噬菌体MS2生物学特性研究

第１８卷第３期　２　０　１　１年　５月　工安全与环境　程　Ｖｏ１．１８　Ｎｏ．３　Ｍａｙ　２０　１　１　Ｓａｆｅｔｙ　ａｎｄ　Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　噬菌体ＭＳ２生物学特性研究　胡琼之　（陕西省环境科学研究设计院，西安７１００５４）　摘要：本文分析了噬菌体ＭＳ２在水质监测中作为水中肠道病毒指示生物的可行性与优势，并通过试验测定了　噬菌体ＭＳ２的热稳定性、ｐＨ值稳定性、最佳感染复数和一步生长曲线等生物学参数，结果表明：噬菌体ＭＳ２的热　稳定性较弱，在７Ｏ℃时５　ｍｉｎ内即会全部失活；在ｐＨ值４～１０的范围内噬菌体ＭＳ２均可稳定存在；噬菌体ＭＳ２　感染其宿主大肠杆菌的最佳感染复数为１．０；噬菌体一步生长曲线的潜伏期约２０　ｍｉｎ，裂解期约３０　ｍｉｎ，裂解量为　８５。该研究结果可为运用噬菌体ＭＳ２对水质进行高效而准确的监测及评价提供科学依据。　关键词：噬菌体ＭＳ２；指示微生物；生物学特性　中图分类号：Ｘ８３２　文献标识码：Ａ　文章编号：１６７１—１５５６（２０１１）０３－００５５—０４　Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｔｈｅ　Ｂｉｏｌｏ　ｃａｌ　Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　０ｆ　Ｂａｃｔｅｒｉ０ｐｈａｇｅ　ＭＳ２　ＨＵ　Ｑｉｏｎｇ－ｚｈｉ　（Ｓｈａａｎｘｉ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｘｉ’ａｎ　７１００５４，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｉｓ　ｐａｐｅｒ　ｉｎｔｒｏｄｕｃｅｄ　ｔｈｅ　ｆｅａｓｉｂｉｌｉｔｙ　ａｎｄ　ａｄｖａｎｔａｇｅｓ　ｏｆ　ｂａｃｔｅｒｉｏｐｈａｇｅ　ＭＳ２　ａｓ　ｅｎｔｅｒｏｖｉｒｕｓｅｓ　ｉｎ　ｗａｔｅｒ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ．Ｉｔｓ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ　ｔｈｅｒｍｏ—ｓｔａｂｉｌｉｔｙ，ｐＨ—ｓｔａｂｉｌｉｔｙ，ｏｐｔｉｍａｌ　ｍｕｌｔｉｐｌｉｃｉ—　ｔｙ　ｏｆ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｏｎｅ—ｓｔｅｐ　ｇｒｏｗｔｈ　ｃｕｒｖｅ　ｗｅｒｅ　ａｎａｌｙｚｅｄ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｔｈｅｒｍｏ—ｓｔａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ＭＳ２　ｗａｓ　ｗｅａｋ　ａｎｄ　ｂｅａｔｉｎｇ　ｆｏｒ　５　ｍｉｎｕｔｅｓ　ａｔ　ｔｈｅ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｏｆ　７０℃ｃｏｕｌｄ　ｉｎａｃｔｉｖａｔｅ　ｉｔ　ｃｏｍｐｌｅｔｅｌｙ．ＭＳ２　ｈａｄ　ｒｅｌａｔｉｖｅｌｙ　ｈｉｇｈ　ｓｔａｂｉｌｉｔｙ　ａｔ　ｐＨ　ｖａｌｕｅ　ｏｆ　４～１０．Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｍｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙ　ｏｆ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｗａｓ　１．Ｔｈｅ　ｏｎｅ－　ｓｔｅｐ　ｇｒｏｗｔｈ　ｃｕｒｖｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｈａｇｅ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｌａｔｅｎｔ　ｐｅｒｉｏｄ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｂｕｒｓｔ　ｐｅｒｉｏｄ　ｗｅｒｅ　ａｂｏｕｔ　２０　ａｎｄ　３０　ｍｉ—　ｎｕｔｅｓ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｂｕｒｓｔ　ｓｉｚｅ　ｗａｓ　ａｂｏｕｔ　８５　ｐｈａｇｅ　ｐａｒｔｉｃｌｅｓ　ｐｅｒ　ｉｎｆｅｃｔｅｄ　ｂａｃｔｅｒｉｕｍ．Ｉｔ　ｉｓ　ｈｏｐｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ　ｃａｎ　ｐｒｏｖｉｄｅ　ａ　ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　ｂａｓｉｓ　ｆｏｒ　ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ａｎｄ　ａｃｃｕｒａｔｅ　ｗａｔｅｒ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ　ｗｉｔｈ　ｂａｃｔｅｒｉｏｐｈａｇｅ　ＭＳ２　ｉｎ　ｔｈｅ　ｆｕｔｕｒｅ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｂａｃｔｅｒｉ０ｐｈａｇｅ　ＭＳ２；ｉｎｄｉｃａｔｏｒ　ｍｉｃｒｏｂｅ；ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　染时，必须使用不会致病的指示病毒代替。　０　引　言　我国环境水体多数已经受到致病微生物的污　目前，常规水处理过程中传统的指示微生物是　总大肠杆菌或粪大肠杆菌。总大肠杆菌在环境中的　出现，尤其是粪大肠杆菌的出现，意味着水体受到粪　染。由于病毒比细菌或原生动物更能抵御消毒处　理，所以对饮用水安全危险更大。然而，由于病毒的　感染剂量很低，因此测定环境水样中的病毒含量非　常麻烦，通常是先采取大量样品，然后经过多次浓缩　后才有可能利用诸如ＲＴ－ＰＣＲ之类的高新技术进　行测定。这种测定方法有可能受环境背景病毒的干　扰，耗时、价格昂贵，还有可能污染环境，甚至有的病　便的污染或有相关病原体存在，总大肠菌群数的降　低程度可间接反映致病菌相应数量级的减少。在对　消毒剂如氯的抗性上，肠道病毒的非细胞属性使其　对环境压力的耐受性大于细菌，比大肠杆菌具有更　强的稳定性。在细菌学指标合格的饮用水中检出肠　道病毒的报道不断出现，这表明仅以大肠菌群无法　完全指示肠道病毒的去除，以此作为卫生安全控制　毒根本不能培养。鉴于此，在研究病毒对水体的污　收稿日期：２０１０－１２—１５　修回日期：２０１１－０４—１５　指标不能很好地评价水体的病毒学安全性。因此，　作者简介：胡琼之（１９８６一），女，硕士，助理工程师，主要从事水处理技术及应用方面的研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｋｋｋｂｆｆ＠１６３．ｃｏｒｎ　５６　安全与环境工程　第１８卷　笔者通过对噬菌体ＭＳ２的生物学特性的研究，以期　缓冲液（ＰＢＳ　０．３　ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ７．２），按照《消毒技术规　范》［６　规定，称取无水磷酸氢二钠（Ｎａ２ＨＰＯ４）２．８３　为水体病毒监测提供更加可靠、安全的选择。　ｇ，磷酸二氢钾（ＫＨ。ＰＯ　）１．３６　ｇ，加入蒸馏水待完　１噬菌体ＭＳ２作为肠道病毒指示物　的可行性与优势　１．１可行性分析　全溶解后，调ｐＨ值至７．２～７．４，定容于１００　ｍＬ容　量瓶，１２１℃高压蒸气灭菌２Ｏ　ｍｉｎ，备用。　２．１．３试验仪器　主要试验仪器有：①净化工作台（型号ＳＷ—ＣＪ一　２ＦＤ，上海博讯实业有限公司）；②ＡＬＰ高压蒸汽灭　菌器［型号ＣＬ－３２ＬＤＰ，ＥＨＳＹ西域科技（中国）有限　噬菌体ＭＳ２属于非细胞原生物的细菌病毒［１３，　专性感染和寄生于相应的活细菌体内，具有作为水　体中肠道病毒指示物的基本条件［２　］：对人没有致　病性，且在有肠道病毒污染的水环境中普遍存在；可　以进行高浓度接种和现场试验；数量高于肠道病毒，　在形态特征、理化特性、对自然环境条件和消毒剂的　抗性等方面与肠道病毒类似；检测操作具有简便快　速、安全可靠、受环境影响小和设备简单等优点。　１．２优势分析　与其他病毒的宿主如人类、动物和植物等相比，　噬菌体ＭＳ２具有如下优势：　（１）在实验室里，噬菌体ＭＳ２易于快速培养，　对实验室的空间、设施和设备没有特别要求，并且能　够高浓度制备（可达１０　～１０”ＰＦＵ／ｍＬ）。　（２）与肠道病毒的传统指示生物如大肠菌群、　粪链球菌等相比，噬菌体ＭＳ２的生物结构、组成成　分、复制方式和消毒抗性等与肠道病毒更加相似。　Ｂ．Ｂｅｎｏｉｔ等［５］对不同类型水样的检测表明，可培养　的肠道病毒和噬菌体ＭＳ２在数量上存在很好的对　应关系。　（３）噬菌体在有肠道病毒污染的水体中普遍存　在，且数量甚多，对水体净化和消毒处理的抵抗力至　少与肠道病毒相当；同时其不会在水中繁殖，不具有　致病性，可以通过简单、快速、低廉的方法检测。　２噬菌体ＭＳ２生物学特性研究试验　２．１试验材料及仪器　２．１．１　茵种及噬茵体　试验所用噬菌体ＭＳ２（ＡＴＣＣ　ｉ５５９７）及其宿　主大肠杆菌（ＡＴＣＣ　１３７０６）由中山大学环境工程学　院实验室提供。　２．１．２试验试触　主要试验试剂有：①ＬＢ肉汤液体培养基；②ＬＢ　琼脂固体培养基；③半固体培养基，以液体培养基为　基础加入０．６Ｎ琼脂；④ＣａＣＩ２溶液（Ｏ．１　ｍｏｌ／Ｌ），称　取ＣａＣｌ２　１．１　ｇ溶于蒸馏水中，定容至１００　ｍＬ容量　瓶，于１２１℃高压蒸气灭菌２０　ｍｉｎ，备用；⑤磷酸盐　公司］；③紫外可见分光光度计（型号棱光７５２Ｎ，上　海精密科学仪器有限公司）；④电热鼓风干燥箱（型　号ＧＺＸ－９１４０ＭＢＥ，上海博迅实业有限公司）；⑤自　动温控冰箱［型号ＢＣＤ－２３３，伊莱克斯（中国）电器有　限公司］；⑥台式离心机（型号ＵＮＩＶＥＲＳＡＬ３２／　３２Ｒ，德国Ｈｅｔｔｉｃｈ公司）；⑦恒温培养箱（型号ＺＨ－　ＷＹ－Ｃ２１１Ｃ，上海智城分析仪器制造有限公司）；⑧　恒温培养振荡器（型号ＮＳＫＹ一２００Ｂ，上海苏坤实业　有限公司）；⑨电子天平（型号ＦＡ２１０４Ｓ，上海天平　仪器厂）；⑩微量加样枪；①恒温水浴箱；＠移液管、　锥形瓶若干；⑩培养皿、比色皿、试管、烧杯、ｐＨ计及　ｐＨ试纸等，若于。　２．２试验方法　２．２．