报（自然科学版）　第３４卷　图１　葡萄糖对出发菌株ＴＨ的纤维黍酶合成的阻遏　Ｆｉｇ　１　Ｒｅｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｇｌｕｃｏｓｅ　ｏｎ　ｃｅｌｌｕｌａｓｅ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｂｙ　ｓｔａｒｔｉｎｇ　ｓｔｒａｉｎ　ＴＨ　注：从左至右分别为ＴＨ　０Ｇ，ＴＨ　０　２％Ｇ。ＴＨ　０．４％Ｇ，ＴＨ　０　６％　２　２诱变选育谱系　以拟康氏木霉ＴＨ为出发菌株，紫外照射处理后的孢子悬液涂布接种在含不同浓度　葡萄糖的ＣＦ１１（１％）平板上，２８℃培养７　ｄ，根据菌落周围透明圈的大小挑选抗葡萄糖阻　遏菌株．从含１％葡萄糖的ＣＦ１１平板上筛选到ＵＶ１，以ＵＶ１为出发菌株，按上述同样的　方法，从含２％葡萄糖的ＣＦ１１平板上筛选到较ｕＶ１具有更高抗性的ｕＶ１１；在此基础　上，以ｕＶ１１为出发菌株，从含４％葡萄糖的ＣＦ１１平板上筛选到ｕＶ１１１（图２）　ｕＶ１１１　在含１０％葡萄糖的ＣＦ１１平板上仍有清晰的纤维素分解透明圈；在１２％～１４％葡萄糖的　ＣＦ１　１平板上仅有小菌落的生长但观察不到透明圈．　图２　ＵＶ１　１　１对商浓度葡萄糖的抗阻遏作用　Ｆｉｇ　２　ＵＶ１　１　１　ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　ｔｏ　ｃａｔａｂｏｌｉｔｅ　ｒｅｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｂｙ　ｈｉｇｈ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｇｌｕｃｏｓｅ　注：平板次序上排为ＵＶ１１１　６％Ｇ，ＵＶｌｌｌ　７％Ｇ。ＵＶ１１１　８％Ｇ；　下排为ＵＶ１１１　１０％Ｇ。ＵＶＩ１１　１２％Ｇ，ＵＶ１１１　１４Ｇ，ＵＶ１１１　１６％Ｇ　２．３抗阻遏突变株的比较　将出发菌株ＴＨ和获得的抗阻遏突变株ｕＶｌ、ｕＶ１１、ＵＶｌｌ１分别接种到含下列不　同浓度葡萄糖的ＣＦ１１平板上，２８℃培养７　ｄ，结果表明：突变株的抗葡萄糖阻遏能力ＴＨ　＜ＵＶ１＜ＵＶ１１＜ＵＶ１１１；由图１表明０　６％葡萄糖能完全抑制ＴＨ在ＣＦ１１平板上　纤维素酶的产生；４％葡萄糖能够抑制ＵＶ１、８％能够抑ＵＶｌｌ、而ＵＶｌｌｌ在含高达１２％　葡萄糖的ＣＦ１１平板上完全失去了纤维素酶的合成能力（表１）．Ｕｖ１１１在含葡萄糖浓度　为４％、６％、８％、１０％、的ＣＦ１１平板上，培养７　ｄ，平板上出现清晰的透明圈，随葡萄糖浓　度的增加圈越来越小．当葡萄糖浓度增加至１２％时，葡萄糖则完全抑制了纤维素酶的合　维普资讯 http://www.cqvip.com 第４期　宋小炎等：抗高浓度葡萄糖阻遏的纤维素酶高产菌的选育４９１　成，ＣＦ１１平板上不再出现透明圈，当葡萄糖浓度高达１６％时微生物的生长也被抑制　表１抗阻遏突变株的比较　Ｔａｂｌｅ　１　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　ａｂｉｌｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ丁．Ｐｓｅｕｄｏｋｏｎｉｎｇｉｉ　ｍｕｔａｎｔｓ　ａｎｄ　ｓｔａｒｔｉｎｇ　ｓｔｒａｉｎ　葡萄糖浓度（％）　ｏＣｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　０　１　２　４　６　８　１０　１２　ｇｌｕｃｏｓｅ．％　ＴＨ　＋＋＋　一　Ｕｖ１　＋＋＋　＋＋＋　＋＋　一　Ｕｖ１１　＋＋＋　＋＋＋　＋＋＋　＋＋　＋　一　ＵＶ１１１　＋＋＋　＋＋＋　＋＋＋　＋＋　＋＋　＋＋　＋＋　一　注：＋代表平板上的透明圈，＋越多水解圈越大；一代表不出现水解圈．　２．４突变株ＵＶｌｌｌ纤维素酶活性的提高　用配４：６的麸皮和玉米皮培养基加１．