Folin_Ciocaileu比色法测定菊苣中多酚的含量_尚红梅

ＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＬＳＣＩＥＮＣＥ　１４４５－１４４８

／０９２０１３

ＦｏｌｉｎＣｉｏｃａｉｌｅｕ比色法测定－菊苣中多酚的含量

尚红梅，陈诚，刘祥，姚海俊，刘亚琪

（）吉林农业大学动物科学技术学院，吉林长春１３０１１８

摘要：本研究采用Ｆ中的多酚含量进行测定。以没食子酸为对照ｏｌｉｎｉｏｃａｌｔｅｕ比色法对菊苣（Ｃｉｃｈｏｒｉｕｍｉｎｔｂｕｓ）－Ｃ　ｙ·ｍ品，检测波长为７在０～５μ没食子酸吸光度与其质量浓度呈良好的线性关系６５ｎｍ。结果表明，Ｌ－１范围内，ｇ

２

（）；对稳定性、精密度、重现性、回收率进行了试验，相对标准偏差（为０．Ｒ＝０．９９９７ＲＳＤ）２３％～１．６０％。该方法　

简便、快速、准确，是检测菊苣中多酚的可靠方法。根据拟合的线性回归方程进行菊苣各器官多酚的定量测定，结

－１

·ｇ。果表明，菊苣根、茎、叶、花和种子中的多酚含量分别为６．７１、２４．００、３２．０３、２０．３４和１０．１７ｍｇ

关键词：菊苣；多酚；Ｆｏｌｉｎｉｏｃａｌｔｅｕ法－Ｃ

（）中图分类号：Ｑ９４９．７８３．５　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１００１０６２９２０１３０９１４４５０４－－－＊

为菊科菊苣属多年生Ｃｉｃｈｏｒｉｕｍｉｎｔｂｕｓ）　　菊苣（　ｙ草本植物，原产于欧洲、西亚、中亚和北美洲，在我国

］１３－。菊苣的地上部西北、华北及东北等地也有分布［

将菊苣各器官干粉放入密封袋中保存０．４５ｍｍ筛，

待测。没食子酸标准品购于阿拉丁试剂有限公司，其它试剂和药品均为分析纯。

仪器设备：高功率数控超声波清洗仪（ＫＱ－，昆山市超声仪器有限公司生产）分析天１００ＫＤＥ，平（上海民桥精密科学仪器有限公司生ＦＡ２００４Ｎ，，可见光分光光度计（上海现科分产）ＭＯＤＥＬ７２２，，光仪器有限公司生产）电热恒温水浴锅（ＸＭＴＤ－。上海跃进医疗器械有限公司生产）２０４，

］。１．２试验方法　福林试剂配制参照文献［９１０－，标准液配制：精密称取没食子酸０用蒸馏．００５ｇ

－１

·ｍ。水定容至５该标准液浓度为１０ｍＬ，００μＬｇ］标注曲线建立：参照文献［建立标准曲线，９１０－脂肪酸、糖类、黄酮、菊苣酸、多种维分含有蛋白质、

生素等生物活性成分，是一种优质牧草和新型的保

］４５－。其肉质根含有菊粉和绿原酸等，健蔬菜［是工业］６７－。菊苣酸和绿原酸均为多酚和药品的生产原料［

类物质，在菊苣的药效功能中发挥着重要作用。据报道，绿原酸具有抗氧化、降血糖、降血压、抗菌、抗

８］，病毒等多种药理活性［菊苣酸具有增强免疫功能５］

。因此，测定菊苣中多酚含量对于菊和抗炎作用［

苣药用价值的评价具有重要意义。本研究采用Ｆｏ－以没ｌｉｎＣｉｏｃａｌｔｅｕ比色法检测菊苣中的多酚含量，－食子酸为对照品，并对其稳定性、精密度、重现性、回收率等进行试验，最后对菊苣不同器官（根、茎、叶、花、种子）中的多酚含量进行测定，以期为菊苣资源的进一步开发利用提供基础数据。