１　热处理对噬菌体ＭＳ２活性影响的测定　噬菌体的效价测定是测定噬菌体的浓度，１　ｍＬ　培养液中含有噬菌体的数量称为噬菌体的效价。噬　菌体的效价在一定程度上反映了噬菌体的存活率，　效价与存活率成正比。　取噬菌体原液１．５　ｍＬ与１．５　ｍＬＰＢＳ缓冲液　混合，分别于５Ｏ℃、６Ｏ℃、７Ｏ℃水浴条件下恒温处理　５　ｒａｉｎ、１０　ｍｉｎ、１５　ｍｉｎ、２０　ｍｉｎ，间或摇动，之后各样　品立即置入冰浴中冷却至相同温度。以４℃的噬菌　体悬液为对照，测定噬菌体效价。　２．２．２　ｐＨ值对噬茵体ＭＳ２活性影响的测定　取不同ｐＨ值的无菌ＬＢ肉汤液体培养基４．５　ｍＬ分别加入试管中，置于２５℃恒温水浴至温度完　全平衡，各加入０．５　ｍＬ噬菌体ＭＳ２悬液，计时处　理１　ｈ后，测定噬菌体效价。测定ｐＨ值范围为　２．０～１２．０，ｐＨ值梯度为１．０。　２．２．３噬茵体ＭＳ２最佳感染复数的测定　感染复数（ＭＯＩ）是指初始感染时加入噬菌体　ＭＳ２的数量与宿主菌数量的比值。用紫外分光光　度计测定对数生长期的宿主菌液ＯＤ６００值，根据标　准曲线计算细菌浓度。按照感染复数ＭＯ１　０．０１、　０．１、１、１０的比例，分别加入噬菌体ＭＳ２纯培养液　和宿主菌，加入无菌ＬＢ肉汤培养基使各培养体系　第３期　胡琼之：噬茵体ＭＳ２生物学特性研究　５７　的总体积相同。在３７℃摇床中１６０　ｒ／ｒａｉｎ大振幅条　件下培养６　ｈ，以５　０００　ｒ／ｍｉｎ离心１５　ｍｉｎ，双层平　板法测定上清液中噬菌体ＭＳ２效价。作双份复管　培养取平均值，同时以不加噬菌体ＭＳ２的宿主菌和　逐渐丧失；在７Ｏ℃时，５　ｍｉｎ内噬菌体ＭＳ２即全部　失活。因此，噬菌体ＭＳ２对高温敏感，抗热能力较　５　¨加　５　弱。　２．３．２　ｐＨ值对噬菌体ＭＳ２活性的影响　不加宿主菌的噬菌体ＭＳ２为对照，使噬菌体ＭＳ２　效价最高的ＭＯＩ作为最佳感染复数。　２．２．４　噬茵体ＭＳ２一步生长曲线的测定　噬菌体ＭＳ２在不同ｐＨ值的培养条件下测定　效价，其结果见表２。　表２不同ｐＨ值条件下噬菌体ＭＳ２（ＡＴＣＣ　１５５９７）的效价　Ｔａｂｌｅ　２　Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂａｃｔｅｒｉｏｐｈａｇｅ　ＭＳ２（ＡＴＣＣ　１５５９７）　取噬菌体ＭＳ２及对数期生长宿主菌使ＭＯＩ＝　¨叭　侣∞　¨　３　０　０　１，混合后３７℃温育吸附５　ｍｉｎ，在４℃条件下以　３　０００　ｒ／ｍｉｎ离心３０　Ｓ，弃上清液；取５　ｍＬ预热的无　菌ＬＢ液体培养基与沉淀充分混匀，迅速置于３７℃　大振幅摇床中培养（１６０　ｒ／ｍｉｎ），开始计时；于０时　刻和每隔１０　ｒａｉｎ取样５０　Ｌ，在４℃条件下以５　０００　ｒ／ｍｉｎ离心３０　Ｓ，吸取上清液测定噬菌体ＭＳ２效　价。各时间点均作双份复管取平均值，同时以不加　噬菌体ＭＳ２的宿主菌和不加宿主菌的噬菌体ＭＳ２　为对照，绘制一步生长曲线。　２．３试验结果及分析　２．３．１　热处理对噬茵体ＭＳ２活性的影响　采用噬菌体ＭＳ２在不同温度热处理不同时问　后，测定效价来评定其热稳定性，其结果见表１。　表１不同温度加热处理下噬菌体ＭＳ２（ＡＴＣＣ　１５５９７）的效价　Ｔａｂｌｅ　１　Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂａｃｔｅｒｉｏｐｈａｇｅ　ＭＳ２（ＡＴＣＣ　１５５９７）　ｂｙ　ｔｈｅ　ｈｅａｔ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｕｎｄｅｒ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ　处理温度处理时间　噬菌体Ｍｓ２效价　／℃　／ｍｉｎ　／（×１０。