粒细胞集落刺激因子对肝干细胞动员作用的研究

粒细胞集落刺激因子对肝干细胞动员作用的研究

第四军医大学实验动物中心(西安710032)　万东君　李六金　胡沛珍　朱华平　　摘　要　目的:了解粒细胞集落刺激因子(G2CSF)对肝干细胞的动员作用影响。方法:用CCl4法复制大鼠肝硬化模型,分为2组,行2󰃗3肝切除3h后,实验组皮下注射G2CSF,对照组注射等量生理盐水,分别于24h、48h、7d、10d、2周后处死,取肝脏切片,免疫组化方法观测动物模型肝脏中CD34、结果:皮下注射G2Thy21表达情况。CSF5d后,G2CSF实验组和对照组肝脏内均未见Thy21+细胞,CD34+细胞仅存在于门脉区血管内皮,实验组和对照组无差异。结论:G2CSF短期内应用对于肝干细胞的动员无明显作用。　　主题词　肝󰃗细胞学　集落刺激因子󰃗免疫学　动物实验　大鼠　　随着对肝干细胞表面抗原标志深入的研究,发现骨髓造血干细胞的许多抗原标志物如CD34、

[1]

移植Thy21、c2kit等在肝干细胞表面也有表达。

实验陆续证实有一小部分骨髓造血干细胞中可以横向分化为肝细胞[2～6]。我们使用人重组粒细胞

集落刺激因子(rhG2CSF)皮下注射肝硬化大鼠,观察G2CSF对肝干细胞的动员情况。

材料和方法

1　材料的选择　实验动物:7周龄雄性清洁级SD大鼠30只取自本校实验动物中心,体重100～130g,饲养于清洁级动物房。药物与试剂:人重组粒细胞集落刺激因子(rhG2CSF,华北制药公司),兔抗大鼠CD34、Thy21即用型SABC试剂盒购自博士德生物工程公司。

2　实验方法　SD大鼠肝硬化衰竭模型的建

化,胶原纤维包绕分割肝小叶,假小叶形成,部分肝细胞发生脂肪变性。rhG2CSF实验组和对照组分批在24h、48h、7d、10d和2周后处死,肝脏固定石蜡包埋切片免疫组化染色,结果两组Thy21显色均为阴性;CD34仅在门脉区血管内皮细胞表达,其他区域人未见CD34阳性细胞。

讨　论

依照SttewartSell的理论设想[7],肝脏干细胞有内源性和外源性之分,卵圆细胞属内源性,而骨髓来源的HSC属外源性干细胞,具有很高的可塑性。骨髓移植后,供者来源的干细胞能在受体多种非造血组织如骨骼肌、心肌、肝脏胆导管和血管内皮组织中被发现。陈运贤等[8]发现rhG2CSF皮下注射5d可动员CD34阳性细胞参与急性心肌损伤细胞的修复。许多研究小组曾经将骨髓细胞直接移植于腹腔网膜内或脾内,但未见形成肝组织结构。可能一方面是骨髓中能转化为肝细胞的造血干细胞数量非常少,另一方面造血干细胞只能在肝脏提供的微环境中才能发育成肝细胞。

从现有的研究结果分析,我们发现:①外源骨髓造血干细胞在损伤后的肝脏中可快速分化为肝细胞。Petersen等[2]将受体大鼠肝脏予以22AAF󰃗CCl4处理后,进行供体骨髓移植,9d后在

立:大鼠随机分为2组,每组15只,60%CCl4油

剂,按0.3ml󰃗kg,皮下注射,每周2次,并测体重,根据动物体重随时调整剂量,以动物的体重不增加为准,7周后,停药观察2周,如若出现体重增加,继续给药,直至出现不可逆的肝硬化。“846”全剂麻醉后,经上腹正中切口入腹,行肝脏2󰃗3切除术。3h后,实验组皮下注射rhG2CSF10Λg󰃗kg・d,共5d。对照组皮下注射等量生理盐水共5d。24h、48h、7d、10d和2周后,每组每次分别各处死3只,取肝脏,10%甲醛固定,石蜡包埋切片。分别做HE染色,CD34、Thy21免疫组化显色,计算机进行图像分析,SPSS软件统计分析。

结　果

各组大鼠肝脏石蜡切片HE染色均见肝纤维

受体大鼠肝脏中检测到供体来源的卵圆细胞;②外源骨髓造血干细胞在正常肝脏中分化缓慢。

[9]

Theise等报道将外源骨髓移植至无明显肝损伤的小鼠体内,6月后,受体小鼠肝脏中1%～2%的肝细胞来源于供体骨髓。以上都是研究异体骨髓造血干细胞参与肝细胞的分化。我们尝试使用G2

