4周有氧训练诱导AMPKα2对小鼠骨骼肌Nrf2-ARE结合活性的影响

文章编号：１００２．９８２６（２０１７）０６－００９０－０５　ＤＯＩ：１０．１６４７０￣．ｃｓｓｔ．２０１７０６０１１　中国体育科技　２０１７年（第５３卷）第６期　ＣＨＩＮＡ　ＳＰＯＲＴ　ＳＣＩＥＮＣＥ　ＡＮＤ　ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ　Ｖｏ１．５３，Ｎｏ．６，９０－９４，２０１７．　４周有氧训练诱导ＡＭＰＫａ２对小鼠骨骼肌　Ｎｒｆ２．ＡＲＥ结合活性的影响　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ＡＭＰＫａ２　ｏｎ　Ｎｒｆ２一ＡＲＥ　Ｂｉｎｄｉｎｇ　Ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　Ｓｋｅｌｅｔａｌ　Ｍｕｓｃｌｅ　ｏｆ　Ｍｉｃｅ　Ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　Ａｅｒｏｂｉｃ　Ｔｒａｉｎｉｎｇ　ｆｏｒ　Ｆｏｕｒ　Ｗｅｅｋｓ　罗琳　，何诗依　，严露　，姬卫秀　，张缨　ＬＵＯ　Ｌｉｎ　¨，ＨＥ　Ｓｈｉ—ｙｉ　，ＹＡＮ　Ｌｕ　，ＪＩ　Ｗｅｉ—ｘｉｕ　，ＺＨＡＮＧＹｉｎｇ　摘要：目的：探讨４周有氧训练诱导ＡＭＰＫＣ【：对小鼠骨骼肌Ｎｒｆ２．ＡＲＥ结合转录活性的影响及　可能机制。方法：ＡＭＰＫａ，转基因（ＴＧ）小鼠及其野生型（ｗＴ），随机分为对照组和训练组，　每组各１０只。训练组每天进行坡度为０、速度为１２　ｍ／ｍｉｎ的跑台训练、１　ｌｌ／天、６天／周，持续４　周。对照组不参与训练。最后一次跑台训练结束４８　ｈ后取材，测定骨骼？，ＬＮｒｆ２．ＡＲＥ结合活　性、抗氧化酶ｍＲＮＡ和蛋白表达以及骨骼肌ＲＯＳ含量。结果：４周有氧训练后：１）ＷＴ和ＴＧ小　鼠骨骼￣／ＬＲＯＳ水平、Ｎｒｆ２．ＡＲＥ结合活性显著增加（Ｐ＜０．０５）；与训练组ｗＴ鼠相比，训练组ＴＧ　鼠骨骼）ＩＬＲＯＳ水平显著降低，Ｎｒｆ２．ＡＲＥ结合活性显著增加（Ｐ＜０．０５　ｏ　２）训练组ｗＴ鼠骨骼　肌ＨＯ一１　ｍＲＮＡ和训练组ＴＧ鼠骨骼肌（Ｇｐｘ一１、ＮＱＯ．１、Ｈ０．１、ＣＡＴ）ｍＲＮＡ表达显著增加（Ｐ＜　０．０５）。３　ｌ】练组ｗＴ鼠骨骼肌蛋白（ＣＡＴ、ＳＯＤ１、Ｈ０．１、ＧＳＲ，Ｐ＜０．０５）表达，训练组ＴＧ鼠骨骼　肌蛋白（Ｇｐｘ．１、ｃＡＴ、ＳＯＤ２、ＮＱｏ．１，Ｐ＜０．０５）和（ＧＣＬｃ、ＳＯＤ１、ＨＯ一１、ＧｓＲ，Ｐ＜０．０１）表达显著　增加；与训练组ｗＴ鼠相比，训练组ＴＧ鼠骨骼肌蛋白（Ｇｐｘ．１、Ｓ０Ｄ１、ＳＯＤ２、ＨＯ．１、ＧＳＲ、ＮＱｏ．　１，Ｐ＜０．０５）和ＧＣＬｃ（Ｐ＜０．Ｏｌ蜃白表达显著增加。结论：４周有氧训练可能诱导ＡＭＰＫ％促　￣Ｎｒｆ２一ＡＲＥ结合活性，进而增加抗氧化酶的蛋白表达，提高机体抗氧化能力。　关键词：ＡＭＰＫ０ｔ２；Ｎｒｆ２；有氧训练；骨骼肌　Ａｂｓｔｒａｃｔ：０ｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆＡＭＰＫ　ａｌｐｈａ　２　ｏｎ　Ｎｒ　一ＡＲＥ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　ｓｋｅｌｅｔａｌ　ｍｕｓｃｌｅ　ｏｆ　ｍｉｃｅ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ａｅｒｏｂｉｃ　ｔｒａｉｎｉｎｇ　ｆｏｒ　ｆｏｕｒ　ｗｅｅｋｓ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｐｏｓｓｉｂｌｅ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ．　Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＡＭＰＫ　ａｌｐｈａ　２　ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ（ＴＧ）ｍｉｃｅ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｗｉｌｄ　ｔｙｐｅ（ＷＴ）ｗｅｒｅ　ｒａｎｄｏｍｌｙ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　ｔｗｏ　ｇｒｏｕｐｓ，ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｔｒａｉｎｉｎｇ　ｒｏｕｐ，ｅａｃｈ　ｇｒｏｕｐ　ｈａｄ　１　ｇ０　ｒａｔｓ．Ｔｈｅ　ｔｒａｉｎｉｎｇ　ｇｒｏｕｐ　ｗａｓ　ｃａｒｒｉｅｄ　ｏｎ　ｔｒｅａｄｍｉｌｌ　ｔｒａｉｎｉｎｇ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｓｌｏｐｅ　ｏｆ０％，ｔｈｅ　ｓｐｅｅｄ　ｏｆ　１２　ｒｎ／ｍｉｎ，１ｈ／ｄａｙｓ，６　ｄａｙｓ／ｗｅｅｋ，　ｏｒ　ｆｏｕｒ　ｆｗｅｅｋｓ．Ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ　ｄｉｄ　ｎｏｔ　ｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅ　ｉｎ　ｔｒａｉｎｉｎｇ．４８　ｈｏｕｒｓ　ａｆｔｅｒ　ｔｈｅ　ｌａｓｔ　ｔｒａｉｎｉｎｇ，ｔｈｅ　Ｎｒｆ２．　