得回归方程

（）１２０３ｘ－０．００１１Ｒ２＝０．９９９７．　　　ｙ＝０．

·ｍ，式中，ｘ表示浓度（Ｌ－１）ｇｙ表示吸光度。μ·ｍ表明没食子酸浓度在０～５μＬ－１范围内与ｇ

其吸光值呈现良好的线性关系，符合朗伯比尔定律，该方程可用于菊苣多酚的定量测定。

，样品溶液制备：精确称取待测样品０．加入５ｇ提取液１体积比４∶１）００％甲醇＋０．５％磷酸（２５超声处理６过滤，用提取液定容至２ｍＬ，０ｍｉｎ，５

备用。ｍＬ，

１　材料与方法

１．１试验材料　植物材料和试剂：２０１１年１０月收

获新鲜５月龄菊苣，采收地点在吉林省长春市吉林农业大学牧草园。将菊苣根清洗干净，切成３～５菊苣嫩茎剪成２～３ｃ连同叶ｍｍ薄片，ｍ的茎段，

花、种子置于室内阴干至质量恒定，粉碎，过片、

＊

收稿日期：２０１２１２１６２０１３０１０７－－　　接受日期：－－）；）；基金项目：吉林省科技发展计划青年科研基金（国家级大学生创新创业训练计划（吉林农业大学大学生科技２０１００１４４２０１２１０１９３０１１

）创新基金（２０１２ＺＲ０５０４

，，：作者简介：尚红梅（女（满族）吉林四平人，讲师，硕士，研究方向为饲草资源开发与利用。Ｅ－ｍ１９８１ａｉｌｓｈａｎｍｅｉ２０００＠１６３．ｃｏｍ－）ｇ

１４４６

）ＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＬＳＣＩＥＮＣＥ（Ｖｏｌ．３０，Ｎｏ．０９　／０９２０１３

样品测定：精密量取根样品处理液２茎、００μＬ，叶、花样品处理液各５种子样品处理液１０μＬ，００置于１加入蒸馏水６ｍ再加Ｌ，０ｍＬ容量瓶中，Ｌ，μ

入福林试剂０．摇匀，加入２５ｍＬ，１ｍｉｎ之后，０％混匀，用蒸馏水定容至刻度，ＣＯ．５ｍＬ，Ｎａ２３溶液１

，自然冷却至室温，以相应试剂为７５℃水浴１０ｍｉｎ空白，在７６５ｎｍ处测定吸光度。

稳定性试验：取菊苣根、茎、叶、花、种子粉末样于室温放置０、品按上述样品溶液制备及测定方法，

２、４、６、８、１０ｈ测定吸光度值。

精密度试验：取菊苣根、茎、叶、花、种子粉末样品按上述样品溶液制备及测定方法测定吸光度值，重复测定５次。

重现性试验：称取相同质量的菊苣根、茎、叶、花、种子粉末样品各５份，按上述样品溶液制备及测定方法测定吸光度值。

回收率试验：采用加标回收法，将已知多酚含量的菊苣根、茎、叶、花、种子样品各取３份，共１５份，。每个部位的样品各加入与０．每份０．５ｇ５ｇ样品

中多酚含量相近的对照品，按上述提取方法与测定方法检测总酚浓度，并计算回收率。

２　结果与分析

精２．１方法可行性　对样品测定方法的稳定性、

密度、重现性、回收率进行考察发现，用该方法测定菊在体系反应完全后放置１苣各器官多酚含量，０ｈ内测定值仍比较稳定，其相对标准偏差为０．６９７％～）。采用此方法测定菊苣多酚含量，表１精密０．９０３％（