ＰＦＵ・ｍＬ一　）　５Ｏ　６０　由表１可见，噬菌体ＭＳ２经不同温度处理不同　时间后，其效价不同。噬菌体ＭＳ２在宿主菌外存在　时，只保留着在适宜条件下感染宿主的潜在能力，这　种潜在的感染能力很容易变性失活；同时高温可能　破坏热敏感营养物质和生长因子等，不利于噬菌体　ＭＳ２的生长。　由试验结果还可知，噬菌体ＭＳ２活病毒残存量　随着温度的增加而减少；在５Ｏ℃、６Ｏ℃和７Ｏ℃高温　条件下，随着处理时间的延长，噬菌体ＭＳ２的活性　ｕｎｄｅｒ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐＨ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｐＨ值　噬菌体ＭＳ２效价／（×１０　ＰＦＵ・ｍＬ一　）　２．Ｏ　０　３。０　０　４．Ｏ　Ｏ．１３５　５．Ｏ　１．Ｏ２　６．０　１．３５　７．０　１．５０　８．０　１．３８　９．０　１．０６５　１０．０　０．４０５　１Ｉ．０　Ｏ　１２．０　Ｏ　由表２可见，噬菌体ＭＳ２在不同ｐＨ值培养基　中的效价也不同。噬菌体ＭＳ２的最适ｐＨ值为中　性，在ｐＨ值５～９范围内均具有６０　以上的存活　率；随着酸性或碱性程度的增强，噬菌体ＭＳ２的存　活率随之降低。　由试验结果还可以看出，噬菌体ＭＳ２效价与　ｐＨ值之间的关系呈钟型分布；且噬菌体ＭＳ２的存　活率有较宽的ｐＨ值范围，在ｐＨ值为４和ｐＨ值为　１Ｏ时，仍保有一定的存活率，但ｐＨ值在４～１０范　围以外，存活率明显降低，几乎接近于零。　２．３．３　噬菌体ＭＳ２最佳感染复数　将噬菌体ＭＳ２溶液和培养至对数期的宿主细　菌溶液按不同感染复数比例混合，双层平板法测定　子代噬菌体ＭＳ２的效价，其结果见表３。　表３噬菌体Ｍｓ２（ＡＴＣＣ　１５５９７）的最佳感染复数　Ｔａｂｌｅ　３　Ｏｐｔｉｍａｌ　ｍｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂａｃｔｅｒｉｏｐｈａｇｅ　ＭＳ２（ＡＴＣＣ　１５５９７）　由表３可知：在一定的培养条件和培养时间内，　当ＭＯＩ＝１．０时，噬菌体ＭＳ２感染其宿主大肠杆菌　产生的子代噬菌体效价为５．５Ｏ×１０。ＰＦＵ／ｍＬ，在４　个感染复数中，该产出率是最高的，因此确定噬菌体　５８　安全与环境工程　第１８卷　ＭＳ２感染其宿主大肠杆菌的最佳感染复数为１．０。　菌体平均效价／感染初期宿主菌浓度，计算噬菌体　ＭＳ２感染宿主菌的裂解量为：５．１０×１０。／（３．０×　试验结果还表明，高感染复数对噬菌体ＭＳＺ的增殖　及代谢确有促进作用，但过高或过低的感染复数均　会对噬菌体生长产生抑制影响。因此，试验选择噬　１Ｏ。÷５）：８５，即每个被感染的细菌释放子代噬菌体　的平均数为８５。因此，噬菌体ＭＳ２对大肠杆菌的　裂解性较强。　菌体ＭＳ２与宿主大肠杆菌的混合比例１：１作为统　一操作比例。　２．３．４噬茼体ＭＳ２一步生长曲线　３　结论　在噬菌体ＭＳ２吸附宿主大肠杆菌后的培养过　程中，每隔１５　ｒａｉｎ取样测定效价，以噬菌体ＭＳ２效　（１）随着噬菌体ＭＳ２研究技术的发展和污水　价的对数值为纵坐标，感染时间为横坐标，绘制病毒　特征性的一步生长曲线，其结果见图１。　感染时间／ｒａｉｎ　图ｌ　噬菌体ＭＳ２（ＡＴＣＣ　１５５９７）一步生长曲线　Ｆｉｇ．