靛玉红、色胺酮对LPS诱导RAW264.7炎症细胞模型的抗炎作用研究

世界中西医结合杂志２０１５年第１０卷第８期ｗ。ｒｉｄ　Ｊｏｕｒｎａ１。ｆ　Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ　Ｔｒａｄｉｔｉ。ｎａｌ　ａｎｄ　ｗｅｓｔｅｒｎ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　２０１５，Ｖｏ１．１０，Ｎ。．８　’１０６９・　实验研究・　靛玉红、色胺酮对ＬＰＳ诱导ＲＡＷ２６４．７炎症　细胞模型的抗炎作用研究　刘丽娟　王允亮　许树青　魏仕兵　李军祥　【摘要】　目的研究靛玉红、色胺酮对脂多糖（ＬＰＳ）诱导的ＲＡＷ２６４．７炎症细胞的抗炎作用。　方法以１０　ｍｌ　ＬＰＳ刺激ＲＡＷ２６４．７细胞２４　ｈ诱导ｕｃ体外炎症模型，以ＭＴＹ法检测靛玉红、色　模型　胺酮的对正常细胞的作用，以酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）研究靛玉红、色胺酮在直接干预、预防干预２　种模式下对细胞培养液白细胞介素一６（ＩＬ一６）／肿瘤坏死因子（ＴＮＦ一０ｃ）浓度的影响。结果组中ＩＬ一６／ＴＮＦ一０ｌ浓度较正常组均有明显升高（Ｐ＜０．０１）；靛玉红直接干预时，细胞培养液ＩＬ一６　（５．０、１０．０　ｉ￣ｍｏｌ／Ｌ）／ＴＮＦ—ｏｔ（２．５、５．０、１０．０　ｔｘｍｏｌｆＬ）均较模型组有明显下降（Ｐ＜０．０５）；色胺酮直接　干预时，细胞培养液ＩＬ一６（０．８、８．０　ｉ￣ｍｏｌ／Ｌ）／ＴＮＦ—ｏｔ（０．８　Ｉ￣ｍｏｌ／Ｌ）均较模型组有明显下降（Ｐ＜　０．０１，Ｐ＜０．０５），预防作用模式下，细胞培养液ＩＬ一６（０．０８、０．８　ｔｘｍｏｌ／Ｌ）较模型组有明显下降（Ｐ＜　０．０５）。结论靛玉红、色胺酮有一定的体外抗炎作用，抗炎模式以直接干预为主，抗炎机制可能为下　调ＩＬ一６／ＴＮＦ一０ｌ的表达，可用于防治溃疡性结肠炎。　【关键词】溃疡性结肠炎；青黛；ＲＡＷ２６４．７；细胞因子；实验研究　【中图分类号】Ｒ２８５．５　【文献标识码】Ａ　Ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　Ｉｎｄｉｒｕｂｉｎ　ａｎｄ　Ｔｒｙｐｔａｎｔｈｒｉｎ　ｏｎ　ＬＰＳ　Ｉｎｄｕｃｅｄ　ＲＡＷ２６４．７　Ｉｎｆｌａｍ．　ｍａｔｏｒｙ　Ｃｅｌｌ　Ｍｏｄｅｌ　ｉｎ　Ｖｉｔｒｏ　Ｌｉｕ　Ｌｉ—ｊｕａｎ　，Ｗａｎｇ　Ｙｕｎ—ｌｉａｎｇ　，Ｘｕ　Ｓｈｕ—ｑｉｎｇ　，Ｗｅｉ　Ｓｈｉ—ｂｉｎｇ　，Ｌｉ　Ｊｕｎ—ｘｉａｎｇ　（１．Ｄｏｎｇｆａｎｇ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　１０００７８；２．Ｏｕｔ—Ｐａｔｉｅｎｔ　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ，　ＰＩＪＡ　Ｎｏ．６１７８５　Ａｒｍｙ．Ｂｅｉｊｉｎｇ　１０００７５）　【Ａｂｓｔｒａｃｔ】　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ａｎｔｉ—ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｉｎｄｉｒｕｂｉｎ　ａｎｄ　ｔｒｙｐｔａｎｔｈｒｉｎ　ｏｎ　ＬＰＳ　Ｉｎｄｕｃｅｄ　ＲＡＷ２６４．７　ｉｌａｍｍａｔｆｎｏｒｙ　ｃｅｌｌ　ｍｏｄｅ１．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｍｕｒｉｎｅ　ｍａｃｒｏｐｈａｇｅＲＡＷ２６４．７　ｃｅｉｌｓ　ｗｅｒｅ　ｓｔｉｍｕｌａ—　ｔｅｄ　ｂｙ　１０　ｍｌ　ＬＰＳ　ｆｏｒ　２４　ｈ　ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａｎ　ＵＣ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｃｅｌｌ　ｍｏｄｅ１．Ｃｅｌｌ　ｖｉａｂｉｌｉｔｙ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ＭＴｒ　ａｓｓａｙ　ｔｏ　ｅｘｐｌｏｒｅ　ｔｈｅ　ｓａｆｅ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ．ＵＣ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｃｅｌｌ　ｍｏｄｅｌ　ｗａｓ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｂｙ　ｉｎｄｉｒｕｂｉｎ　ａｎｄ　ｔｙｐｔａｎｔｒｈｒｉｎ　ｉｎ　ｔｗｏ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｗａｙｓ：ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｍｏｄｅ　ａｎｄ　ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ　ｍｏｄｅ．