ＡＲＥ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｓｋｅｌｅｔａｌ　ｍｕｓｃｌｅ，ｍＲＮＡ，ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎｄ　ＲＯＳ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｉｎ　ｓｋｅｌｅｔａｌ　ｍｕｓｃｌｅ　ｗｅｒｅ　ｍｅａｓｕｒｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ａｆｔｅｒ　ａｅｒｏｂｉｃ　ｔｒａｉｎｉｎｇ　ｆｏｒ　ｆｏｕｒ　ｗｅｅｋｓ，１）Ｒ０Ｓ　ｌｅｖｅｌ　ａｎｄ　Ｎｒｆ＝，．ＡＲＥ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　ｓｋｅｌｅｔａｌ　ｍｕｓｃｌｅ　ｏｆＷＴ　ａｎｄ　ＴＧ　ｍｉｃｅ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ（Ｐ＜０．０５）：ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｒａｉｎｉｎｇ　ｇｒｏｕｐ　ｏｆ　ＷＴ　ｍｉｃｅ，ＲＯＳ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　ＴＧ　ｒａｔｓ　ｉｎ　ｔｒａｉｎｉｎｇ　ｇｒｏｕｐ　ｄｅｃｒｅａｓｅｄ　ｓｉｇｎｉｉｃａｎｔｌｆｙ．　Ｎｒｆｚ－ＡＲＥ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ（Ｐ＜０．０５）．２）ｍＲＮＡ　ＨＯ．１　ｉｎ　ｔｒａｉｎｉｎｇ　ｇｒｏｕｐ　ｏｆ　ＷＴ　ｍｉｃｅ　ａｎｄ（Ｇｐｘ一１，Ｎ００—１，Ｈ０—１，ａｎｄ　ＣＡＴ　ｍＲＮＡ）ｉｎ　ｔｒａｉｎｉｎｇ　ｇｒｏｕｐ　ｏｆＴＧ　ｍｉｃｅ　ｗｅｒｅ　ｓｉｇｎｉｆｉ．　ｃａｎｔｌｙ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０５）．３）Ｐｒｏｔｅｉｎ（ＣＡＴ，ＳＯＤ１，Ｈ０．１，ＧＳＲ，ｌ尸＜０．０５）ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｓｋｅｌｅｔａｌ　ｍｕｓｃｌｅ　ｏｆｔｒａｉｎｉｎｇ　ｇｒｏｕｐ　ｏｆＷＴ　ｒａｔ，ａｎｄｐｒｏｔｅｉｎ（Ｇｐｘ－１，ＣＡＴ，ａｎｄ　ＳＯＤ２，ＮＱＯ．１，Ｐ＜０．０５，Ｓ０Ｄ１，　ＧＣＬｃ：ＨＯ一１，ＧＳＲ，Ｐ＜Ｏ．０１）ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｓｋｅｌｅｔａｌ　ｍｕｓｃｌｅ　ｏｆｔｒａｉｎｉｎｇ　ｇｒｏｕｐ　ｏｆＴＧ　ｍｉｃｅ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ；ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ＷＴ　ｒａｔｓ，ｐｒｏｔｅｉｎ（Ｇｐｘ一１，ＳＯＤ１，ＳＯＤ２，ＨＯ－１，ＧＳＲ，ＮＱＯ－１，尸＜　０．０５：ＧＣＬｃ，Ｐ＜０．０１）ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｓｋｅｌｅｔａ１　ｍｕｓｃｌｅ　ｏｆＴＧ　ｒａｔｓ　ｉｎ　ｔｒａｉｎｉｎｇ　ｇｒｏｕｐ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｉｃａｎｔｌｆｙ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ．Ａｅｒｏｂｉｃ　ｔｒａｉｎｉｎｇ　ｏｆ　ｏｕｒ　ｗｅｅｋｓ　ｃｏｕｌｆｄ　ｉｎｄｕｃｅ　ＡＭＰＫ　ａｌｐｈａ　２，ｐｒｏｍｏｔｅ　ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　Ｎｒｆ２一ＡＲＥ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ａｎｄ　ｉｍｐｒｏｖｅ　ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｅｎｚｙｍｅｓ，ｗｈｉｃｈ　ｃａｎ　ｉｍｐｒｏｖｅ　ｎｔａｉｏｘｉｄａｎｔ　ｃａｐａｃｉｔｙ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：　ＭＰＫ　ａｌｐｈａ　２；ＮｒＬ；ａｅｒｏｂｉｃ　ｔｒａｉｎｉｎｇ；ｓｋｅｌｅｔａｌ　ｍｕｓｃｌｅ　中圈分类号：Ｇ８０４．７　文献标识码：Ａ　腺苷酸激活蛋白激酶（Ａｍｐ　ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｋｉｎａｓｅ，　实　。然而，近年来有实验发现，ＡＭＰＫ不光参与细胞能量　ＡＭＰＫ）在机体物质代谢及能量代谢中的作用已被充分证　９０　代谢调节，还可被氧化应激激活　，进而参与机体抗氧化　罗琳，等：４Ｎ有氧训练诱￣－ＡＭＰＫａ２对小鼠骨骼肌Ｎ　一ＡＲＥ结合活性的影响　物质的调节。　核因子Ｅ＇相关因子２（ｎｕｃｌｅａｒ　ｆａｃｔｏｒ　Ｅ２　ｒｅｌａｔｅｄ　ｆａｃｔｏｒ　试剂盒说明书进行操作，使用多功能荧光酶标仪，对样品　进行４９０／５２０ｎｍ，ＲＦＵ值检测，结果以测定孔ＲＦＵ值一空白　孔ＲＦＵ值表示。　２，Ｎｒｆ２）是机体的重要核转录因子，对细胞内氧化还原　状态敏感，能引起细胞内氧化还原状态发生改变的因　素，如缺氧、炎症、运动等均可能导致Ｎｒｆ＇转录活性发　生变化　８　。Ｎｒｆ２可与靶基因ＤＮＡ启动子上的抗氧化反　应元件（ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｅｌｅｍｅｎｔ，ＡＲＥ）相互作用，　１．３．２骨骼肌Ｎｒｆ２．ＡＲＥ结合活性测定　取５０　ｍｇｄ，腿骨髂肌组织，采用Ｔｒａｎｓ　ＡＭ⑧Ｎｒｆ２试剂　盒（Ａｃｔｉｖｅ　Ｍｏｔｉｆ，美国），测定骨骼肌Ｎｒｆ２．ＡＲＥ结合活性，严　格按照试剂盒说明书进行操作，利用比色法读取４５０　ｎｍ的　ＯＤ值，结果以测定孔０Ｄ值一空白孔０Ｄ值表示。　启动下游包括过氧化氢酶（ｃａｔａｌａｓｅ，ＣＡＴ）、超氧化物歧　化酶（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ　ｄｉｓｍｕｔａｓｅ，ＳＯＤ）、ＮＡＤＰＨ￣氧化还　原酶１（ＮＡＤＰＨ　ｑｕｉｎｉｎｅ　ｏｘｉｄｏｒｅｄｕｃｔａｓｅｌ，ＮＱＯ１）、谷胱　１．３．３　ＲＴ－ＰＣＲ法测定骨骼肌抗氧化酶ｍＲＮＡ表达　取小鼠小腿骨骼肌５０　ｍｇ，使用Ｔｒｉｚｏｌ试剂（ＩｎＶｉ仃ｏｇｅｎ）　甘肽Ｓ．转移酶（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ　Ｓ－ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＧＳＴ）、血红素　加氧酶１（ｈｅｍｅｏｘｙｇｅｎａｓｅｌ，ＨＯ－１）、谷胱甘肽过氧化物　酶１（Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ　ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ　１，Ｇｐｘ．１）、谷胱甘肽还原酶　（Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ　ｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ＧＳＲ）和氨酰半胱氨酸连接酶催化　亚基（Ｃｙｓｔｅｉｎｅ　ｌｉｇａｓｅ　ｃａｔａｌｙｔｉｃ　ｓｕｂｕｎｉｔ，ＧＣＬＣ）等一系列抗　氧化酶和ＩＩ相解毒酶基因的转录　。　引。进而进一步提高　机体的抗氧化能力。　以往研究发现，长期耐力训练可使Ｎｒｆ２转录活性和表　达量增加　。但在运动的过程中，ＡＭＰＫ是否参与Ｎｒｆ２　转录活性变化的调节，从目前文献所见，仍缺乏直接实验　证据。因此，本研究通过野生型小鼠￣ＮＡＭＰＫａ：转基因小　鼠，观察４周有氧训练下骨骼肌Ｎｒｆ２．ＡＲＥ结合活性的变化。　１　材料与方法　１．１实验对象及分组　健康２月龄ＡＭＰＫａ，转基因小鼠（ＴＧ鼠）以及野生型　小鼠（ｗＴ鼠，两种鼠均属于Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ品系）各２Ｏ只，分别　随机分为对照组（Ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ，Ｃ）和训练组（Ｔｒａｉｎｎｉｎｇ　ｇｒｏｕｐ，Ｔ），每组各１０只。ＴＧ鼠由中国医学科学院实验动　物研究所制备并繁育。ｗＴ鼠由北京维通利华公司提供。　小鼠体重（１８．４２±１．９６）ｇ，按性别、鼠种分笼饲养，每笼３～　４只。饲养环境温度２０￣２５℃，相对湿度５０％￣７０％，每天　光照１２　ｈ。国家标准啮齿类动物饲料饲养，自由进食和　饮水。　１．２实验方案和取材　所有小鼠在北京体育大学动物房进行饲养和训练，　训练组小鼠正式实验前３天每天安排适应性训练。正式　实验为：１周６天，每天进行坡度为０、速度１２ｍ／ｍｉｎ、接近于　７５％Ｘ？Ｏ２　强度　的跑台有氧训练１　ｈ，总共持续４周。训　练组饲养及饮食条件与对照组一致。最后一次运动结束　４８　ｈ后，采用脱颈法处死小鼠，迅速取小鼠小腿骨骼肌于　一８０℃冻存备用。　１．３测定方法　１．３．１骨骼肌活性氧（ＲＯＳ）水平测定　取５０　ｍｇ小腿骨骼肌组织，采用ＲＯＳ试剂盒　（ＧＭＳ１００１６．３，ＧＥＮＭＥＤ），测定骨骼肌ＲＯＳ水平，严格按照　提取总ＲＮＡ，以紫外分光光度计确定提取的总ＲＮＡ纯度和　浓度，采用ＲＴ－ＰＣＲ试剂盒（Ｔｏｙｏｂｏ）￣Ｉ］ＰＣＲ扩增仪（ＭＧ９６＋／　Ｙ型，杭州朗基科学仪器有限公司）将ＲＮＡ逆转录为ｅＤＮＡ，　使用ＲＴ－ＰＣＲ仪（７５００，ＡＢＩ公司）测定１８　ｓ　ｒＲＮＡ和各目标　抗氧化酶ｍＲＮＡ（引物ＱＩＡＧＥＮ：１８ｓｒＲＮＡ（ＱＴ００１５７２４８）　ＳＯＤ１（ＱＴＯＯ１６５０３９），ＳＯＤ２（ＱＴＯＯ１６１７０７），ＧＣＬｃ　（ＱＴ００１３０５４３），ＣＡＴ（ＱＴｏ１０５５８１０６），ＧＳＲ（ＱＴ０１７５８２３２），　ＧＰＸ１（ＱＴＯ１１９５９３６），ＮＱｏ一１（ＱＴ０００９４３６７），ＨＯ—ｌ　（ＱＴＯＯ１５９９１５），ＳＹＢＲ染料（ＳＹＢＲ　Ｇｒｅｅｎ　Ｒｅａｌｔｉｍｅ　ＰＣＲ　Ｍａｓｔｅｒ　Ｍｉｘ，ＴＯＹＯＢＯ公司））。使用该仪器自带软件读取　目的基因荧光定量ＣＴ值。目的基因结果以比较ＣＴ法相对　定量表示。计算公式为　：目的基因＝２。△△ｃ　。　１．３．４　Ｗｅｓｔｅｎｒ　Ｂｌｏｔ法测定骨骼肌抗氧化酶蛋白表达　取小鼠小腿骨骼肌１００　ｍｇ，使用１　ｍＬ蛋白裂解液，　剪碎，超声匀浆，冰上静置１０　ｍｉｎ，４℃１２　０００　ｒ／ｍｉｎ离心５　ｍｉｎ，提取上清液。ＢＣＡ试剂盒（Ｐｉｅｒｃｅ公司）测定蛋白浓　度。根据蛋白浓度及上样蛋白量２０　ｇ计算上样的体积。　采用Ｂｏｌｔ　４％～１２％Ｂｉｓ．Ｔｒｉｓ　Ｐｌｕｓ凝胶（Ｌｉｆｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）和　Ｍｏｐｓ缓冲液进行蛋白电泳，通过ｉＢｌｏｔ　Ｇｅｌ　Ｔｒａｎｓｆｅｒ　Ｓｙｓｔｅｍ　（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）将凝胶内蛋白转印到ＮＣ膜上。ＮＣ膜用５％　牛奶封闭１　ｈ，加入一抗［抗体信息如下：Ｂ．ａｃｔｉｎ（１：１　０００，　Ｓａｎｔａ　ｓｃ　４７７７８）、ＡＭＰＫａ２（１：１　５００，Ｓａｎｔａ　ｓｃｌ９　１２９）ＨＯ．１　（１：１　０００，Ａｂｃａｍ　ａｂ１３　２４８）、ＧＳＲ（１：１　０００，Ｓａｎｔａ　ｓｃｌ３３２４５）、　ＣＡＴ（１：５００，Ｓａｎｔａ　ｓｃ５０５０８）、ＮＱＯｌ（１：５００，ｓａｎｔａ　ｓｃ】６４６４）、ＧＣＬｃ（１：５００，Ｓａｎｔａ　ｓｃ２２５５）、ＳＯＤ２（１：５００，　收稿日期：２０１６．