。Ｒ表２）度良好，ＲＳＤ为０．３５４％～０．５０９％（ＳＤ为

表明该方法具有良好的重现性０．５６１％～０．８７１％，（）。各器官回收率均较高，表３表明该方ＲＳＤ较小，法准确可靠，可用于菊苣各器官多酚含量的测定（）。表４

２．２菊苣各器官多酚含量的测定　菊苣各器官

多酚含量差异较大，其中叶片总酚含量最高，达

－１－１

·ｇ，、其次分别为茎（３２．０３ｍ２４．００ｍｇｇ·ｇ）

－１－１·ｇ）·ｇ），花（和种子（而根２０．３４ｍ１０．１７ｍｇｇ－１

·ｇ（）。中多酚含量最低，为６．表５７１ｍｇ

表１　稳定性试验结果

Ｔａｂｌｅ１　Ｒｅｓｕｌｔｓｏｆｓｔａｂｉｌｉｔｅｘｅｒｉｍｅｎｔ　　　ｙｐ　

时间／Ｔｉｍｅｈ０　２　４　６　８　１０　／％ＲＳＤ

根Ｒｏｏｔ０．３２７　０．３２８　０．３３０　０．３２８　０．３２４　０．３２２　０．９０３　

茎Ｓｔｅｍ０．２９８　０．２９８　０．２９４　０．２９５　０．２９７　０．２９３　０．７２２　

吸光度Ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ

叶Ｌｅａｆ０．４２６　０．４２１　０．４１８　０．４２３　０．４２１　０．４２５　０．６９７　

花Ｆｌｏｗｅｒ０．２５３　０．２５１　０．２５４　０．２５７　０．２５６　０．２５４　０．８４１　

种子Ｓｅｅｄ０．２５３０．２５１０．２４９０．２５２０．２５３０．２５４０．７１０

表２　精密度试验结果

Ｔａｂｌｅ２　Ｒｅｓｕｌｔｓｏｆｒｅｃｉｓｉｏｎｅｘｅｒｉｍｅｎｔ　　　　ｐｐ

编号Ｎｕｍｂｅｒ１　２　３　４　５　／％ＲＳＤ

根Ｒｏｏｔ０．３２４　０．３２１　０．３２２　０．３２３　０．３２２　０．３５４　

茎Ｓｔｅｍ０．３１２　０．３１３　０．３１３　０．３１０　０．３１１　０．４１８　

吸光度Ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ

叶Ｌｅａｆ０．４４４　０．４４９　０．４４５　０．４４７　０．４４８　０．４６４　

花Ｆｌｏｗｅｒ０．２５４　０．２５３　０．２５５　０．２５４　０．２５２　０．４５０　

种子Ｓｅｅｄ０．２５６０．２５５０．２５７０．２５８０．２５５０．５０９

／０９２０１３草　业　科　学（第３０卷０９期）

表３　重现性试验结果

Ｔａｂｌｅ３　Ｒｅｓｕｌｔｓｏｆｒｅｅａｔｉｏｎｅｘｅｒｉｍｅｎｔ　　　　ｐｐ

１４４７

编号Ｎｕｍｂｅｒ１　２　３　４　５　／％ＲＳＤ

根Ｒｏｏｔ０．３３３　０．３３７　０．３３８　０．３３６　０．３３２　０．７７２　

茎Ｓｔｅｍ０．３２５　０．３２７　０．３３１　０．３３２　０．３２９　０．８７１　

吸光度Ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ

叶Ｌｅａｆ０．４２８　０．４２７　０．４２４　０．４２２　０．４２５　０．５６１　

花Ｆｌｏｗｅｒ０．２６４　０．２６３　０．２６６　０．２６５　０．２６７　０．５９７　

种子Ｓｅｅｄ０．２６３０．２６１０．２６２０．２６６０．２６４０．７３１

表４　回收率试验结果

Ｔａｂｌｅ４　Ｒｅｓｕｌｔｓｏｆｒｅｃｏｖｅｒｅｘｅｒｉｍｅｎｔ　　　ｙｐ　

编号Ｎｕｍｂｅｒ１　２３　４　５６　７　８９　１０　１１１２　１３　１４１５　

种子Ｓｅｅｄ　花Ｆｌｏｗｅｒ　叶Ｌｅａｆ　茎Ｓｔｅｍ　根Ｒｏｏｔ　器官

Ｏｒａｎｓｇ

样品中量

Ｓａｍｌｅｐ

／ｍｃｏｎｔｅｎｔｇ

３．２７　３．４７　３．３２　１２．３４　１２．６５　１１．０２　１５．７０　１５．９２　１６．４３　１０．０３　１０．２５　１０．２４　５．１４　５．００　５．１１　

