细菌芽孢染色方法的比较

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August2019（B）

细菌芽孢染色方法的比较

陈

静

沈善瑞

赖晓芳

朱

强

（江苏海洋大学海洋生命与水产学院

江苏·连云港

222000）

中图分类号：G642文献标识码：A

DOI：10.16871/j.cnki.kjwhb.2019.08.031

摘

要

通过研究几种细菌芽孢染色方法，对不同方法的

教学和科研中采用的几种芽孢染色方法的比较和研究进优缺点进行比较，根据实际的实验室条件和诸多因素，本着行总结。

方法简易、结果可靠、学生易掌握、成功率高、环保安全等原1材料和方法

则，选出适合教学和科研应用的芽孢染色方法。1.1材料

关键词

芽孢

染色

明显

安全

（1）菌种：解淀粉芽孢杆菌（Bacillusamyloliquefa-ComparisonofSeveralBacterialSporeStainMethods//ciensstrain-114）斜面(由本课题组分离并保存)，牛肉膏ChenJing,ShenShanrui,LaiXiaofang,ZhuQiang

蛋白胨培养基，37℃培养，48h。

AbstractBystudyingseveralmethodsofbacterialsporestain（2）试剂：5%孔雀石绿，饱和5%孔雀石绿，0.5%沙黄染andcomparingtheadvantagesanddisadvantagesofdifferent液，石炭酸复红染液，碱性复红，0.1%吕氏美兰等，冰乙酸methods,accordingtotheactuallaboratoryconditionsandmany

等。

factors,onthebasisofsimplemethod,reliableresults,easyto

（3）设备：Nikon90i显微镜。

master,highsuccessrate,environmentalprotectionandsecurity,1.2方法参考[2-10]文献，选择并设计以下几种方法。

somesuitablesporestainmethodswereselectedforteachingand方法1：Schaeffer-Fulton法；researchapplication.

方法2：改良Schaeffer-Fulton法；

Keywordsspore;dyeing;obvious;security

方法3：Schaeffer-Fulton冷染法,滴加一滴无菌水于洁净载玻片上，挑菌涂布，干燥，经火焰来回20次热固定，

芽孢（endospore）是一些革兰氏阳性细菌在生长发育饱和的孔雀石绿室温下覆盖染色15min以上，水洗后用后期形成的休眠保护结构，芽孢的着生位置、形状、大小等0.5%的番红染液染色60S，吸水纸附上吸干多余的番红染因素对细菌有分类学意义[1]。芽孢染色法也是微生物学实验液，水洗，干燥后显微镜观察；

教学和相关科研的一个最基本的实验技术。而芽孢的结构方法4：一滴冰乙酸滴于洁净载玻片上，挑菌涂布，干燥非常复杂，用常规的染色方法很难将其染上颜色。芽孢的染3min，固定，石炭酸复红染液覆盖3min,水洗，滴加0.1%吕色方法至少有Schaeffer-Fulton法、改良的Schaef-氏美兰染液覆盖2min，水洗，干燥后显微镜观察；

fer-Fulton法、Bartholomew-Mittwer法、Moeller法、改方法5：一滴无菌水滴于洁净载玻片上，挑菌涂布，干良Moeller法、ModifiedZiehl-neelsen法、Abbott方法、燥，固定，10倍稀释石炭酸复红染液覆盖并微火加热至冒蒸Doner法及改良Doner法等。初染剂主要有孔雀石绿、石炭汽，保持5min，注意适时添加染液防干，水洗，滴加0.1%吕酸复红、美蓝。复染剂有沙黄、碱性复红、美蓝等。但每种方氏美蓝染液覆盖2min,水洗，干燥后显微镜观察；

法都有一定的优缺点。笔者从事多年微生物学实验教学与方法6：一滴无菌水滴于洁净载玻片上，挑菌涂布，干研究，对细菌芽孢染色法做了一些改进和探讨，对在实验

燥，经火焰来回20次热固定，饱和孔雀石绿覆盖至少

基金项目：淮海工学院校教改课题（XJG-2015-2-11）资助完成。作者简介：陈静（1973—），女，江苏宿迁人，硕士，高级实验师，现主要从事微生物学实验教学和海洋微生物资源利用研究。

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图（1-6）不同方法芽孢染色观察图片（1000倍放大）

15min，水洗，石炭酸复红染液覆盖2min,水洗，干燥后显微孔雀石绿具有高毒、高残留、致癌、致畸等作用，会造成环境镜观察。

的污染和危害实验中的学生和老师的健康；同时由于加热2结果

或沸水浴产生的蒸汽使实验室环境潮湿，影响实验过程中六种染色方法结果见图（1-6），实验结果显示：用不同放置在实验台上的显微镜，容易造成显微镜镜头长霉，难以Schaeffer-Fulton法的芽孢染色(图1、2、3)结果中菌体颜保养修复，影响观察并降低了显微镜的使用寿命；同样不用色偏橙红，与芽孢的绿色对比效果比较明显，结果容易观加热的方法也减少酒精灯或电炉等的使用，利于节能和环察，不管是加热载玻片(图1)或者沸水浴法(图2)等加热方保，也有利于实验室安全。

法，还是室温冷染法(图3)，都可以达到较好的效果；图4、5对于方法4和5，实验结果显示，红蓝的对比没有红绿为石碳酸复红初染剂美蓝为复染剂的结果，实验结果显示，的对比明显，并且笔者也曾尝试了不同的试剂浓度和染色红和蓝色的对比不明显，难以轻松区分芽孢和菌体细胞，而时间的比较，难以得到明显的结果，方法4中虽然避免了加且乙酸干燥时非常快，需要添加2-3次，不好把握和操作。热对染色剂的挥发，但用乙酸替代水，涂片干燥时非常快，而且石碳酸具有明显挥发性，对人体皮肤、黏膜具有明显刺需要添加2-3次，不好把握和操作。石炭酸对人体皮肤、黏激，在使用石碳酸加温促染时会感觉到眼睛和鼻部的不适。膜具有明显刺激作用，方法5中由于需要对石碳酸复红染图6为方法6的结果，将复染剂沙黄改为石碳酸复红，菌体液加热，加温促染促进了石碳酸的挥发，操作者会感觉到眼染色淡紫红色，与芽孢的绿色对比明显，效果较好，且感官睛和鼻部的不适。由于结果对比不明显以及染液的不安全漂亮。

性，所以实验教学中不建议采用方法4和5。

3讨论

方法6将复染剂沙黄改为石碳酸复红，并且采用冷染（1）对于本文所述的方法1、2、3三种方法中，冷染法染法，菌体淡紫红色，与芽孢的绿色对比明显，效果较好，感官色效果不次于前两种加热法，而且对学生在实验室操作有漂亮，而且没有加温促染导致的大量有毒蒸汽。

诸多好处：首先冷染不会产生蒸汽，而加热方法均无法减少（2）我校微生物实验课面向生物工程、食品科学与工程、因操作中加热带来的染料挥发而产生的孔雀石绿热蒸汽，

生物技术、水产养殖、药物制剂、海洋科学等9个专业，以往

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渊下转第75页冤

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现各教学方法融合，从而提高学生的理论能力、创新能力和来引出问题，可以引起学生的兴趣，充分调动学生探索现象实践能力。

背后科学真相的能动性。采用将流体和固体进行对比的方4.1理论教学与实验教学相互渗透

法加深学生对概念的理解。最后又将科学规律与现实结合在理论教学中，播放反映流体规律的相关实验视频，从起来，从而使学生在掌握概念的同时，又可以将理论应用到而避免理论教学的生涩枯燥，同时使学生对接下来将要进实践中。因此，在流体力学的教学中合理地构建教学逻辑结行的实验有一个认识。在实验教学中，为保证教学质量，采构，采用视频、动画和板书等多种教学形式、注重规律与实用小班教学的方式，实验前布置思考题，在教学过程中，实践的结合，可以实现培养高素质工程人才的目标。

验老师可以实现充分的指导，并通过提问、演示等方式启发学生的思维，引导学生将实验与理论对应起来。同时，为激参考文献

发学生的创新能力，除常规实验外，还鼓励学生设计开展创[1]王维,贾月梅,王根伟.双一流建设背景下“流体力学”教学改革

新性实验。

思考与探讨[J].教育现代化,2018,10(40):61-63.

4.2传统教学方法与现代教学方法相结合

[2]薛向东,陈勇民,童芸芸,汪华.基于专业认证的流体力学教学

除了课堂讲授外，引导学生合理利用课后资源，使学生实践[J].浙江科技学院学报,2018,12,30(6).

以不同的角度来理解所学知识点。布置学生搜索反映流体[3]郑健.基于地域特色的大土木水力学课程建设与教学实践[J].

力学现象、解释流体力学原理的图片和视频，并把有价值的高教学刊,2016(16)::80-84.

结果在课堂上展示。以毕博系统为平台建立包含知识点、课[4]杨闻宇.土木工程专业流体力学课程基本理论及其应用的课堂

件、作业、试题等的网络资源库，有效提高学生的课下学习教学分析[J].教育教学论坛,2018,12(51).

[5]高等工程教育研究“.新工科”建设复旦共识[J].高等工程教育

效率，加强学生和老师的互动。

研究,2017(1):10-11.

5结论

[6]高红斌,张汝琦,孙楠,等.认知策略在“工程流体力学”教学中

结合土木工程专业和流体力学的特点，提出合理的教的应用[J].中国电力教育,2010(1).

学目标，进行知识点逻辑结构构建，将各种教学方法融合，[7]潘欢迎,张学海,鲁涛涛,等.对创新性实验教学的思考[J].教

实践表明可以有效地提高流体力学的教学效果。以流体的育教学论坛,2012(2):209-210.

粘性为例，在教学中首先采用生活中流体粘性作用的现象

编辑李金枝

渊上接第70页冤

用Schaeffer-Fulton法的芽孢染色实验课结束，不仅酒精社,2007:76.

灯、实验台等沾上很多染料，实验室里也产生了很多的孔雀[3]陈金春,陈国强.微生物学实验指导[M].北京:清华大学出版

石绿有毒蒸汽或水蒸汽。

社,2005:72.

所以，综合考虑，我们目前采用的教学方法是方法3和[4]赵斌,何绍江.微生物学实验[M].北京:科学出版社,2002:

方法6，并且将芽孢染色观察实验和革兰氏染色观察两个实42-43.

验项目安排在一个下午完成，引导学生先完成芽孢杆菌革[5]杨革.微生物学实验教程[M].北京:科学出版社,2004:22-23.兰氏染色后留意观察少数形成的无色芽孢，然后再观察用[6]唐丽杰.微生物学实验[M].哈尔滨:哈尔滨工业大学出版社,

方法3或方法6完成的芽孢染色涂片，取得了较好的实验2005:41.

[7]郑冬超,王甜,李媛媛,等.细菌芽孢染色法的改良探索[J].实

效果，由于这两种芽孢染色方法都是冷染法，需要初染的时验科学与技术,2014,12(5):23-24.

间比较长一些，同学们在芽孢初染等待的时间去完成革兰[8]陈豪,郭佳媛,刘美杉,等.枯草芽胞杆菌染色方法的探讨[J].

氏染色实验和观察，这样统筹利用时间，提高课堂的效率。基础医学研究,2017,31(11):131-132.

实践显示，这两种方法简便易行、有效、结果明显，更适于在[9]郑冬超,樊佳,王雨昊,等.浸染法改良细菌芽胞染色实验的探

实验教学中应用，并且也比较环保和安全。

索[J].实验技术与管理,2015,32(7):191-192.

[10]JamesW.Bartholomew,TodMittwer.ASimplifiedBacte-

参考文献

rialSporeStain[J].Staintechnology,1950,25(3):[1]周德庆.微生物学教程[M].北京:高等教育出版社,2010:25.153-156(Publishedonline:12July,2009).

[2]沈萍,范秀荣,李广武.微生物学实验[M].北京:高等教育出版

编辑李金枝75

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