血红蛋白测定

血红蛋白测定

【实验目的】

掌握血红蛋白测定的临床意义

熟悉毛细管采血过程，分光光度计的操作

了解血红蛋白测定的注意事项

【实验原理】

血液在血红蛋白转化液中表面活性剂的作用下溶血后，血红蛋白（除SHb外）被高铁氰化钾（K3Fe（CN）6）氧化为高铁血红蛋白（Hi），Hi再与氰化钾（KCN）中的氰离子（CN-）结合生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白（HiCN）。HiCN最大吸收波峰在540nm,最小吸收谷为504nm。可用分光光度计直接测定或用HiCN 标准液比色法测定。即可求出待测血红蛋白浓度。此法称HiCN法。

【试剂】

血红蛋白转化液（文齐氏液，Van kampen-Zijlstra’液）：

氰化钾50 mg ，提供氰离子（CN-）

高铁氰化钾200 mg ，氧化剂

无水磷酸二氢钾140 mg ，缓冲液成分，维持溶液的pH值，

【实验操作】

（1） 取一支试管加入5.0ml HiCN试剂，取全血20μl，加入到5.0ml HiCN试剂中，混匀后静置5 min，使血红蛋白转化完全。

（2） 分光光度计，波长540nm ，比色杯光径1.0cm ，杯温20-300C，以蒸馏水或空白转化液调零，测定样品吸光度值（A）。

【计算】

根据比尔定律，浓度与吸光度成正比，所以实际操作中我们还可以直接用待测液的吸光度A测/标准液的吸光度A标＝待测液的浓度C测/标准液的浓度C标来直接计算待测液的浓度。

【参考值】

男性：120 ~160g／L ，女性：110 ~150g／L ，新生儿：170 ~200g／L 。

【临床意义】

照书上写

图1 红细胞和血红蛋白的生理变化曲线

红细胞计数医学决定水平：高于6.8×1012/L，应采取相应治疗措施；低于3.5×1012/L可诊断贫血；低于1.5×1012/L应考虑输血。