加入量

Ａｄｄｉｔｉｏｎ

／ｍｃｏｎｔｅｎｔｇ

３．３０　３．３０　３．３０　１２．００　１２．００　１２．００　１６．００　１６．００　１６．００　１０．００　１０．００　１０．００　５．００　５．００　５．００　

测得量

Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ

／ｍｃｏｎｔｅｎｔｇ

６．５３　６．９０　６．６７　２４．６８　２５．３４　２２．９３　３１．４４　３１．９３　３２．７６　２０．０７　２０．５３　２０．４９　１０．２８　１０．１０　１０．２２　

回收率

Ｒｅｃｏｖｅｒｙ

／％ｒａｔｅ９９．４６１０１．９０　１００．７５１０１．４０１０２．８２　９９．６３９９．１９１００．０２　１０１．０１１００．２０１０１．３７　１０１．２２１０１．４３１００．９８　１０１．１１

１０１．１７　

０．２３

１００．９３　

０．６３

１００．０７　

０．９１

１０１．２８　

１．６０

１００．７０　

１．２２

平均值

／Ｍｅａｎ％

／ＲＳＤ％

）表５　菊苣各器官总酚含量测定结果（ｎ＝５Ｔａｂｌｅ５　Ｒｅｓｕｌｔｓｏｆｏｌｈｅｎｏｌｃｏｎｔｅｎｔｉｎ　　　　　ｐｙｐ

（）ｃｈｉｃｏｒｏｒａｎｓｎ＝５ｙｇ　

器官　ａｎＯｒ　ｇ根Ｒｏｏｔ　茎Ｓｔｅｍ　叶Ｌｅａｆ　花Ｆｌｏｗｅｒ　种子Ｓｅｅｄ　

总酚含量

／·ｇＰｏｌｈｅｎｏｌｃｏｎｔｅｎｔｍ　ｙｐｇ

６．７１±０．１２２４．００±０．８９３２．０３±０．４２２０．３４±０．１４１０．１７±０．０９

－１

铁氰化钾分光光度法、薄层层析法、高效液相色谱法、气相色谱法、包括ＦＦｏｌｉｎｏｌｉｎｅｎｉｓ－酚比色法（－Ｄ

］１１１２－。比色法和Ｆ等多种方法［ｏｌｉｎＣｉｏｃａｌｔｅｕ比色法）－其中，高锰酸钾法简便易行，但被测液中的还原性物滴定终点较难观察，测定灵敏度较低；质易被氧化，

香草醛法和铁氰化钾法对测定条件要求较为严格，测定时稳定性较差，易出现沉淀；薄层层析法在分离速度和准确定量等方面存在缺陷；高效液相色效果、

谱法成本较高，不适于大量的定量分析；气相色谱法

］１１１２－；需要进行衍生化处理，操作比较麻烦［相比较而

３　讨论与结论

多酚含量的测定方法有高锰酸钾法、香草醛法、

言，简单易行。ＦＦｏｌｉｎｏｌｉｎ－酚比色法灵敏度较高，－１４４８

）ＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＬＳＣＩＥＮＣＥ（Ｖｏｌ．３０，Ｎｏ．０９　／０９２０１３

Ｃｉｏｃａｌｔｅｕ比色法是Ｆｏｌｉｎｅｎｉｓ比色法的改进方－Ｄ法，是在Ｆｏｌｉｎｅｎｉｓ比色法的显色剂中加入锂盐，－Ｄ克服了Ｆ较之更为ｏｌｉｎｅｎｉｓ法显色剂的不稳定性，－Ｄ

