车间环境卫生检测标准
1.目的：
依照GB 12693-2020《乳制品企业良好生产标准》及本公司《生产干净区环境、卫生治理规定》中的相关规定及要求，特制定本标准。 2.范围
本标准规定了本公司实验室实施车间环境卫生检测的依据、方式及检测结果判定标准。
本标准适用于本公司实验室实施车间环境卫生的各项检测。 3检测项目：
菌落总数、霉菌、酵母、阪崎肠杆菌、大肠菌群、沙门氏菌 4.检测频率及检测时刻：
每日生产前进行生产设备、工器具、包装材料、员工个人卫生等部位的涂抹实验。
每日生产进程中对生产车间空气进行沉降实验。 5.职责
由查验人员负责车间环境卫生检测的具体操作。 6.检测方式 空气沉降法 菌落总数：
1）车间空气采样：选取4个采样点，（见附录1车间空气采样位点图）。采样高度为~。采样点应远离墙壁1 m以上，并躲开空调、门窗等空气流通处。
2）生产车间空气检测采样部位： 混粉间、杀菌机、预封机、真封机、100g灌装间、软包装灌装间、压片间、储粉间等，每部位为一采样点。 3）将营养琼脂平板置于采样点处，打开平皿盖，暴露 30min ,盖上平皿盖。反转平板，置36±1℃培育48h。
4）假设为车间空气菌落总数测定，那么应计算4个采样点菌落的平均数；假设为生产车间空气检测采样部位菌落总数测定，那么应计数每一个平板上的菌落数，均以每皿菌落数（CFU/皿）报告结果。 霉菌、酵母：
1）、2）同 菌落总数。
3）将虎红琼脂平板置于采样点处，打开平皿盖，暴露 30min ,盖上平皿盖。反转平板，置25±1℃培育3d~5 d。
4）假设为车间空气霉菌、酵母总数测定，那么应计算4个采样点菌落的平均数；假设为生产车间空气检测采样部位霉菌、酵母总数测定，那么应计数每一个平板上的菌落数，均以每皿菌落数（CFU/皿）报告结果。 阪崎肠杆菌
1）车间空气采样：选取4个采样点，（见附录1车间空气采样位点图）。采样高度为~。采样点应远离墙壁1 m以上，并躲开空调、门窗等空气流通处。
2）将阪崎肠杆菌显色平板置于采样点处，打开平皿盖，暴露 30min ,盖上平皿盖。反转平板，置36±1℃培育48h。
3）计数每一个阪崎肠杆菌显色平板上蓝绿色菌落，并计算4个采样点蓝绿色菌落的平均数，以每皿阪崎肠杆菌菌落数（CFU/皿）报告结果。
表面涂抹法 物体表面涂抹： 菌落总数、霉菌和酵母
将经灭菌的内径为5cm×5cm的规格板放在被检物体表面，用一浸有灭菌生理盐水的棉签在其内涂抹，然后剪去手接触的部份棉棒，将棉签放入装有10mL灭菌生理盐水/乳糖胆盐发酵管的采样管内及时送检。 将每支灭菌生理盐水采样管充分混匀后，取1mL样液，别离放入灭菌平皿内，加入冷至45℃左右的营养琼脂/虎红琼脂约15mL，每一个样品平行接种2个平皿，将营养琼脂平板置36℃±1℃培育48h.；虎红琼脂平板置25℃~28℃培育3~5d.
计数平板上的细菌/霉菌、酵母菌落数，以每毫升检样中的菌落总数（CFU）的平均数报告结果。 阪崎肠杆菌
将经灭菌的内径为5cm×5cm的规格板放在被检物体表面，用一浸有灭菌营养肉汤的棉签在其内涂抹，然后剪去手接触的部份棉棒，将棉签放入装有10mL灭菌营养肉汤的采样管内及时送检。
将每支灭菌营养肉汤的采样管充分混匀后，取1mL样液，以 mL、 mL、 mL 接种量别离加入三个阪崎肠杆菌显色平板，然后用无菌L 棒涂布整个平板，注意不要触及平板边缘。利用前，如阪崎肠杆菌显色平板表面有水珠，可放在25 ℃～50 ℃的培育箱里干燥，直到平板表面的水珠消失方可利用。
反转平板，置36±1℃培育48h。
挑取蓝绿色可疑菌落，采纳API 20E进行生化鉴定及进行氧化酶、产黄
素实验。
依照鉴定及实验结果报告检出或未检出阪崎肠杆菌。 沙门氏菌
将经灭菌的内径为5cm×5cm的规格板放在被检物体表面，用一灭菌的棉签在其内涂抹，然后剪去手接触的部份棉棒，将棉签放入装有10mL灭菌营养肉汤的采样管内及时送检。
将灭菌营养肉汤的采样管于于36±1℃培育8~18h。
轻轻摇匀采样管内的混合物，取1mL样液转种于10mL亚硒酸盐胱氨酸（SC）内，于36±1℃培育18~24h。
用接种环取增菌液1环，划线接种于一个科马嘉显色培育基平板，于36±1℃培育18~24h。
挑取紫红色可疑菌落，采纳API 20E进行生化鉴定实验。 依照鉴定及实验结果报告检出或未检出沙门氏菌。
大肠菌群
将每支乳糖胆盐发酵管置36±1℃培育24h±2 h。
假设产气，即初步判定为大肠菌群阳性。以大肠菌群阳性/阴性报告结果。
员工手部涂抹：
被检人五指并拢，用一浸有灭菌生理盐水的棉签在右手指曲面，从指尖到指端来回涂抹10次，然后剪去手接触的部份棉棒，将棉签放入装有10mL灭菌乳糖胆盐发酵管内及时送检。
将每支乳糖胆盐发酵管置36±1℃培育24h±2 h。假设产气，即初步判
定为大肠菌群阳性。
以员工腕表面大肠菌群阳性或阴性/手报告结果。 涂抹部位：
生产设备、工器具的涂抹：预混机、混粉缸、混粉缸上/下料口、筛粉机下料口、下粉漏斗、填充器、筛网、受粉槽、钢管、软管、盆、勺等。 包装材料的涂抹： 底盖、内袋等。 员工卫生状况涂抹：连体服、手套、手。 涂抹及检测方式同。 7判定依据
菌落总数：空气暴露30min ≤10 CFU/皿，
表面涂抹 ≤50 CFU/mL ；
霉菌、酵母：空气暴露30min ≤10 CFU/皿,
表面涂抹 ≤10 CFU/mL；
阪崎肠杆菌：空气暴露30min 0 CFU/皿，
表面涂抹 不得检出
大肠菌群：阴性。 8.检测报告
查验员应真实、准确填写《生产车间环境微生物检测报告》，经实验室主管审核后，报送品控部和生产部。 9.说明
混粉间、杀菌机、预封机、真封机为天天必需检测的部位，100g灌装间、软包装灌装间、压片间、储粉间仅在利历时进行检测。
钢管、软管应每次拆卸清洗后进行检测。
一样情形下，仅进行车间空气中的阪崎肠杆菌检测，必要时可采纳涂抹法对某些部位进行阪崎肠杆菌检测。 员工手部涂抹样仅检测大肠菌群。
附录
车间空气采样位点图
代表空气采样点； 代表车间人员入口风淋室； 代表混粉间门口；
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