３％的（ＮＨ４）２ＳＯ４、１．２％ＫＨ２ＰＯ４、０．３％Ｍｇ—　ＳＯ４、０．０５％Ｃａ　Ｃｌ２无机盐溶液制备的固体培养基，灭菌后分别接种ＵＶｌ１１和ＴＨ，２８℃　培养６　ｄ，ＴＨ菌株的ＣＭＣ酶活性、ＦＰ酶活性、口Ｇ酶活性分别为４６９．８、１６．２、１．９　ｕ／ｇ；　而抗阻遏突变株ＵＶｌ１１为１１４５．７、５５．６、２４．０　ｕ／ｇ，较出发菌株分别提高了２．４、３．４和　ｌ２．６倍（如图３）．　Ｆ　４’　Ｐ　…【ｏｆＣＭＣａｓｅ口ｍ＾｝ｄ【　ｊ　Ｌｙ　Ｆ　，　…ｆ　Ｂ　－　ｐ　…　９６ｈ　ｉ２０ｈ　ｌ“ｈ　［ｈｎ　图３突变株ＵＶ１１１与出发菌株的纤维素酶活性的比较　Ｆｉｇ．３　ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　Ｃ，ｅｌｌｕｌａｓｅ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｖｉｔｙ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｍｕｔａｎｔ　ＵＶｌｌｌ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｓｔａｒｔｉｎｇ　ｓｔｒａｉｎ　纤维素酶合成是受纤维素等诱导物诱导和纤维素酶分解产物葡萄糖阻遏的双重因子　调节的．诱导物纤维素是水不溶性的物质，很难进入细胞内诱导纤维素酶的合成，可溶性　的纤维二糖、槐糖、龙胆二糖等虽有较强的诱导能力，但这些物质在自然界中很少存在，较　难应用于生产。因此通过筛选诱导物来提高酶活性比较困难．本文通过诱变育种，筛选到　抗高浓度葡萄糖阻遏突变株ＵＶ一１１１，其对葡萄糖的抗阻遏能力较出发菌株成倍地提　高，明显地提高了抗葡萄糖阻遏能力，使各纤维素酶活性都得到了较大幅度的提高．　参考文献　１　ＭａｎｄｅｌｓＭ，ＰａｒｒｉｓｈＦＷ　ａｎｄＲｅｅｓｅＥ．Ｓｏｐｈｏｒｏｓｅ　ａｓ　ａｎｉｎｄｕｃｅｒｏｆ　ｃｅｌｌｕｌｏｓｅｉｎ　Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｒａａ　Ｖｅｒｉｄｅ，Ｊ．Ｂａｃｔ。１９６２，　８３：４００　２　Ｋａｗａｍｏｒｉ　Ｍ，Ｍｏｒｉｋａｗａ　Ｙ　ａｎｄ　Ｔａｋａｓａｗａ　Ｓ．Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｅｌｌｕｌｏｓｅｓ　ｂｙ　Ｌ—ｓｏｒｂｏｓｅ　ｉｎ　Ｔｒｉｃｈｏ．　ｄｅｒｍａ　ｒｅｅｓｅｉ．Ａｐｐｌ　Ｍｉｃｒｏｂ　Ｂｉｏｔｅｃｈ，１９８６，２４：４４９　３　Ｋｕｂｉｃｅｋ　Ｃ　Ｐ，Ｍｏｒｉｋａｕａ　Ｙ　ａｎｄ　Ｔａｋａｓａｗａ　Ｓ．Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ　ｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｉｎ　Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｒｅｅｓｅｉ　ｂｙ　ｃｅｌｌｕｂｃｏｎｏ—　ｌ，５一ｌａｃｔｏｎ．Ａｒｃｈ　Ｍｉｃｒｏｂ，１９８９．１５１；３２６　４　Ｗｅｙ　Ｔ　Ｔ，Ｈｓｅｕ　Ｔ　ａｎｄ　Ｈｕａｎｇ　Ｌ．Ｍｅｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ　ｏｎｄ　Ｓｅｑｏｕｅｎｃｅ　Ａｎｏｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｃｅｌｌｏｂｉｏｈｙｄｒｏｌａｅ１Ｇｅｎｅ　ｆｒｏｍ　维普资讯 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４９２　山东大学学报（自然科学版）　第３４卷　丁ｒ　ｃｈｏｄｅｒｍａ　Ｋｏｎｉｎｇｉｉ　Ｇ一３９，Ｃｕｒｔ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，１９９４，８．