１２］

。灵敏［

［］李建玲，周峰，等．菊苣中菊苣酸提取工艺优化５　华春，

［］（）：食品科学，Ｊ．２０１１，３２２０１２６１２９．－［］呼天明，张存莉，等．大孔树脂用于菊苣菊粉的６　尚红梅，

］（）：西北植物学报，脱色研究［Ｊ．２００６，２６９１９１６１９２０．－［］，，＇ｋｉｅｗｉｃｚ７ｕｒｏńｓｋｉＡ，ＪｕＪＺｄｕńｃｚｋＺｅｔａｌ．Ｃａｆｆｅｏｌｕｉｎｉｃ　Ｊ　　　　　ｓｇｙｙｑ

，ｒｉｃｈｅｘｔｒａｃｔｆｒｏｍｃｈｉｃｏｒｓｅｅｄｓｉｍｒｏｖｅｓｌｃｅｍｉａａｃｉｄ－　　　　　ｙｐｇｙ　，［］ａｔｈｅｒｏｅｎｉｃｉｎｄｅｘａｎｄａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓｔａｔｕｓｉｎｒａｔｓＪ．Ｎｕｔｒｉ　　　　　－ｇ，，（）：ｔｉｏｎ２０１２２８３３００３０６．－［］李耀华，梁臣艳，等．８ＨＰＬＣ测定桑叶配方颗粒　韦建华，

］绿原酸和咖啡酸［中国实验方剂学杂中原儿茶酸、Ｊ．（）：志，２０１１，１７３９３９５．－［］孙丽萍，董捷，等．９Ｆｏｌｉｎｉｏｃａｉｌｅｕ比色法测定　田文礼，－Ｃ

］（）：蜂花粉中的总酚［食品科学，Ｊ．２００７，２８２２５８２６０．－［］张帆，田树革，等．１０Ｆｏｌｉｎｉｏｃａｉｌｅｕ比色法测定　何文静，－Ｃ

］中国实验方剂学杂志，啤酒花中多酚的含量［Ｊ．（）：２０１１，１７５５８６０．－［］李建科．１１Ｆｏｌｉｎｉｏｃａｌｔｅｕ比色法测定石榴皮多　杜丹丹，－Ｃ

］西北农林科技大学学报（自然酚含量条件的优化［Ｊ．，（）：科学版）２０１１，３９５１９０１９６．－［张海德，何双，等．１２］Ｆｏｌｉｎｉｏｃａｉｌｅｕｓ法测定槟　郑仕宏，－Ｃ

］榔中多酚含量的研究［中南林业科技大学学报，Ｊ．（）：２００９，２９６１６５１６９．－本试验采用超声提取菊苣中的多酚，以没食子酸为对照品，采用ＦｏｌｉｎＣｉｏｃａｌｔｅｕ比色法测定多酚，－结果表明该法具有精密度高、稳定性和重现性好等是检测菊苣中多酚的可靠方法，为菊苣有效成优点，

分的进一步开发利用提供了有利依据。参考文献

［］呼天明，张存莉，等．菊苣菊粉提取与纯化研究１　吴洪新，

［］，西北农林科技大学学报（自然科学版）Ｊ．２００６，（）：３４６９１９５．－［］吴洪新，张存莉，等．菊苣系列产品的开发研究２　呼天明，

］，述评［西北农林科技大学学报（自然科学版）Ｊ．２００６，（）：３４２３４３８．－［］］白史且，彭燕，等．菊苣种质资源研究进展［草３Ｊ．　罗燕，

（）：业科学，２０１０，２７７１２３１３２．－［］杜金鸿，陈果，等．菊苣根乙醇提取工艺优化及４　刘玉燕，

］（）：除草活性测定［草业科学，Ｊ．２０１１，２８５８４８８５４．－Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｏｌｈｅｎｏｌｃｏｎｔｅｎｔｉｎ　　　　ｐｙｐｃｈｉｃｏｒｂＦｏｌｉｎＣｉｏｃａｌｔｅｕｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒ－　ｙｙｙ　　

