临床医生负责选择适应症和跟踪，实验室负责细胞分离，程序如下：
一、 临床医生负责以下工作：
1. 选择适应症：免疫治疗的适应症包括①具有习惯性流产的女性，②具有异常妊娠史的女
性，③婚后不易怀孕的女性，④妊娠早期紧急保胎的女性，⑤通过辅助生育妊娠而需要保胎的女性，⑥其他保胎措施无效的女性等。
2. 治疗前检查；需要做免疫治疗的夫妻双方需接收以下检查：①封闭性抗体检查阴性；②
遗传染色体核型正常；③肝肾功能检查正常；④激素全套检查，以确定是否有内分泌失调；⑤无常见传染病(乙肝甲肝丙肝HIV梅毒)；⑥TORTH检查；⑦ABO血型和Rh血型；⑧甲状腺功能是否异常；⑨妇科常规检查等（具体见登记表，附后）。
3. 申请免疫治疗。在完成上述检查后，临床医生应仔细填写免疫治疗登记单（见附表1）、
免疫治疗计划单（见附表2）， 和患者签定知情同意书，然后到实验室预约。 4. 由临床医生或护士完成淋巴细胞皮下注射。选择患者前臂内侧将提取的淋巴细胞进行皮
下注射，为保证安全，一般要求在无菌室或治疗室完成皮下注射。
5. 并发症和处理：一般无明显并发症，常见的有①免疫反应：多数患者在接收皮下注射后
24小时出现局部红肿等免疫反应，大约3天后逐渐减轻和消失，该免疫反应一般在首次治疗后出现，随着治疗次数增多而逐渐减弱，所以不用特殊处理。②感染：感染原因之一是实验室不规范，或无菌操作不规范而导致微生物污染了提取的淋巴细胞或试剂；二是皮下注射过程中无菌操作不规范，使微生物进入体内而感染。处理措施是接收治疗后电话随访，一旦发现感染及时抗感染治疗。③其它：个别患者因对打针或血液等有恐惧感，可出现恶心呕吐和眩晕等反应，因此，一般要求患者皮下注射30分钟后再离开，若出现反应，嘱其平卧休息即可。
6. 复查封闭性抗体等相关项目。一个疗程完成2周后（2-3周/次，共4次为一个疗程），
抽血复查封闭抗体或相关项目。
二、实验室负责以下工作：
1. 免疫细胞分离在实验室完成。基本过程：在严格无菌条件下抽取丈夫或无关孕妇个人的
静脉血约20ml，以无菌操作程序完成淋巴细胞提取和纯化（大约2个小时）。 2. 一个疗程完成后，嘱患者复查封闭抗体是否转为阳性。 3. 为患者提供必要的咨询。
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三、免疫治疗程序
相对禁忌征和绝对禁忌征 有诱因的流产 死胎、畸胎、中晚期流产 夫妻遗传异常 女性生殖道异常 女性接种“过敏” 丈夫具有某种传染性疾病，主要是肝炎、HIV、梅毒等 1、门诊专科医生选择适应征
通过检查选择适应征（主要检查项目见免疫治疗登记单，可根据具体情况增加检查项目） 适应征 早期习惯性流产 没有胎心 无明显诱因的早期流产 各种检查未见异常 封闭性抗体检测阴性 首诊医师根据检查报告填写免疫治疗登记单，并签名。 2、属患者持登记单和所有检测报告单到实验室预约。 3、实验室重新审核，可补充必要检查。 4、为患者建立病案并制定治疗计划
5、治疗分2个疗程，分孕前治疗为预防，孕后治疗至出现胎心为保胎。 6、治疗期间需要药物配合时，实验室以书面形式交首诊医师处理。
7、实验室要做好追踪并认真登记，及时反馈给首诊意识，并每年汇总后反馈给首诊医生。 基本流程图
临床医生通过检查选择适应症，填写免疫治疗登记表和治疗计划单、签定知情同书 护士进行皮下注射，一个疗程结束后移交给临床医生实验室进行细胞分离和提纯护士根据预约单、交费单、治疗计划单等进行采血患者按照预约时间及时开单交费、抽血实验室依据登记表和同意书进行预约，并提供预约单临床医生为患者开单复查抗体、指导妊娠、保胎治疗、跟踪等，以及孕后免疫治疗安排等