１　Ｏｎｅ－ｓｔｅｐ　ｇｒｏｗｔｈ　ｃｕｒｖｅ　ｏｆ　ｂａｃｔｅｒｉｏｐｈａｇｅ　ＭＳ２（ＡＴＣＣ　１５５９７）　由图１可知：噬菌体ＭＳ２的一步生长曲线分为　潜伏期、裂解期和平稳期，其中潜伏期约２０　ｍｉｎ，裂　解期约３０　ｍｉｎ；在吸附开始后的潜伏期内（５～２０　ｒａｉｎ），噬菌斑数不见增加，说明噬菌体ＭＳ２尚未完　成复制和组装；紧接着在潜伏期后的裂解期（感染后　Ｚ０～５ａ　ｒａｉｎ），噬菌斑数突然直线上升，表示噬菌体　ＭＳ２已从寄主细胞中裂解释放出来；到达平稳期　时，宿主细菌全部被裂解，溶液中噬菌体ＭＳ２的效　价达到最高点。　根据裂廨量计算公式［７］：裂解量＝＝＝裂解末期噬　回用安全性要求的提高，噬菌体ＭＳ２作为水体中肠　道病毒指示物的技术将成为一个具有应用价值和良　好前景的新课题，并在水中病原体的监测方面发挥　重要作用。　（２）噬菌体ＭＳＺ的活性受高温因素影响明显，　在７０℃时，５　ｍｉｎ内噬菌体ＭＳ２即可全部失活；噬　菌体ＭＳ２对一定范围内的酸碱处理则具有较强的　耐受性，最适ｐＨ值为７，ｐＨ值适应范围为４～１Ｏ。　（３）噬菌体ＭＳ２感染其宿主大肠杆菌的最佳　感染复数为１．０。噬菌体ＭＳ２一步生长曲线的潜　伏期约２０　ｍｉｎ，裂解期约３０　ｍｉｎ，感染宿主菌的裂　解量为８５。　参考文献：　［１］谢天恩．普通病毒学［Ｍ］．北京。科学出版社，２００２．　［２］Ｌａｗｒｅｎｃｅ，Ｆ．Ｂ，Ｒ．Ｓ．Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅｒ，Ｇ．Ｌ　ＫａｒＬ　Ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ　ｗａｔｅｒ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｎ　ＵＶ　ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ＭＳ２　ｃｏｉｌ　ｐｈａｇｅ￣Ｊ］．Ａ＂　ｒ　ｃ口　Ｗａｔｅｒ　Ｗｏｒｋｓ　Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ．２００４。（９６）：７５—８７．　［３］Ｊ．尼克林著．林稚兰译．微生物学（第２版）［Ｍ］．北京ｔ科学出版　社，Ｚ００４．　［４］夏立秋，陈则．微生物学教学与科学研究进展［Ｍ］．北京ｔ科学出　版社，２００５．　［５］Ｂｅｎｏｉｔ，Ｂ．，Ｈ．Ｄｅｈｒａ．Ｃｈａｎｄｒａ　ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｄｉｓｃｒｅｔｅ　ａｎｄ　ＣＯＵＲ－　ｆｏｕｎｄｉｎｇ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｗａｔｅｒ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ｄｕｒｉｎｇ　ｔｈｅ　ｉｎａｅｆｉｖａ—　ｔｉｏｎ　０ｆ　ＭＳ２　ｐｈａｇｅｓ　ａｎｄ　Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓｕｂｔｉｌｉｓ　ｓｐｏｒｅｓ　ｗｉｔｈ　ｆｒｅｅ　ｃｈｌｏｒｉｎｅ　】　．Ｍｙｓｏｒｅ．Ｅｎｖｉｒｏｎｒａｅｍａｌ　Ｅ跨ｇｉ　Ｐ　傩ｇ　ｎ　ｄ　Ｓ　ｅ’　ｅ　Ｐ嘲　Ｐ　Ｓ（４）ｔｌ４—１８．　［６］中华人民共和国卫生部，消毒技术规范［ｓ］．２００２．　［７］徐焰，熊鸿燕．１株宽宿主谱大肠杆菌噬菌体的生物学特性观察　［Ｊ］．第三军医大学学报，２００３，２５（２３）：１３一ｌ４．