，，，ＳＨＡＮＧ　ＨｏｎｅｉＣＨＥＮＣｈｅｎＬＩＵ　ＸｉａｎＹＡＯ　Ｈａｉｕｎ，ＬＩＵ　Ｙａｉ－ｍ　－－ｑｇｇｇｊ

（，，）ＣｏｌｌｅｅｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏＪｉｌｉｎＡｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔＣｈａｎｃｈｕｎ１３０１１８，Ｃｈｉｎａ　　　　　　　　ｇｇｙｇｙｇ

：ＡｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｏｌｈｅｎｏｌＡｂｓｔｒａｃｔｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｏｆｉｎｃｈｉｃｏｒｗａｓｓｔｕｄｉｅｄｂｕｓｉｎＦｏｌｉｎＣｉｏｃａｌ　　　　　　　　　－－ｑｐｙｐｙｙｇ　　　ｔｅｕｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒ．Ｕｓｉｎａｌｌｉｃａｃｉｄａｓｓｔａｎｄａｒｄａｎｄｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｔｈｗａｓ７６５ｎｍ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓ　　　　　　　　　　　ｙｇｇｇ　ｕａｎｔｉｆｉｎｏｌｈｅｎｏｌｏｏｄｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｓｔａｎｄａｒｄｃｕｒｖｅｆｏｒｅｘｈｉｂｉｔｅｄａｌｉｎｅａｒｉｔｉｎｔｈｅｒａｎｅｏｆ０～５　　　　　　　　　　　　　　ｑｙｇｐｙｐｇｙｇ　　·ｍ，，，Ｌ－１（Ｒ２＝０．９９９７）．Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅｓｔａｂｉｌｉｔｒｅｃｉｓｉｏｎｒｅｅｔｉｔｉｏｎａｎｄｒｅｃｏｖｅｒｒａｔｅｗｅｒｅａｓｓａｅｄ　　　　　ｇｙｐｐｙｙ　μ

，，，ｗｉｔｈｒｅｌａｔｉｖｅｓｔａｎｄａｒｄｄｅｖｉａｔｉｏｎ（ＲＳＤ）ａｓ０．２３％～１．６０％．Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｉｓｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔｆａｓｔｅｘａｃｔａｎｄ　　　　　　　，ｒｅｌｉａｂｌｅｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｔｏｔａｌｏｌｈｅｎｏｌｉｎｃｈｉｃｏｒ．Ａｃｃｏｒｄｉｎｔｏｔｈｅｆｉｔｔｅｄｌｉｎｅａｒｒｅｒｅｓｓｉｏｎｅｕａｔｉｏｎｔｈｅ　　　　　　　　　　　　ｐｙｐｙｇｇｑ　，，，ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｃｈｉｃｏｒｏｒａｎｓｗａｓｍａｄｅａｎｄｃｏｎｔｅｎｔｏｆｒｏｏｔｓｔｅｍ，ｌｅａｆｆｌｏｗｅｒｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｏｌｈｅｎｏｌ　　　　　　　　　ｙｇｑｐｙｐ　

－１·ｇ，ａｎｄｓｅｅｄｗｅｒｅ６．７１，２４．００，３２．０３，２０．３４ａｎｄ１０．１７ｍｒｅｓｅｃｔｉｖｅｌ．　　　　ｇｐｙ：；；ＫｅｗｏｒｄｓｃｈｉｃｏｒｏｌｈｅｎｏｌＦｏｌｉｎＣｉｏｃａｌｔｅｕｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒ－　ｙｐｙｐｙｙ　

：：ＣｏｒｒｅｓｏｎｄｉｎａｕｔｈｏｒＳＨＡＮＧ　Ｈｏｎｅｉａｉｌｓｈａｎｍｅｉ２０００＠１６３．ｃｏｍ－ｍ　Ｅ－ｍｐｇｇｇ