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实验室基本要求 一、场所：30～50平方米。
二、基本设置：需符合无菌实验室流程，包括更衣间、缓冲间、操作间等。见附图 三、基本设备包括：超净工作台，低速低温离心机，电热恒温水浴箱，普通光学显微镜，细胞计数板等。
四、所有采用的实验试剂，吸管，试管，注射器等实验材料要求购自具有生产许可证的生产厂家，并且在有效期内使用，其中吸管试管注射器要求是一次性无菌材料。实验试剂应经过灭菌，操作器具均需要灭菌后使用。
五、实验室设施符合无菌条件，每次进行淋巴细胞提取前30min，采用紫外线对室内消毒，所用离心机，恒温箱等定期采用消毒液擦拭消毒。 六、实验室每月做一次空气培养，并做好详细记录。
七、实验过程由一人完成，全程穿隔离衣，带口罩、帽子和无菌手套等。提取和加样等操作过程均严格遵守无菌操作，避免污染。手套或其它物品一旦被污染应立即更换。进出无菌区严格按照实验室管理第三点执行。
八、在实验前和实验后要求严格核对患者姓名、性别、年龄、标本等，以避免由此导致的医疗差错。
九、每次实验要求做好相关记录，以备检查或总结。
十、淋巴细胞提取和纯化完成后，及时通知临床医生或护士为患者做皮下注射。 十一、原则上细胞分离液不允许患者或其他人带出实验室。 十二、每次完成后及时清理污物，严格按要求处理医疗废品。 实验室平面图（样本采集和实验室一体） 洗手盆 离 心 机
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门 普通冰箱洗手盆采血台门 显微镜 操作间 缓冲间 更衣间 采样间 超净工作台 门 实验室院感管理
一、分区：包括2个区，即采血治疗区和实验区，实验区应包括更衣区、缓冲区和无菌区。 二、试管、实验器材、操作器材要求：见实验室基本要求第3点。
三、更衣换鞋流程：更衣区脱外套，套上鞋套进入缓冲区，戴口罩和帽子、穿隔离衣进入无菌区。
四、实验室无菌操作流程：见实验室基本要求第6点。
五、消毒要求：超净工作台使用前后要消毒；离心机、恒温箱等仪器物表面每日采用75%
酒精擦拭消毒一次，对于患者血液或实验试剂溅洒地面或仪器表面等，应及时清洁消毒。 六、清洁卫生：每日进行地面和台面清扫一次。
七、医疗废物处理：锐器放入锐器盒，污染性废物分别放入相应废物桶，每日清走2次。 八、监测要求：每月对无菌区、清洁区进行空气、物表进行生物学检测一次。 九、采血及治疗前严格用0.5%碘消毒剂进行皮肤消毒。
十、患者治疗前应检查输血前四项，不接受梅毒及HIV现症患者的治疗，处理HCV、HBV
患者标本应放在当日最后进行，并严格执行标准预防措施。
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操 作 规 程
一、材料 （一）、设备材料：
1. 大容量速低温离心机1台，要求30～50ml/管； 2. 双人超净工作台1台； 3. 恒温水浴箱1台； 4. 普通冰箱1台； 5. 震荡器1台； 6. 普通光学显微镜1台； 7. 细胞计数板1套； 8. 一次性无菌吸管；
9. 30～50ml一次性无菌刻度离心管； 10. 10ml一次性无菌刻度离心管 11. 30～50ml一次性无菌注射器； 12. 1ml一次性无菌注射器;
13. 无菌EP管（容量为1～3ml/管） 14. 一次性无菌手套； 15. 口罩； 16. 帽子；
17. 皮肤消毒剂\\棉签等；
18. 抗凝剂，无菌肝素（500u/L）。 （二）、试剂材料：
1、人淋巴细胞分离液； 2、注射用生理盐水。 二、操作流程： （一）、准备：
1. 实验前将淋巴细胞分离液从冰箱中取出，静置超净台内以恢复至室温； 2. 准备无菌生理盐水、注射器、吸管等实验用品；
3. 用清洁医用纱布浸75％酒精擦拭工作台，提前30min打开超净工作台内的紫外线和无
菌实验室内的紫外线进行消毒。 （二）、采样：
由护士在无菌条件下完成，带口罩、帽子、手套等，采用一次性无菌注射器，预先无菌肝素抗凝（血液：肝素10：1），无菌采集静脉血约20ml，颠倒混匀，注明患者姓名。 （三）、细胞分离：
1. 加分离液：根据需要取无菌试管数支，注明患者姓名或编号，加入淋巴细胞分离液，要
求与血液比例为1：1；
2. 加血液：倾斜离心管，沿管壁缓慢加入抗凝静脉血；
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3. 离心：400g（离心力）离心30min；
4. 提取淋巴细胞：小心吸取中间的淋巴细胞层，转移至10ml的无菌离心管中，并加入无菌生理盐水约8ml，在震荡器充分混匀，3000rpm离心10min。 5. 洗涤：彻底去上清，保留沉淀，并加入无菌生理盐水约10ml，混匀，3000rpm离心10min。 6. 重复洗涤，共三次。
7. 淋巴细胞计数：彻底去上清，保留沉淀，并加入无菌生理盐水约1ml，混匀后取一滴充
入细胞计数板，计算出每ml淋巴细胞混合液中淋巴细胞的含量，并按比例加入无菌生理盐水配置成20～60×106/ml的淋巴细胞生理盐水悬浮液，一般总量控制在2ml。
该过程由实验室技师完成。实验过程由一人完成，要求更换实验室专用鞋穿隔离衣带口罩帽子和无菌手套等。每次操作要求完成后再离开实验室，实验过程中不得离开实验室，也不允许其他人进入实验室。
实验完成后，及时清理实验垃圾（垃圾按要求分类），用清洁医用纱布浸75％酒精或其他消毒液擦拭实验台，将实验用品和试剂放回原位，一切器材要求整齐放置，熄灭酒精灯，关闭超净台风机日光灯和电源，关闭实验室各个门窗。 （四）、接种：
由临床医生或护士完成。核对姓名和编号等，采用2ml注射器，取2ml上述淋巴细胞生理盐水悬浮液，选择患者前臂内侧做皮下注射，一般注射6～8个点，注射时尽量避开血管。
（五）、登记：
核对患者姓名性别年龄等，详尽登记患者资料，包括日期基本病史，免疫治疗次数，联系电话和通讯地址等。 （六）、跟踪随访：
电话随访，并向患者提供工作电话，嘱其有问题及时联系医生，密切关注患者皮下接种后有无并发症等异常情况。 （七）、咨询服务：
一个疗程完成后，建议复查血液封闭抗体是否转为阳性，并提供必要的咨询服务。
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经济和社会效益分析
流产是目前最常见的疾病之一，根据文献，自然流产为15％，2次自然流产率为2.3％， 3次自然流产率 为0.34％，隐性流产为30－40％ ，总的自然流产率为50－60％ 。流产的病因学比较复杂，其中70%与免疫因素有关。 一、免疫治疗费用约2800元。
每人至少需要治疗6个月，每人8-12次，每次350元，总费用至少为2800元。 二、治疗前检查费用3000～10000元左右。
包括：①封闭性抗体检查阴性；②遗传染色体核型正常；③肝肾功能检查正常；④激素全套检查，以确定是否有内分泌失调；⑤无常见传染病(乙肝甲肝丙肝HIV梅毒)；⑥TORTH检查；⑦ABO血型和Rh血型；⑧甲状腺功能是否异常；⑨妇科常规检查等（具体检测项目登记表，附后）。 三、治疗后费用
封闭抗体转阳后，一般要求在6个月内怀孕，对不易受孕者，可采用促排卵或人工授精方式促进受孕等，部分特殊患者妊娠后需要住院观察，必要采用丙球等药物配合保胎，一直到出生，费用超过万元。
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免疫治疗管理规范
一、管理的基本要求 严格按照国家卫生部、省卫生厅相关计划生育法规要求，不断完善各项规章制度。中心的各项工作、人员职责都有规范的制度，包括医学伦理委员会工作制度；病案管理制度、随访制度、工作人员分工责任制度、各项技术操作常规（即技术操作手册）、特殊药品管理制度、仪器管理制度、消毒隔离制度、材料管理制度、自查制度、工作人员行为准则等。
对所有初诊行产前咨询的夫妇，进行必要的检查，详细记录病情，书写病历及其相关记录，确定有无实施免疫治疗的适应证和禁忌证。对于需要进行免疫治疗者制定了《免疫治疗知情同意书》，对于需要紧急保胎者制定了《保胎治疗知情同意书》等。
工作人员定期自行检查的工作，定期或不定期进行疑难病例的分析和讨论，按期对工作情况进行检查、分析和总结，做年度总结报告。 二、其他说明
1、配一名护士，平时在原科室工作岗位工作，每周五配合免疫治疗，包括血液采集和皮下注射。
2、治疗时间：暂时规定每周一次。
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免疫治疗知情同意书 治疗项目名称：习惯性流产夫妇的免疫治疗。 解决的问题：①具有习惯性流产的女性通过治疗后可减少再次妊娠
后流产率；②妊娠早期的紧急保胎；③对于促进妊娠也有一定的作用。
成功率：习惯性流产病因复杂，通过免疫治疗后约10%左右患者仍
然出现流产和死胎。
药物配合：妊娠后出现先兆流产症状者，必要时需住院观察、采用
保胎药物如黄体酮、丙种球蛋白等。 具体内容请详阅背面的免疫治疗说明
不良反应：
①感染，若出现感染请及时联系我们。
②免疫反应，即出现红肿现象，随治疗次数会逐渐减弱。
③ 个别人皮下注射后出现恶心、呕吐和头晕等晕针现象，建议注射后10分种后再离开。
在商谈中我们对以上各条款已经了解清楚，要求检查和治疗，同意随访，愿意承担因检查带来的各种风险。
谈话医生签名： 患者签名： 谈话时间：201 年 月 日 电话： 联系地址：
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免疫治疗说明
简介：在正常孕妇血清中，存在一种对胎儿有保护作用的“封闭性抗体”，可保护胚胎顺利成长，部分育龄女性由于种种原因体内缺乏这种抗体，导致胚胎无法正常发育而发生习惯性流产。通过免疫治疗使“封闭性抗体”在体内重新产生或增强，以减少流产几率。该治疗对紧急保胎、促妊娠等也具有一定疗效。
治疗过程：抽取无关患者血缘关系的人（丈夫或其亲属等，最好在45岁以下）静脉血约20ml，提取免疫细胞，以多点注射法在患者前臂进行皮下接种，一般接种6~8个点，2～3周1次，3-4个月为一个疗程，均应在医院进行。1个疗程后取患者静脉血复查“封闭性抗体”，若仍无抗体产生追加治疗1-2次可计划妊娠，若已产生抗体，要求在1-6个月内受孕，若3个月不孕，建议采用促排卵或人工授精，以加快妊娠。一旦确诊早孕，需要进行第2个疗程治疗，程序同上，即持续到妊娠后3个月。
为保证患者的治疗效果和安全，接受治疗者应接受以下检查或提供以下检查材料： ①闭性抗体检测为阴性；②夫妻双方染色体正常；③夫妻双方ABO和Rh血型检查；④夫妻双方乙肝表面抗原、丙肝、梅毒和HIV抗体均阴性以及TORCH检查；⑤夫妻双方肝肾功能检查；⑥妻子内分泌检测；⑦免疫球蛋白检测；⑧甲状腺检查；⑨妻子生殖道及其他妇科检查等；⑩夫妻双方身体健康，无免疫性疾病等。对于紧急保胎者，夫妻双方应至少接受肝功和输血前四项检查，第一个月每2周做一次，妊娠第2、3个月各做一次。 其他要求：
①治疗应在医生统一计划下进行；整个治疗过程应在医院完成。
②极少数患者治疗后仍出血流产，可能还在有难以发现的原因，需进一步检查。 ③早孕后若出现阴道出血、下腹痛等先兆流产情况，应及时和我们联系。 ④为提高妊娠成功率，建议发现早孕后配合中西医安胎。
⑤免疫治疗的主要并发症是感染。一旦发现及时联系医生以便进行抗感染治疗，另外，多数患者首次治疗后会出现红肿等现象，为免疫反应，随治疗次数增多会逐渐减弱。
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不孕不育免疫治疗登记表
男方姓名 女方姓名 现病史 病因检查与诊断 遗传 染色体检查 检查 基因检查 血液封闭性抗体检查 白细胞分化（CD）抗原检查 免疫 HLA检查 检查 自身抗体检查 免疫球蛋白检查 其他 黄体功能不全 多囊卵巢综合征 高泌乳素血症 甲状腺疾病 糖尿病 其他 男方 年龄 年龄 住址： 电话： 编号： 女方 内分泌检查 病毒（如TORCH） 感染细菌 因素支原体/依原体 检查 其他 解剖子宫畸形 因素子宫动脉阻抗增高、宫腔粘连 检查 肌瘤、腺肌病、宫颈机能不全等 凝血 凝血检查 机制 其他 ABO 血型Rh 检查 其他 血液肝、肾功能检查 治疗前健康检查 血液乙肝表面抗原检查 血液丙肝抗体检查 血液梅毒螺旋体检查 血液HIV检查 其他 不孕不育原因：①遗传因素，②免疫因素，③内分泌因素，④感染因素，⑤解剖因素，⑥其他 ⑴治疗目的：①习惯性流产治疗；②紧急保胎；③促进受孕；④其他 ⑵治疗计划：①2～3周1次，4次复查封闭性抗体；②每2周1次，持续妊娠3个月。 跟踪情况： 首诊医师： 11
日期： 年 月 日 免疫治疗跟踪登记表 姓 名 联系电话 封闭抗体转阳时间 妊娠时间 产前情况 产检情况
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分娩时间及情况 保胎治疗知情同意书
保胎治疗的前提是宫内妊娠、胎儿存活且正常，所以保胎前一定要进行B超
及其它辅助检查，以明确胚胎是否存活，对于由于早期妊娠胚胎过小而无法通过检测确认而要求保胎者，应知晓以下情况：
1、妊娠期阴道流血是流产的征兆，但胎儿异常、葡萄胎、宫外孕、妊娠合并阴道和宫颈病变以及妊娠合并生殖道损伤等，均表现为持续性阴道流血。这样保胎则可出现不良后果。
2、保胎治疗包括免疫调节、激素类药物应用、中药、卧床休息等，其中激素类药物对个别胎儿发育可能有影响。
3、流产胚胎中约50%左右具有遗传染色体突变，为避免疾病儿出生，当保胎至胚胎稳定后应接受羊膜腔穿刺行羊水检查。
我们已认真阅读以上内容，愿意承担保胎带来的风险，并要求保胎治疗。
患者签字： 联系电话： 201 年 月 日
医生签字： 201 年 月 日
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免疫治疗计划单 （每次治疗请持本单） 日期：201 年 月 日 男方姓名 女方姓名
年龄 年龄
住址： 电话：
1、治疗目的：①习惯性流产治疗；②紧急保胎；③促进受孕；④其他
2、治疗计划：①2～3周1次，4次复查封闭性抗体；②每2周1次，持续妊娠3个月。 3、治疗时间记录：
第一次治疗时间201 年 月 日 第六次治疗时间201 年 月 日 第二次治疗时间201 年 月 日 第七次治疗时间201 年 月 日 第三次治疗时间201 年 月 日 第八次治疗时间201 年 月 日 第四次治疗时间201 年 月 日 第九次治疗时间201 年 月 日 第五次治疗时间201 年 月 日 第十次治疗时间201 年 月 日
封闭性抗体复查结果及处理措施：
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