１２．３０：修订日期：２０１７－０８—１９　基金项目：国家自然科学基金项目（３１４７１１３４）；中央高校基本科　研业务费资助课题（２０１６ＢＳ０２６）：贵州省教育厅青年　科技人才成长项目（黔教合ＫＹ字［２０１６］１２９）。　第一作者简介：罗琳，女，副教授，在读博士研究生，主要研究方　向为运动与骨骼肌代谢，Ｅ．ｍａｉｌ：５９２５８６０＠ｑｑ．ｃｏｍ。　通讯作者简介：张缨，女，教授，博士，博士研究生导师，主要研　究方向为运动与骨骼肌代谢，Ｔｅｌ：（０１０）６２９８９５８４，　Ｅ・ｍａｉｌ：ｚｈｙｉ９２５６＠１２６．ｔｏｍ。　作者单位：１北京体育大学运动人体科学学院，北京１０００８４；２贵　州师范大学体育学院，贵州贵阳５５０００１　１．Ｂｅｉｊｉｎｇ　ＳｐｏｒｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　１０００８４，Ｃｈｉｎａ；２．Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ　５５０００１，Ｃｈｉｎａ．　９１　中国体育科技２０１７年（第５３卷）第６期　Ｓａｎｔａ　ｓｃ３００８０）、ＳＯＤ１（１：５００，Ｓａｎｔａ　ｓｃｌ１４０７）、ＧＰＸ－ｌ（１：　响　５００，Ｓａｎｔａ　ｓｃ２２１４５）］过夜，二抗室温孵育１　ｈ。使用化学发　光液（Ｔｈｅｒｍｏ公司）在成像仪（ＢＩＯ．ＲＡＤ公司）成像，Ｉｍａｇｅ　Ｌａｂ４．１软件读取条带积分灰度值，结果用目的蛋白积分　４周有氧训练后，ＷＴ鼠骨骼肌蛋白（ＣＡＴ、ＳＯＤ１、　ＨＯ一１、ＧＳＲ）表达显著增加（Ｐ＜Ｏ．０５）；ＴＧ鼠骨骼肌蛋白　（Ｇｐｘ一１、ＣＡＴ、ＳＯＤ２、ＮＱＯ－１，尸＜０．０５）和（ＧＣＬｃ、ＳＯＤ１、　灰度值与内参积分灰度值的比值／对照目的蛋白积分灰度　值与内参积分灰度值比值表示。　１．４统计学分析　ＨＯ．１、ＧＳＲ，Ｐ＜０．０１）表达显著增加；此外，与训练组ＷＴ鼠　相比，训练组ＴＧ鼠骨骼肌蛋白（Ｇｐｘ．１、ＳＯＤ１、ＳＯＤ２、ＨＯ．１、　ＧＳＲ、ＮＱＯ一１，Ｐ＜０．０５）和ＧＣＬｃ（Ｐ＜０．ｏ１）蛋白表达显著提　高（图４）。　口所有数据以平均数±标准误表示，使用ＳＰＳＳ　１７．０统计　软件进行数据分析，采用双因素方差分析。差异具有显著　ｗＴ鼠　性，Ｐ＜０．０５；差异具有非常显著性，Ｐ＜０．０１。　２　结果　２．１两种小鼠ＡＭＰＫａ２蛋白表达检测　ＴＧ鼠骨骼肌ＡＭＰＫａ２蛋白表达量始终高于ｗＴ鼠（Ｐ＜　０．０５）。　ｗ１ｌ置ＴＧ置　■——■————一　．＾　ｘｏ　躺　￣＇－４３ＫＤ　口ＷＴ鼠　ｚ　Ｉ　ＴＧ鼠　－Ｕ　１　耋薯　蹇　。　０　值　图１　ＡＭＰＫａ２蛋白表达图谱　Ｆｉｇｕｒｅ　１．Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ　ｌｍｍｕｎｏｂｉｏｔｓ　ｏｆＡＭＰＫａ２　Ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎ　Ｖａｒｉｏｕｓ　Ｇｒｏｕｐｓ　注：与ｗＴ鼠相比，　表示尸＜０．０５，槲表ｆｉ，ｒｐ＜０．０１，下同。　２．２　４周有氧训练对小鼠骨骼）ｇＬＲＯＳ水平的影响　４周有氧训练后，ＷＴ￣ｎＴＧ鼠骨骼肌ＲＯＳ水平显著增　加（尸＜０．０５）。与训练组ｗＴ鼠相比，训练组ＴＧ鼠骨骼肌　ＲＯＳ水平显著降低（Ｐ＜０．０５，图２Ａ）。　２＿３　４周有氧训练对小鼠骨骼）ＩＬＮｆｆ２．ＡＩ　结合活性的影响　４周有氧训练后，ＷＴ￣ＩＴＧ鼠骨骼肌Ｎｒｆ２一ＡＲＥ结合活　性显著增加（Ｐ＜０．０５）；与训练组ｗＴ鼠相比，训练组ＴＧ鼠　骨骼肌Ｎｒｆ２．ＡＲＥ结合活性显著增加（ＪＰ＜Ｏ．０５，图２Ｂ）。　２．４　４周有氧训练对小鼠骨骼肌抗氧化酶ｍＲＮＡ表达的　影响　４周有氧训练后，ｗＴ鼠骨骼肌ＨＯ．１　ｍＲＮＡ和ＴＧ鼠骨　骼肌（Ｇｐｘ－ｌ、ＮＱＯ一１、ＨＯ一１、ＣＡＴ）ｍＲＮＡ表达显著增加（Ｐ　＜０．０５，图３）。　２．５　４周有氧训练对小鼠骨骼肌抗氧化酶蛋白表达的影　９２　６００　０００　零　ｏｏｏｏｏ　盖蓍　嚣　羹　２００　０００　０　对照组　训练组　Ａ骨骼肌ＲＯＳ水平　掣　地　§３　蕊　囊　ｚ　杰　１　Ｏ　对照组　训练组　Ｂ骨骼肌Ｎｒｆｉ—ＡＲＥ结合活性　图２骨骼肌ＲＯＳ水平和Ｎｒｆ２－ＡＲＥ结合活性　Ｆｉｇｕｒｅ　２．ＲＯＳ　Ｌｅｖｅｌ　ａｎｄ　Ｎｒｆ￣－ＡＲＥ　Ｂｉｎｄｉｎｇ　Ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　Ｓｋｅｌｅｆａｌ　Ｍｕｓｄｅ　注：与对照组相比，　表示尸＜０．０５，＋　表ｆｆｃＰ＜０．０１，下同。　３　讨论　３．１　４周有氧训练对Ｎ　．ＡＲＥ结合转录活性的影响　剧烈运动可以造成体内ＲＯＳ产生增多　Ｊ，使机体氧化　还原系统失衡，过多的ＲＯＳ可弓ｌ起脂质过氧化，以及ＤＮＡ、　蛋白质的破坏，导致组织出现运动性损伤　。ＲＯＳ是　Ｎｒｆ２活化的关键因子，可激活Ｎｒｆ２转录活性增加　，进而提　高机体抗氧化能力。１次持续６　ｈ的急性剧烈运动即可提　高小鼠骨骼肌Ｎｒｆ２．ＡＲＥ结合转录活性…。长期耐力训练　也可使机体ＲＯＳ生成增多，提高Ｎ　及抗氧化酶的表达　。　有文献报道，成年男性经过ｌ２周低强度耐力训练后，骨骼　肌ＧＳＲ和ＳＯＤ蛋白表达显著增加¨　。大鼠游泳训　罗琳，等：４周仃氧训练诱导ＡＭＰＫⅡ　对小鼠骨骼ＪｌｉｆＮｒｆ，一ＡＲＥ结合活性的影响　练（１　ｈ／天，５天／周，持续１０周），可以使Ｎｒｆ２蛋白表达增　活性显著增加…＇１４］。本研究结果显示，４周有氧训练后，野　生鼠骨骼￣ＬＲＯＳ水平、Ｎｒｆ２．ＡＲＥ结合活性、ＨＯ—ｌ　ｍＲＮＡ、蛋　白（ＣＡＴ、ＳＯＤ１、ＨＯ。１、ＧＳＲ）表达显著增加，提示，长期有氧　耐力训练骨骼肌产生ＲＯＳ，可诱导Ｎｒｆ：一ＡＲＥ结合活性的增　加　。