３１－－３９　５　Ｇｏｎｚａｌｅｚ　Ｒ．Ｐｅｒｚ—Ｇｏｎｚａｌｅｚ　Ｊ　Ａ，Ｇｏｎｚａｌｅｚ—Ｃａｎｄｅｌａｓ　Ｌ　ａｎｄ　Ｒａｍｏｎ　Ｄ．Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ａｌ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｔｒｉｃｈｏ—　ｄｅｒｍａ　ｌｏｎｇｉｂｒｏｃｈｉａｔｕｍ　ｅｇｌｌｇｅｎｅ．ＦＥＭＳ　Ｍｉｒｏｂｉｏｌ　Ｌｉｔｔ，１９９４，１２２，３０３３０８　６　Ｓｈｏｕ　Ｔａｋａｓｈｉｍａ．Ａｋｉｔａ　Ｎａｋａｍｕｔａ，Ｈｉｒｏｓｈｉ　１ｉｋｕｔａ，Ｈａｒｕｈｉｋｏ　Ｍａｓａｋｉ　ａｎｄ　Ｔａｋｅｓｈｉ　Ｕｏｚｍｉ．Ｃｌｏｎｉｎｇ　ｏｆ　ａ　Ｇｅｎｅ　Ｅｎ—　ｃｏｄｉｎｇ　ａ　Ｐｕｔａｔｉｖｅ　Ｃａｒｂｏｎ　Ｃａｔａｂｏ　ｌｉｔｅ　Ｒｅｐｒｅｓｓｏｒ　ｆｒｏｍ　Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｒｅｅｓｅｉ．Ｂｉｏｓｃｉ　Ｂｉｏｔｅｃｈ　Ｂｉｏｃｈｅｍ，１９９６，６０（１），　１７３～１７６　７　Ｍｉｓａｒａ　Ｓ．Ｇｏｐａｌｋｒｉｓｎａｎ　Ｋ　Ｓ　ａｎｄ　Ｇｈｏｓｅ　ＴＫ．Ａ　Ｃｏｎｓｔｒｉｔｕｔｉｖｅｌｙ　Ｃｅｌｌｕｌａｓｅｓ—Ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ　Ｍｕｔａｎｔ　ｏｆ　Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｒｅｅ—　ｓｅ　，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ　Ｂｉｏｅｎｇ．１９８２，２４：２５１－－２５４　８　Ｇａｄｇｉｌｏ　Ｎ　Ｊ，Ｄａｇｉｎａｗａｌａ　Ｈ　Ｆ．Ｃｈａｋｒａｂａｒｔｉ　Ｔ，ａｎｄ　Ｋｈａｎｎａ　Ｐ．：Ｅｎｆａｎｃｅｄ　ｃｅｌｌｕｌａｓｅ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｂｙ　ａ　ｍｕｔａｎｔ　ｏｆ丁ｒ　—　ｃｈｏｄｅｒｍａ　ｒｅｅｓｅｉ，Ｅｎ　Ｍｉｃｒｏｂ　Ｔｅｃｈｎｏ１，１９９５，１７．９４２～９４６　９　Ｋａｗａｍｏｒｉ　Ｍ．Ｍｏｒｉｋａｗａ　Ｙ，Ｓｈｉｎｓｈａ　Ｙ，Ｔａｋａｙａｍａ　Ｋ　ａｎｄ　Ｔａｋａｓａｗａ　Ｓ．Ｐｒｅｐａｒｔｉｏｎ　ｌｆ　Ｍｕｔａｎｔｓ　Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　ｔｏ　Ｃａｔａｂｏｌｉｔｅ　Ｒｅｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｒｅｅ￣ｉ．Ａｇｒｉｃ　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ．１９８５，４９：２８７５－－７９　１０　Ｍｏｒｉｋａｗａ　Ｙ，Ｋａｗａｍｏｒｉ　Ｍ，Ａｄｏ　Ｙ，Ｓｈｉｎｓｈａ　Ｙ，Ｏｄａ　Ｆ　ａｎｄ　Ｔａｋａｓａｗａ　Ｓ　Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｃｅｌｌｕｌａｓｅ　Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｃｈｏｄｅｒｍａ　ｒｅｅｓｅｉ．Ａｇｒｉｃ　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ，１９８５，４９：１８６９，７１　１１　Ｚｈｕ　Ｙ　Ｓ，Ｗｕ　Ｙ　Ｑ，Ｃｈｅｎ　Ｗ，Ｔａｎ　Ｃ．Ｇａｏ　Ｊ　Ｈ，Ｆｅｉ　Ｊ　Ｘ．Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｅｌｌｕｌａｓｅｓ　ｓｇｎｔｈｅｓｉｓ　ｉｎ　Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｐｓｅｕｄｏｋｏｎｉｎｇｉｉ　ｍｕｔｎａｔｓ　ＥＡ３—８６７　ａｎｄ　Ｎ２—７８．Ｅｎｚｙｍｅ　Ｍｉｒｏｂ　Ｔｅｃｈｎｏｌ，１９８２．４：３１２．　ＰＲＥＰＡＲＡＴＩＯＮ　ＯＦ　Ａ　ＭＵＴＡＮＴ　ＫＥＳＩＳＴＡＮＴ　ＴＯ　ＧＬＵＣＯＳＥ　ＲＥＰＲＥＳＳＩＯＮ　Ｓｏｎｇ　Ｘｉａｏｙａｎ，Ｓｏｎｇ　Ｇｕｉｊ　ｉｎｇ，Ｓｕｎ　Ｃａｉｙｕｎ，Ｌｉｕ　ＴａｏＴａｏ，Ｈａｎ　Ｆｅｎｇ　（Ｓｔａｔｅ　Ｋｅｙ　Ｌａｂ．ｏｆＭｉｃｒｏｂｉａｌ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，　Ｓｈａｎｄｏｎｇ　Ｕｎｉｖ．，Ｊｉｎａｎ　２５０１００）　ＡＢＳＴＲＡＣＴ　Ａ　ｍｕｔａｎｔ　ｆｒｏｍ　Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｐｓｅｕｄｏｋｏｎｉｎｇｉｉ，ｗｈｉｃｈ　ｃａｎ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅ　ｃｅｌｌｕｌａｓｅｓ　ｗｈｅｎ　ｈｉｇｈ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｇｌｕｃｏｓｅ　ｅｘｉｓｔｓ，ｗａｓ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ａｇａｒ　ｐｌａｔｅ　ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｔｅｃｈ—　ｎｉｑｕｅｓ．Ｔｈｅ　ｍｕｔａｎｔ　ｓｔｒａｉｎ　ｗａｓ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ａｇａｒ　ｐｌａｔｅ．ｗｈｉｃｈ　ｃｏｎｔａｉｎｓ　４％ｇｌｕｃｏｓｅ．　Ｔｈｉｓ　ｓｔｒａｉｎ　ｉｓ　ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　ｔｏ　ｃａｔａｂｏｌｉｔｅ　ｒｅｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｂｙ　ｇｌｕｃｏｓｅ　ａｎｄ　ｉｔ　ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｃｌｅａｒ　ｃａｔａｌｙｔｉｃ　ｚｏｎｅｓ　ｏｎ　ａｇａｒ　ｐｌａｔｅｓ　ｗｉｔｈ　１０％ｇｌｕｃｏｓｅ．Ｉｎ　ｓｏｌｉｄ　ｓｔａｔｅ　ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ．ｔｈｅ　ｍｕｔａｎｔ　ｓｔｒａｉｎ　ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｈｉｇｈ　ＣＭＣａｓｅ，ＦＰａｓｅ，ａｎｄ　ｂｅｔａ—Ｇａｓｅ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ，ｗｈｉｃｈ　ｗｅｒｅ　１１４５．７　ｕ／ｇ　ｄｒｙ　ｗｅｉｇｈｔ，５５．６　ｕ／ｇ　ｄｒｙ　ｗｅｉｇｈｔ，２４．０　ｕ／ｇ　ｄｒｙ　ｗｅｉｇｈｔ　ａｆｔｅｒ　６　ｄａｙｓ’ｃｕｌｔｕｒｉｎｇ．Ａｎｄ　ｔｈｅｓｅ　ｗｅｒｅ　２．４，３．４，１２．６　ｔｉｍｅｓ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｔａｒｔｉｎｇ　ｓｔｒａｉｎ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ　ｃｅｌｌｕｌａｓｅ；ｒｅｓｉｓｔ；ｇｌｕｃｏｓｅ　第３４卷卷终　Ｅｎｄ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｖｏｌｕｍｅ　３４