反相高效液相色谱法测定茶叶中咖啡因的含量

化学工程与装备　ｌ４２　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ＆Ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ　２０１０年第５期　２０１０年５月　反相高效液相色谱法测定茶叶中咖啡因的含量　武开业　（榆林市环境监测总站，陕西榆林７　１９０００）　摘　要：建立了用反相高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）测定茶叶中咖啡因的方法。茶叶经预处理后，通过　Ｄｉｏｍｏｎｓｉｌ　Ｃ１８（２）５ｕ色谱柱分离，以甲醇＋水混合溶液为流动相进行洗脱，于２８６　ｎｍ波长下紫外检测，一　次进样分析仅需４　ｍ　ｉｎ，咖啡因在１０￣１５０　ｕｇ／ｍＬ范围内的线性关系良好，在加标水平为２Ｏ、３０、５０　ｕｇ　／ｍＬ时．被测物的回收率为９７．９％～１０３．８％。　关键词：高效液相色谱；茶叶：咖啡因　咖啡因（Ｃ８Ｈｌ０Ｎ４０２）是从茶叶、咖啡果中提　造成损害，特别是它也有成瘾性，一旦停用会出现　炼出来的一种甲基黄嘌呤的生物碱，化学名是１，３，７－　精神萎顿、浑身困乏疲软等各种戒断症状，甚至导　三甲基黄嘌呤或３，７一二氢．１，３，７－－甲基一１Ｈ一嘌呤－２，６－　致吸食者下一代智能低下，肢体畸形，因此也被列入　二酮，纯的咖啡因是白色的，具有强烈苦味的粉状　受国家管制的精神药品范围。　物，熔点２３８。，升华温度１７８。，易溶于水、乙醇、　茶叶是常见的饮品，不同品种的茶叶含有的咖　丙酮及氯仿等有机溶剂。适度地使用咖啡因有祛除　啡因含量也不同，反应在１２１感上也不向，所以对茶　疲劳、兴奋神经的作用，临床上用于治疗神经衰弱　叶中含有的咖啡因进行测定是非常必要的。　和昏迷复苏。但是，大剂量或长期使用也会对人体　表ｌ实际样品测定结果及回收率　１．１仪器与试剂　Ｔａｂｌｅ　ｌ　Ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆｃａｆｆｅｉｎｅ　ｉｎ　ｓａｍｐｌｅｓ　Ｗａｔｅｒｓ　１５２５双泵高效液相色谱仪（美国沃特斯　公司）；０．４５ｕｒｎ滤膜过滤装置（上海摩速有限责任公　司）；万分之一电子分析天平（梅特勒．托利多公司）；　２５ｕＬ微量注射器（Ａｕｓｔｒａｌｉａ）：ＫＱ．