年轻和老年小鼠１０周耐力训练后，骨骼￣ＬＲＯＳ水平　增加，ＳＯＤ、ＣＡＴ蛋白表达提高Ⅲ。Ｇｏｕｎｄｅｒ的研究发现，经　过６周适宜强度训练后，年轻和老年小鼠骨骼肌蛋白（Ｎｒｆ：、　科　《ｚ　∽８ｌ＼ｖｚ　Ｅ基馥　ＧＳＲ、ＨＯ．１、ＧＰＸ．１）表达增加，但年轻鼠比老年鼠Ｎｒｆ２转录　强，进而提高抗氧化酶的表达水平。　ｒ－ｑ、ＶＴ鼠对照组　２．０　练组　照组　练组　１．０　Ｏ．５　０．０　ＧＣＬｃ　２　Ｇｐｘ一１　２　对　《ｚ　∞∞一／《ｚ　目１ｆＩｆ馥如　●　●　Ｏ　ＣＡＴ　ＳＯＤＩ　ＳＯＤ２　０　ＨＯ一１　ＧＳＲ　ＮＱＯ一１　图３骨骼肌抗氧化酶ｍＲＮＡ表达　Ｆｉｇｕｒｅ　３．　Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　Ｅｎｚｙｍｅｓ　ｍＲＮＡ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｓｋｅｌｅｔａｌ　Ｍｕｓｃｌｅ　ＷＴ　Ｃ　Ｔ　ＴＧ　Ｃ　Ｔ　ＷＴ　Ｃ　Ｔ　ＴＧ　Ｃ　Ｔ　ＧＣＬＣ　ＧＰＸ．１　ＣＡＴ　ＳＯＤ１　—■——●—－卜，，ＫＤ　—＿＿■＿－■　■　２２ＫＤ　ＨＯ。－誓豳翻誓薯　３４ＫＤ　ＧＳＲ■嘲奠■　｜５５ＫＤ　ＮＱＯ－　■■■■　３１ＫＤ　［３－ａｃｔｉｎ———■●Ｉ　４３ＫＤ　ｐ－ａｃｔｉｎ　３　ｒ－＂ｌ、ＶＴ鼠对照组　２　Ｉ、ＶＴ鼠训练组　圆团ＴＧ鼠对照组　ｒ＇／ｍ　ＴＧ鼠　１练组　妇　基　篓・　基　罐　缸　０　ＧＣＬｃ　Ｇｐｘ－１　ＣＡＴ　ＳＯＤ１　ＳＯＤ２　ＨＯ—ｌ　ＧＳＲ　ＮＱＯ・ｌ　图４　骨骼肌抗氧化酶蛋白表达　Ｆｉｇｕｒｅ　４．Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　Ｅｎｚｙｍｅｓ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｓｋｅｌｅｔａｌ　Ｍｕｓｃｌｅ　３．２　４周有氧训练诱导ＡＭＰＫａ２对Ｎｒ６－ＡＲＥ＠合转录活性　的影响　血管内皮细胞中加入二甲双胍，激活ＡＭＰＫ的同时，观察　￣１］Ｎｒｆ２］２其下游抗氧化酶ＨＯ－１、ＮＱＯ一１、ＧＰｘ—ｌ蛋白表达　增加　。Ｍａｂｆｒｅｄｉ将具有抗肿瘤作用的ｐ．内酰胺酶作用　当细胞Ｉ￣ＡＭＰ／ＡＴＰＬＬ值增加时，ＡＭＰＫ可被激活从而　开始复杂的能量代谢调控　，近来的研究显示，氧化应激　同样可以激￣ＡＭＰＫ　。ｗｕ的研究报道，在体外培养的　于大鼠神经胶质细胞，发现Ｎｒｆ２及其下游抗氧化酶（ＨＯ—ｌ、　ＮＱＯＩ和ｃＡＴ）蛋白表达增加：如果加入ＡＭＰＫ抑制剂，则　９３　中国体育科技２０１７年（第５３卷）第６期　这些酶的蛋白表达受到抑制Ｄ７］０　Ｐａｒｋ等人研究发现，使用　大黄素刺激神经胶质细胞后，Ｎｒ￣对ＨＯ．１和ＮＱＯ！的转录　活性增强，加入ＡＭＰＫ抑制剂后，这一作用受到阻滞［２ｏ３。　（０７）：６４９—６５２，６８７．　［２３王大磊，王童．有氧运动对老年大鼠海马氧化应激水平、　ＡＭＰＫ及ＰＧＣ—ｌａ蛋白表达的影响［Ｊ］．西安体育学院学报，　２０１４，２４（３）：３５０—３５４，３６３　Ｎｒｆ２敲除鼠和野生鼠通过药物诱导成为肝癌小鼠，培养其　肝细胞，而后分别给予两种鼠的肝细胞ＡＭＰＫ激动剂——　ＡＩＣＡＲ孵育，表明野生肝癌鼠的肝细胞呈现Ｎ喝活化及有　［３３　ＡＭＹ　Ｌ　ｓ，ＲＥＹＥＳ　Ｒ，ＣＨＥＮ　Ｂ，ｅｔ　ａ１．Ａｇｅ　ａｎｄ　ｅｘｅｒｃｉｓｅ　ｔｒａｉｎｉｎｇ　ａｌｔｅｒ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｒｅａｃｔｉｖｅ　ｏｘｙｇｅｎ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉ—　ｕｍｏｆｓｋｅｌｅｔａｌｍｕｓｃｌｅ　ａｒｔｅｒｉｏｌｅｓ［Ｊ］．ＪＡｐｐｌＰｈｙｓｉｏｌ，２０１３，１１４（５）：　６８１—６９３．　益的氧化还原反应改变，Ｎ喝敲除鼠的肝细胞没有这一变　化　。以上研究表明，ＡＭＰＫ与Ｎｒｆ２信号通路密切相关。　［４］ＢＡＡＲ　Ｋ，ＷＥＮＤＥ　Ａ　Ｒ，ＪＯＮＥＳ　Ｔ　Ｅ，ｅｔ　ａ１．Ａｄａｐｔａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｓｋｅｌ—　ｅｔａｌ　ｍｕｓｃｌｅ　ｔｏ　ｅｘｅｒｃｉｓｅ　ｒａｐｉｄ　ｉｎｃｒｅａｓｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｎｓｃｒｉｔｐｔｉｏｎａｌ　ｃｏａｃｔｉ　运动可造成机体氧化应激，同时伴有自身能量代谢的　改变，因此运动对ＡＭＰＫ的激活作用可能更为复杂。目前，　关于ＡＭＰＫ与运动氧化应激的关系并不十分清楚。有研　究报道，肥胖大鼠经过８周跑台训练后一　肌组织ＡＭＰＫ活　性提高，同时，ＲＯＳ水平下降３１３ＳＯＤ生成增加　。王大磊　ｖａｔｏｒＰＧＣ．１［Ｊ］．ＦＡＳＣＢ　Ｊ，２００２，１６（１４）：１８７９．１８８６．　［５］ＢＲＡＮＤＡＵＥＲ　Ｊ，ＡＮＤＥＲＳＥＮ　Ｍ　Ａ，ＫＥＬＬＥＺＩ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．ＡＭＰ—ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｋｉｎａｓｅ　ｃｏｎｔｒｏｌｓ　ｅｘｅｒｃｉｓｅ　ｔｒａｉｎｉｎｇ—ａｎｄ　ＡＩＣＡＲ．ｉｎｄｕｃｅｄ　ｉｎｃｒｅａｓｅｓ　ｉｎ　ＳＩＲＴ３　ａｎｄ　ＭｎＳＯＤ　ＦＪ］．Ｆｒｏｎｔ　Ｐｈｙｓｉｏｌ，２０１５，２４（５）：８５—８６．　的研究发现，８周有氧运动训练可使大鼠海马组织ＡＭＰＫ　蛋白表达增加，ＲＯＳ、丙二醇（ＭＤＡ）含量显著降低，ＳＯＤ　［６］ＣＡＣＩＣＥＤＯ　Ｊ　Ｍ，ＧＡＵＴＨＩＥＲ　Ｍ　Ｓ，ＬＥＢＥＲＡＳＳＥＵＲ　Ｎ　Ｋ，ｅｔ　ａ１．