204

CSF动员自身骨髓造血干细胞参与肝损伤的修

陕西医学杂志2003年3月第32卷第3期

Hepatocyesfrom

non2hepaticadult

stem

.cells

复,CCl4诱导肝硬化大鼠模型后行肝脏2󰃗3切除

[8]

术,rhG2CSF用法参照文献,并未见到肝干细胞的活化。分析原因,一方面可能未使用AAF抑制肝细胞的增殖,影响了肝干细胞的激活;其次,也

Nature,2000;406(7):257

4　NeilD,TheiseM,Nimmakayalu,RG,etal.Liverfrom

.Hepatology,2000;32(6):11bonemarrowinhumans

5　LagasseE,ConnorH,Al2DhalimyM,etal.Purified

hepatopoietic

stemm

cellcan

differentiate

into

hepatocytesinvivo.NatureMed,2000;6(11):12296　AvitalI,InderbitzinD,AokiT,etal.

Isolation,

characterizationandtransplantationofbonemarrow2derivedhepatocytestemcells.BiochemBiophysResCommun,2001;288(1):156

7　StewartS.Heterogeneityandplasticityofhepatocyte

.Hepatology,2001;33(3):738lineagecells

8　陈运贤,欧瑞明,钟雪云,等.粒细胞集落刺激因子动

可能rhG2CSF动员骨髓造血干细胞向肝细胞分

化需要更长的时间或复杂的横向分化条件。目前骨髓造血干细胞向肝细胞的横向分化研究仅在体内观察到,体外实验尚未见报道,有关骨髓造血干细胞分化的机理还不清楚。尽管我们的实验未能观察到rhG2CSF在肝硬化大鼠中对肝干细胞的动员,但作为一种尝试对骨髓造血干细胞和肝干细胞的相互关系做了一些有意义的探索。

参考文献

1　万东君,王春雨,李六金.肝干细胞研究现状.世界华

员骨髓造血干细胞治疗大鼠急性心肌梗塞.中国病理生理杂志,2002;18(1):1

9　TheiseND,BadveS,SaxenaR,etal.Derivationof

hepatocytesfrombonemarrowcellsinmiceafterradiation2inducedmyeloablation.Hepatology,2000;31(1):235

(收稿:2002208228)

人消化杂志,2002;10(4):452

2　PetersenBE,BowenWC,PatreneKD,etal.Bone

marrowasapotentialsourceofhepaticovalcells.Science,1999;284(5):11683　MalcolmrA,

RichardP,

RosemaryJ,etal.

他巴唑致粒细胞缺乏症29例临床分析

西安交通大学第一医院内科(西安710061)　刘　娟　习杰英　樊鹏霞

　　摘　要　目的:分析他巴唑致粒细胞缺乏症(粒缺)的临床特点,探讨有效治疗方法。方

法:回顾性分析29例他巴唑致粒缺的临床资料。结果:23例粒缺发生于服他巴唑后4～12周,口服升白细胞药物组白细胞开始上升时间为(6.26±1.48)d,上升至正常的时间为(14.04±2.36)d,而联合用重组人粒细胞集落刺激因子(rhG2巨噬细胞集落刺CSF)或重组人粒󰃗激因子(rhGM2CSF)组分别为(2.50±1.17)d和(5.25±1.42)d。结论:他巴唑致粒缺的危险阶段是治疗初1～3月,rhG2CSF或rhGM2CSF是治疗此类粒缺的一种有效的方法。　　主题词　粒细胞缺乏症󰃗病因学　咪唑类󰃗副作用　　本文分析总结我院近10年来29例甲亢因服他巴唑而发生粒细胞缺乏症(粒缺)患者的临床资料,现报道如下。

临床资料

1　一般资料　29例患者中,男4例,女25

20mg󰃗d。发生粒缺前白细胞情况及粒缺出现时

间:29例患者服他巴唑前查白细胞均正常,服药后,26例粒缺发生前至少1月未查白细胞,3例定期查白细胞,至发生粒缺前1～2周白细胞正常。29例粒缺出现于服药后2～22周,平均7.72±4.27周,其中23例发生在服药后4～12周。

2　临床表现　粒缺伴发热29例(100%),咽

例,年龄25～60岁,其中21～40岁5例,40岁以上24例。病史中无放射线、毒物、化学和其它药物接触史。24例服药剂量他巴唑≥30mg󰃗d,5例

痛27例(93.1%),肌肉、关节痛14例(48.2%),