５０Ｂ超声仪（昆山　市超声仪器有限公司）：咖啡因标准品：纯度９９％以　上（广佛精细化工公司）；ＣＨ３ＯＨ（色谱纯）；三氯　１实验部分　甲烷（分析纯）；无水硫酸钠（分析纯）；氯化钠（分析　武开业：反相高效液相色谱法测定茶叶中咖啡因的含量　ｌ４３　纯）：试剂用水为１８．２Ｍ￣－－次去离子水。　１．２色谱条件　Ｄｉｏｍｏｎｓｉｌ　Ｃ　１　８（２）５ｕ色谱柱（２５０ｍｍｘ４．６ｍｍ，　柱温３０℃）；流动相为甲醇／水（４：１，流速１ｍ１．ｍｉｎ　）；　紫外检测器。　１－３样品采集及前处理　称取２ｇ已经粉碎且小于３Ｏ目的均匀样品放入　１５０ｍＬ烧杯中，先加２～３ｍＬ超纯水，再￣ｌｌ：１５０ｍＬ三　氯甲烷，摇匀，超声萃取ｌｍｉｎ，静置３０ｍｉｎ，分层，　将萃取液倾入另一１５０ｍＬ烧杯。在样品中再加５０ｍＬ　三氯甲烷，重复上述萃取操作步骤，合并二次萃取　液，加入少许无水硫酸钠和５ｍＬ饱和氯化钠，过滤，　然后用三氯甲烷定容至１００ｍＬ，取１０ｍＬ滤液通过　０．４５ｕｒｎ滤膜过滤，弃去最初的５ｍＬ，保留后５ｍＬ备　用。　２结果与讨论　２．１色谱条件的选择优化　本方法的主要目的就是检测茶叶中咖啡因的　含量，我们采用美国沃特斯公司的Ｄｉｏｍｏｎｓｉｌ　Ｃ１８（２）５ｕ色谱柱，实验表明该色谱柱对咖啡因有很　好的分离性能。　通过选择比较不同的淋洗液体系，发现甲醇／　水体系能够很好的分离咖啡因，不会出现峰拖尾，　鬼峰以及其他峰不完全分离的情况，经过不同的浓　度选择，本方法选择甲醇／水（４：ｌ，流速ｌｍ１．ａｒｉｎ＂’）　作为流动相，咖啡因在４分钟内完全出峰（图２）。　２．２方法的精密度、线性关系和检出限　配制浓度为１Ｏ、３Ｏ、５０、１００、１５０　ｕｇ／ｒｒ￣的咖　啡因标准溶液，每个浓度测定６次峰面积响应值，　ＲＳＤ在Ｏ．２ｌ％・１．２５％之间。分别测定不同浓度的咖　啡因标准溶液的吸光度值，咖啡因浓度在ｌ０～１５０　ｕ扎范围内与峰面积值呈良好线性关系，Ｙ＝　１．６×１０　Ｘ＋９．８５ｘ１０３，相关系数为０．９９９８，方法检出　限为为Ｉｕｇ／ｍＬ．　２．３实际样品测定　我们以不同品种的茶叶为实验对象，测定其中　含有的咖啡因，含量见表一。　方法的相对标准偏差为（ＲＳＤ）在０．３６％　１．８９％之间，同时做回收率实验，加标回收率为　９７．９％～ｌ　Ｏ３．８％。　、　３小结　通过对实际样品的测定，本方法可以同时进样　快速、准确地测定茶叶中的咖啡因，可满足食品安　全中对茶叶质量检测的要求。　参考文献　【１】Ｃｈｅｎｇ　Ｘ　Ｇ　Ｋｏｎｇ　Ｌ，Ｓｕ　Ｘ　ｅ　ｔ　ａ　１．Ｊ　Ｃｈ　ｒｏｍ　ａ　ｔｏ　Ａ，２００４，ｌ　０４０（２）：１６９　【２】ＡｎａｓｔａｓｓｉａｄｅｓＭ，Ｌｅｈｏｔａｙ　Ｓ　Ｊ，Ｌ协ｊｎｂａｈｅｒＤ，　Ｓｃｈｅｎｃｋ　Ｆ　Ｊ．　