Ａｃｕｔｅ　ｅｘｅｒｃｉｓｅ　ａｃｔｉｖａｔｅｓＡＭＰＫａｎｄ　ｅＮＯＳｉｎｔｈｅｍｏｕｓｅ　ａｏｒｔａ［Ｊ］ｌ　Ａｍ　ＪＰｈｙｓｉｏｌＨｅａｒｔＣｉｒｃＰｈｙｓｉｏｌ，２０１１，３０１（４）：Ｈ１２５５—６５．　和ＧＰｘ．１活性显著升高　。Ｂｒａｎｄａｕｅｒ研究报道，骨骼肌中　含有失效的ＡＭＰＫａ，过表达亚基的小鼠和野生小鼠进行４　周跑台运动训练，并伴随每日ＡＩＣＡＲ肌肉注射后，野生鼠　ＬＬＡＭＰＫｃｔ，亚基过表达失效的小鼠骨骼肌ＭｎＳＯＤ水平显　著上升　。那么，长期有氧训练是否诱导ＡＭＰＫ参与Ｎｒｆ２．　ＡＲＥ结合活性的调节？目前鲜见文献报道。　［７］ＣＨＥＮＺ　Ｐ，ＳＴＥＰＨＥＮＳＴ　Ｊ，ＭＵＲＴＨＹ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｅｘｅｒ－　ｃｉｓｅｉｎｔｅｎｓｉｔｙｏｎ　ｓｋｅｌｅｔａｌｍｕｓｃｌｅＡＭＰＫ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇｉｎｈｕｍａｎｓ［Ｊ］．　Ｄｉａｂｅｔｅｓ，２００３，５２：２２０５—２２ｌ２．　［８］ＣＨＯＩ　Ｓ　Ｌ，ＫＩＭ　Ｓ　Ｊ，ＬＥＥ　Ｋ　Ｔ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆＡＭＰ—ａｃ—　ｔｉｖａｔｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｋｉｎａｓｅ　ｂｙ　Ｈ２Ｏ２［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｂｉｏｐｈｙｓ　Ｒｅｓ　Ｃｏｍ．　ｍａｎ，２００１，２８７（１）：９２．９７．　ＡＭＰＫ是一种位于真核生物细胞中广泛存在的丝氨　酸／苏氨酸蛋白激酶，是一种异源三聚体蛋白，由ｔ／，、ｐ、丫，３　种亚基组成，每种亚基存在２或３种亚型（　（１２、ｐ　、ｐ　、丫．、　丫　、丫３），其中，０【亚基是ＡＭＰＫ的主要催化亚基，ｐ和１，亚基主　要起调节作用，并且在不同的哺乳动物组织中各种亚基的　表达有所不同“　。研究表明，ＡＭＰＫ的ｃ【　亚基与运动的相　关性最大　，因此，本研究采用ＡＭＰＫａ，高表达转基因小鼠　［９］ＥＭＥＲＬＩＮＧ　Ｂ　Ｍ，ＷＥＩＮＢＥＲＧ　Ｆ，ＳＮＹＤＥＲ　Ｃ，ｅｔ　ａ１．Ｈｙｐｏｘｉｃ　ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＡＭＰＫ　ｉｓ　ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｏｎ　ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ　ＲＯＳ　ｂｕｔ　ｉｎ—　ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｏｆ　ａｎ　ｉｎｃｒｅａｓｅ　ｉｎ　ＡＭＰ／ＡＴＰ　ｒａｔｉｏ［Ｊ］．Ｆｒｅｅ　Ｒａｄｉｃ　Ｂｉｏｌ　Ｍｅｄ，２００９，４６：１３８６．１３９１．　［１０］ＦＥＲＮＡＮＤＯ　Ｐ，ＢＯＮＥＮ　Ａ，ＨＯＦＦＭＡＮ．ＧＯＥＴＺ　Ｌ．Ｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇ　ｓｕｂｍａｘｉｍａｌ　ｏｘｙｇｅｎ　ｃｏｎｓｕ／ｎｌ￣ｏｎ　ｄｕｎｎｇｔｒｅａｄｍｉｌｌｎｍｎｉｎｇｉｎ　ｍｉｃｅ［Ｊ］．　Ｃａｎ　Ｊ　Ｐｈｙｓｉｏｌ　Ｐｈａｒｍ，１９９３，７１（１０一ｌ１）：８５４—８５７．　及其野生型小鼠为研究对象。本研究发现训练组ＡＭＰＫａ，　转基因鼠与野生鼠相比，骨骼肌ＲＯＳ水平显著降低，Ｎｒｆ２一　ＡＲＥ结合活性显著增加，蛋白（Ｇｐｘ．１、ＳＯＤＩ、ＳＯＤ２、ＨＯ．１、　［１１］ＧＯＵＮＤＥＲ　Ｓ　Ｓ，ＫＡＮＮＡＮ　Ｓ，ＤＥＶＡＤＯＳＳ　Ｄ，ｅｌ　ａ１．Ｉｍｐａｉｒｅｄ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　Ｎｒｆ２　ｉｎ　ａｇｅ－－ｒｅｌａｔｅｄ　ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ　ｏｘｉｄａ－・　ｔｉｖｅ　ｓｔｒｅｓｓ　ｉｓ　ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ　ｂｙ　ｍｏｄｅｒａｔｅ　ｅｘｅｒｃｉｓｅ　ｔｒａｉｎｉｎｇ［Ｊ］．ＰＬｏＳ　ＯＮＥ，２０１２，７：ｅ４５６９７．　ＧＳＲ、ＮＱＯ．１和ＧＣＬｃ）表达显著或非常显著增加。结果表　明，ＡＭＰＫａ，在有氧训练运动造成的氧化应激中，对Ｎｒｆ２．　ＡＲＥ结合活性可能起着重要的正向调节作用，进而有益于　骨骼肌ＲＯＳ的清除。然而，我们目前的实验结果仍无法确　认ＡＭＰＫ是直接还是通过其他中间分子间接激活Ｎｒｆ２以　及ＡＭＰＫ除了调节Ｎｒｆ２外，是否还参与其他转录因子对抗　氧化酶基因转录作用的调节，待于进一步深入研究。　［１２］ＪＩＡＮＧ　Ｈ　Ｋ，ＭＩＡＯ　Ｙ，ＷＡＮＧ　Ｙ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．Ａｅｒｏｂｉｃ　ｉｎｔｅｒｖａｌ　ｔｒａｉｎ—　ｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｃｔｓ　ａｇａｉｎｓｔ　ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ　ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ—ｉｎｄｕｃｅｄ　ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｉｎｊｕｒｙ　ｂｙ　ｅｎｈａｎｃｉｎｇ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｓｅ　ｓｙｓｔｅｍ　ａｎｄ　ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ　ｂｉｏ—　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ［Ｊ］．ＣｌｉｎＥｘｐＰｈａｒｍａｃｏｌ，２０１４，４１（３）：１９２—２０１．　［１３］ＫＯＵＢＡＡＡ，ＴＲＩＫＩＭ，ＴＲＡＢＥＬＳＩＨ，ｅｔａ１．Ｃｈａｎｇｅｓｉｎ　ａｎｔｉｏｘｉ—　ｄａｎｔ　ｄｅｆｅｎｓｅ　ｃａｐａｂｉｌｉｙ　ｔａｎｄ　ｌｉｐｉｄ　ｐｒｏｆｉｌｅ　ａｆｔｅｒ　１２・・ｗｅｅｋ　ｌｏｗ．－ｉｎｔｅｎ．－　ｓｉｔｙ　ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ　ｔｒａｉｎｉｎｇ　ｉｎ　ｂｏｔｈ　ｃｉｇａｒｅａｅ　ｎｄ　ａｈｏｏｋａｈ　ｓｍｏｋｅｒｓ：Ａ　４　结论　ｆｏｌｌｏｗ—ｕｐ　ｓｔｕｄｙ［Ｊ］．ＰＬｏＳＯｎｅ，２０１５，１０（６）：ｅ０１３０５６３．　［１４］ＬＡＵＧＨＬＩＮ　Ｍ　Ｈ，ＭＣＡＬＬＩＳＴＥＲ　Ｒ　Ｍ．Ｅｘｅｒｃｉｓｅ　ｔｒａｉｎｉｎｇ．ｉｎ．　４周有氧训练可能诱导ＡＭＰＫａ２，促进Ｎｒｆ２－ＡＲＥ结合活　ｄｕｃｅｄ　ｃｏｒｏｎａｒｙｖａｓｃｕｌａｒ　ａｄａｐｔａｔｉｏｎ［Ｊ］ＪＡｐｐｌＰｈｙｓｉｏｌ，１９９２，７３（２）：　２２０９．２２２５．　性，进而增加抗氧化酶的蛋白表达，提高机体抗氧化能力。　［１５ｊ　ＬＩＬ，ＭＥＮＧ　Ｆ，ＬＩＮ，ｅｔａ１．Ｅｘｅｒｃｉｓｅｔｒａｉｎｉｎｇｐｒｅｖｅｎｔｓｔｈｅ　ａｔｔｅｎｕ—　参考文献：　［１］李铁瑛，何诗依，刘思雪，等．急性运动对小鼠骨骼肌核蛋白　ａｔｉｏｎ　ｏｆａｎｅｓｔｈｅｔｉｃ　ｐｒｅ－ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ—ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｃａｒｄｉｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｄｉｅｔ－ｎｄｕｃｅｄ　ｉｏｂｅｓｅ　ｒａｔｓ［Ｊ］．ＡｃｔａＡｎａｅｓｔｈｅｓｉｏｌ　Ｓｃａｎｄ，２０１５，５９（１）：　（下转第１１６页）　Ｎｒｆｅ—ＡＲＥ结合活性的影响［Ｊ］．中国运动医学杂志，２０１５，３４　９４　中国体育科技２０１７年（第５３卷）第６期　［２５］ＯＲＲ　Ａ　Ｗ，ＨＡＳＴＩＮＧＳ　Ｎ　Ｅ，ＢＬＡＣＫＭＡＮ　Ｂ　Ｒ，ｅｔ　ａ１．Ｃｏｍｐｌｅｘ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｓｍｏｏｔｈ　ｍｕｓｃｌｅ　ｃｅｌｌ　ＲｅｖＰｏｒｔＣａｒｄｉｏｌ，２０１２，３ｌ（２）：１５ｌ一１５８．　［２９］ＳＡＲＴＯＲＥ　Ｓ，ＳＣＡＴＥＮＡ　Ｍ，ＣＨＩＡＶＥＧＡＴＯ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ｍｙｏｓｉｎ　ｉｓｏｆｏｒｍ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｓｍｏｏｔｈ　ｍｕｓｃｌｅ　ｃｅｌｌｓ　ｄｕｒｉｎｇ　ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ　ｉｎ　ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｖａｓｃ　Ｒｅｓ，２０１０，４７（２）：１６８—　１８０．　ａｎｄ　ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｖａｓｃｕｌａｒ　ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ［Ｊ］．Ｊ　Ｖａｓｃ　Ｒｅｓ，１９９４，３１（２）：　６ｌ一８１．　［２６］ＲＥＮＳＥＮ　Ｓ　Ｓ，ＤＯＥＶＥＮＤＡＮＳ　Ｐ　Ａ，ＶＡＮ　ＥＹＳ　Ｇ　Ｊ．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ　ｖａｓｃｕｌａｒ　ｓｍｏｏｔｈ　ｍｕｓｃｌｅ　ｃｅｌｌ　ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ　ｄｉ—　［３０］ＳＯＭＬＹＯ　Ａ　Ｐ，ＳＯＭＬＹＯ　Ａ　Ｖ　Ｃａ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｓｍｏｏｔｈ　ｍｕｓ．　ｃｌｅ　ａｎｄ　ｎｏｎｍｕｓｃｌｅ　ｍｙｏｓｉｎ　ＩＩ：ｍｏｄｕｌａｔｅｄ　ｂｙ　Ｇ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ｋｉｎａｓｅｓ，　ｖｅｒｓｉｔｙ　Ｉ－Ｊ］．Ｎｅｔｈ　Ｈｅａｒｔ　Ｊ，２００７，１５（３）：１００．１０８．　［２７３　ＲＯＱＵＥ　Ｆ　Ｒ，ＢＲＩＯＮＥＳ　Ａ　Ｍ，ＧＡＲＣ１Ａ．ＲＥＤＯＮＤＯ　Ａ　Ｂ，ｅｔ　ａ１．　Ａｅｒｏｂｉｃ　ｅｘｅｒｃｉｓｅ　ｒｅｄｕｃｅｓ　ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｓｔｒｅｓｓ　ａｎｄ　ｉｍｐｒｏｖｅｓ　ｖａｓｃｕｌｒ　ａａｎｄ　ｍｙｏｓｉｎ　ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ［Ｊ］．Ｐｈｙｓｉｏｌ　Ｒｅｖ，２００３，８３（４）：１３２５—　１３５８．　ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆｓｍａｌｌｍｅｓｅｎｔｅｒｉｃ　ａｎｄ　ｃｏｒｏｎａｒｙ　ａｔｔｅｒｉ￣ｉｎ　ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．［Ｊ］．　Ｂｒ　ＪＰｈａｒｍａｅｏｌ，２０１３，１６８（３）：６８６．７０３．　［３１］ＷＡＮＧ　Ｘ，ＣＡＤＥ　Ｒ，ＳＵＮ　Ｚ．Ｈｕｍａｎ　ｅＮＯＳ　ｇｅｎｅ　ｄｅｌｉｖｅｒｙ　ａｔ－ｔｅｎ—　ｕａｔｅｓ　ｃｏｌｄ－ｉｎｄｕｃｅｄ　ｅｌｅｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂｌｏｏｄ　ｐｒｅｓｓｕｒｅ　ｉｎ　ｒａｔｓ［Ｊ］．Ａｍ　Ｊ　ＰｈｙｓｉｏｌＨｅａｒｔＣｉｒＰｈｙｓｉｏｌ，２００５，２８９（３）：Ｈ１１６１—１１６８．　［２８］ＲＵＩＶＯ　Ｊ　Ａ，ＡＬＣＡＮＴＡＲＡ　Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ　ａｎｄ　ｅｘｅｒｃｉｓｅ［Ｊ］．　（上接第９４页）　８５—９７．　［２０］ＰＡＲＫ　Ｓ　Ｙ，ＪＩＮ　Ｍ　Ｌ，ＫＯ　Ｍ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ａｎｔｉ．ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｅｍｏｄｉｎ　ｉｎ　ＬＰＳ—Ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ　Ｍｉｃｒｏｇｌｉａ：Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ　ｏｆ　［１６］ＬＩＶＡＫ　Ｋ　Ｊ，ＳＣＨＭＩＴＴＧＥＮ　Ｔ　Ｄ．Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｇｅｎｅ　ｅｘ—　ｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｄａｔａ　ｕｓｉｎｇ　ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ＰＣＲ　ａｎｄ　ｔｈｅ　２－ｄｄＣＴ　ＡＭＰＫ／Ｎｒｆ２Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ　Ｒｅｓ，２０１６，３０７（４）：１３８—　１４９．　ｍｅｔｈｏｄ［Ｊ］＿Ｍｅｔｈｏｄｓ，２００１，２５：４０２—４０８．　［１７３　ＭＡＮＦＲＥＤＩ　Ｔ，ＦＩＥＬＤＩＮＧ　Ｒ　Ａ，ＯＲＥＩＬＬＹ　Ｋ　Ｐ，ｅｔ　ａ１．Ｐｌａｓｍａ　ｃｒｅａｔｉｎｅ　ｋｉｎａｓｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ　ｅｘｅｒｃｉｓｅ・ｉｎｄｕｃｅｄ　ｍｕｓｃｌｅ　ｄａｍａｇｅ　ｉｎ　［２１］ＰＯＷＥＲＳ　Ｓ，Ｊ１　Ｌ　Ｌ，ＬＥＥＵＷＥＮＢＵＲＧＨ　Ｃ．Ｅｘｅｒｃｉｓｅ　ｔｒａｉｎｉｎｇ—　ｉｎｄｕｃｅｄ　ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　ｓｋｅｌｅｔａｌ　ｍｕｓｃｌｅ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｃａｐａｃｉｔｙ：　ｏｌｄｅｒ　ｍｅｎ［Ｊ］＿Ｍｅｄ　Ｓｃｉ　Ｓｐｏｒｔｓ　Ｅｘｅｒｅ，１９９１，２３（９）：１０２８—１０３４．　［１　８］ＭＩＳＲＡ　Ｒ　ＡＭＰ　ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｋｉｎａｓｅ：ａ　ｎｅｘｔ　ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｔａｒｇｅｔ　ｆｏｒｔｏｔａｌｍｅｔａｂｏｌｉｃ　ｃｏｎｔｒｏｌ［Ｊ］．ＥｘｐｅｒｔＯｐｉｎＴｈｅｒＴａｒ，２００８，１２（Ｉ）：　９１．１０Ｏ．　ａ　ｂｒｉｅｆｒｅｖｉｅｗ［Ｊ］．Ｍｅｄ　Ｓｃｉ　Ｓｐｏｒｔｓ　Ｅｘｅｒｃ，１９９９，３１（７）：９８７—　９９７．　［２２］ＳＩＤ　Ｂ，ＧＬＯＲＩＥＵＸ　Ｃ，ＶＡＬＥＮＺＵＥＬＡＭ，ｅｔａ１．ＡＩＣＡＲ　ｉｎｄｕｃｅｓ　ＮＧ　ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｂｙ　ａｎ　ＡＭＰＫ－－ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｉｎ　ｈｅｐａｔｏ－－　［１９］ＭＵＴＨＵＳＡＭＹ　Ｖ　Ｒ，ＫＡＮＮＡＮ　Ｓ，ＳＡＤＨＡＡＳＩＶＡＭ　Ｋ，ｅｔ　ａ１．Ａｃｕｔｅ　ｅｘｅｒｃｉｓｅ　ｓｔｒｅｓｓ　ａｃｔｉｖａｔｅｓ　ＮｒｆＪＡＲＥ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　ａｎｄ　ｐｒｏ—　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，２０１４，９１（２）：１６８—８０．　［２３］ＷＨＹＴＥ　Ｊ　Ｊ，ＬＡＵＧＨＬＩＮ　Ｍ　Ｈ．Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆａｃｕｔｅ　ｎｄ　ａｃｈｒｏｎｉｃ　ｅｘｅｒｃｉｓｅ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｖａｓｃｕｌａｔｕｒｅ［Ｊ］．Ａｃｔａ　Ｐｈｙｓｉｏｌ，２０１０，１９９（４）：　４４１—４５０　ｍｏｔｅｓ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ｉｎ　ｈｅ　ｔｍｙｏｃａｒｄｉｕｍ［Ｊ］．Ｆｒｅｅ　Ｒａｄ—　ｉｃ　Ｂｉｏｌ　Ｍｅｄ，２Ｏｌ２，５２（２）：３６６—３７６．　★　１１６