肿瘤干细胞培养：
一次成球：
1、将生长状态良好的细胞消化后离心，去掉含血清培养基，用PBS清洗2次；
2、用干细胞培养基重悬细胞，计数；
干细胞培养基：DMEM/F12+1XB27+20ng/ml bFGF+20ng/ml EGF
3、细胞铺板：选择超低吸附细胞培养六孔板，每孔N个细胞（500-5000个，根据细胞的成球能力），补加4毫升培养基；
4、10天左右（不同细胞培养时间不同）完成培养，观察成球状态。
二次成球：
1、收集一次成球得到的细胞球，离心去上清，胰酶消化；
2、加含血清的培养基终止消化，离心去掉含血清培养基，用PBS清洗2次；
3、用干细胞培养基重悬细胞，计数；
4、细胞铺板：铺板的细胞数量应与一次成球铺板的细胞数量相同；
5、10天左右（不同细胞培养时间不同）完成培养，观察成球状态。
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