ＡＯＡＣ　Ｉｎ，．，２００３，８６（２）：　４１２－４３１　【３】黄雪松，温丽儿，宴日安．反相高压液相色谱　法测定鲜蒜中的蒜氨酸【Ｊ】．食品与发酵工业，　２００５：３１（５）－１０６—１０９　【４】Ａｍａｋｕｒａ　ＯｋａｄａＭ，Ｔｓｕｊｉ　Ｓ，ＴｏｎｏｇａｉＹ　Ｃｈｒｏｍ　ａｔｏｇ￣．Ａ，２０００，８９１（１）：１８３一ｌ８７　【５】Ｓｃｈｅｎｃｋ　Ｆ　Ｊ，Ｌｅｈｏｔａｙ　Ｓ　Ｊ．　Ｃｈｒｏｍ　ａｔｏｇ￣．Ａ，　２０００，８６８（１）：５１—６１　【６】Ｌｅａｎｄｒｏ　Ｃ　Ｃ，Ｆｕｓｓｅｌｌ　Ｒ　Ｊ，Ｋｅｅｌｙ　Ｂ　Ｊ．　Ｃｈｒｏｍ　ａｔｏｇ￣．Ａ，２００５，１０８５（２）：２０７－２１２　【７】Ｃｈｅｎｇ　Ｘ　Ｇ　Ｋｏｎｇ　Ｌ，Ｓｕ　Ｘ　ｅ　ｔ　ａ　Ｉ．Ｊ　Ｃｈ　ｔｏｍ　ａ　ｔｏｇｒＡ，２００４，ｌ　０４０（２）：１６９　［８】Ａ　ｌａｅ　ｒｔｓ　Ｇ＇Ｍａ　ｔｔｈ　ｉｊｓ　Ｎ，Ｖｅ　ｒｂｅｋｅ　Ｊ　Ｖ’ｅ　ｔ　ａ　１．Ｊ　Ｃｈ　ｔｏｍ　ａｔｏｇｒＡ，２００７，ｌ　１７２（１）：１　【９】Ａｎ　ｉｍ　Ｆ　Ｄ，Ｈｏ　ｒｖａ　ｔｈ　Ｃ．Ｊ　Ｃｈ　ｔｏｍ　ａ　ｔｏｇｒ，１９８８，　４３５（１）：１　【１０】Ｙａｈ　Ｂ　Ｗ　Ｚｈａｎｇ　Ｊ　Ｈ，Ｂ　ｒｏｗ　ｎ　Ｊ　Ｓ，ｅ　ｔ　ａ　ｌ＿Ａｎａ　ｌ　Ｃｈｅｍ，２０００，７２（６）：ｌ　２５３　【ｌｌ】Ｎ　ａｗ　ｒｏｃｋ　ｉ　Ｊ，Ｄ　ｕｎ　ｌａｐ　Ｃ，ＭｃＣｏ　ｒｍ　ｉｃｋ　Ａ，ｅ　ｔ　ａ　１．　Ｊ　Ｃｈ　ｒｏｍ　ａｔｏｇｒＡ，２００４，ｌ　０２８（１）：１　【１２］Ｍ　ｉｌｌｅ　ｒ　Ｄ　Ｊ，Ｈａｗ　ｔｈｏ　ｍｅ　Ｓ　Ｂ．Ａｎａ　ｌ　Ｃｈｅｍ，　１９９７，６９（４）：６２３　【１３】Ｔｅｕｔｅｎｂｅ　ｒｇ　Ｔｕｅ　ｒｋ　Ｊ，Ｈｏ　ｌｚｈａｕｓｅ　ｒＭ，０　ｔ　ａ　１．Ｊ　Ｃｈ　ｒｏｍａｔｏｇｒＡ，２００６，ｌ　ｌｌ９（１／２）：１９７　【１４】Ｈｅ　ｉｎ　ｉｓｃｈ　Ｓ，Ｒｏｃｃａ　Ｊ　Ｌ．Ｊ　Ｃｈ　ｔｏｍ　ａ　ｔｏｇｒ　Ａ，２００９，　１　２１６（４）：　【１５】Ｚｈｕ　Ｇｕｏ　Ｙ　Ｙｃ　Ｍ　Ｌ，ｅ　ｔ　ａ　Ｉ．Ｊ　Ｃｈ　ｒｏｍ　ａ　ｔｏｇｒ　Ａ，２００５，１　０８５：１４３　【１６】Ｆ　ｒａｚｉｅ　ｒ　Ｒ　Ａ，Ｉｎｎｓ　Ｅ　Ｌ，Ｎ　ｉｃｏ　ｌｏ　Ｄ，ｅ　ｔ　ａ　ｌ＿Ｊ　Ｃｈ　ｒｏｍ　ａ　ｔ０　Ａ，２０００，８７６：２１３　【１７】Ａｎｄ　ｒｚｏ　ｊ　Ｗ　Ｊ　ｏｓｅｐ　ｈ　ｉｎｅ　Ｍ，Ｍａｎｕｅ　ｌａ　Ｂ．Ｊ　Ｃｈ　ｔｏｍ　ａ　ｔｏｇｒＡ．２００７，１　ｌ５７：ｌ８７