ＩＬ一６　ａｎｄ　ＴＮＦ—ｏｄｎ　ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ　ｗａｓ　ｔｅｓｔｅｄ　ｂｙ　Ｅｌｉｓａ　ａｓｓａｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　ＩＬ一６　ａｎｄ　ＴＮＦ—　ｉｎ　ｓｕｐｅｍａｔａｎｔ　ｉｎ　ｍｏｄｅｌ　ｇｒｏｕｐ　ｗｅｒｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ（尸＜０．０１）；Ｕｎｄｅｒ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｍｏｄｅ，ＩＬ一６（５．０、１０．０￣ｍｏｌ／Ｌ）ａｎｄ　ＴＮＦ—ｏ／，（２．５、　５．０、１０．０￣ｍｏｌ／Ｌ）ｉｎ　ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ　ｗｅｒｅ　ｒｅｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｉｎｄｉｒｕｂｉｎ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ（Ｐ＜０．０５）；ＩＬ一６（０．８、８．０　ｂ￣ｍｏｌ／Ｌ）ａｎｄ　ＴＮＦ—ｏｔ（０．８￣ｍｏｌ／Ｌ　ｇｒｏｕｐ）ｉｎ　ｓｕｐｅｍａｔａｎｔ　ｗｅｒｅ　ｒｅｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｔｙｐｔｒａｎｔｈｒｉｎ　ｓｉｎｉｇｉｆｃａｎｔｌｙ（Ｐ＜　０．Ｏ１，Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１）；Ｗｈｉｌｅ　ｕｎｄｅｒ　ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ　ｍｏｄｅ，ｏｎｌｙ　ＩＬ一６（０．０８、０．８　ｔｘｍｏｌ／Ｌ　ｒｏｕｐｓ）ｉｇｎ　ｓｕｐｅｒ－　ｎａｔａｎｔ　ｗｅｒｅ　ｒｅｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｔｙｒｐｔａｎｔｈｒｉｎ（Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｉｎｄｉｒｕｂｉｎ　ａｎｄ　ｔｒｙｐｔａｎｔｈｒｉｎ　ｃｏｕｌｄ　ｉｎｈｉｂｉｔ　ｉｎ—　ｌａｍｍａｔｉｆｏｎ　ｉｎ　ＵＣ　ｉｌａｍｍａｔｆｎｏｒｙ　ｃｅｌｌ　ｍｏｄｅｌ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ，ｍａｉｎｌｙ　ｕｎｄｅｒ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｍｏｄｅ　ｂｙ　ｄｏｗｎ—ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ　ＩＬ一６　ａｎｄ　ＴＮＦ—ｏｍｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．　【Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ】　Ｎａｔｕｒａｌ　ｉｎｄｉｇｏ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ；Ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ　ｃｏｌｉｔｉｓ；ＲＡＷ２６４．７　ｃｅｌｌｓ；Ｃｙｔｏｋｉｎｅ；ｅｘ—　ｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　青黛是常用的传统中药，具有清热解毒、凉血　消斑、清肝泻火的作用，临床上青黛以及含有青黛　的复方锡类散等被广泛应用于溃疡性结肠炎（ｕｌｃｅｒ．　ａｔｉｖｅ　ｃｏｌｉｔｉｓ，ＵＣ）的治疗中　Ｊ。靛玉红、色胺酮是青　黛的主要成分，本研究以脂多糖（１ｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒ．　ＤＯＩ：１０．１３９３５／ｊ．ｃｎｋｉ．ｓｊｚｘ．１５０８１２　ｉｄｅｓ，ＬＰＳ）刺激ＲＡＷ２６４．７细胞构建体外炎症模型，　基金项目：北京中医药大学创新团队资助项目（Ｎｏ．２０１１一ＣＸＴＤ一２４）　作者单位：１．北京中医药大学东方医院脾胃肝胆科，北京１０００７８；２　解放军６１７８５部队门诊部，北京１０００７５　以白细胞介素一６（ＩＬ一６）／Ｈｅ瘤坏死因子一ｏ．ｒ（ＴＮＦ　仅）为炎性指标，探究青黛主要成分靛玉红、色胺　酮的体外抗炎作用。　一通讯作者：李军祥，Ｅｍａｉｌ：ｌｉｊｕｎｘｉａｎｇ１２２６＠１６３．ｅｏｍ　・１０７０。　世界中西医结合杂志２０１５年第１０卷第８期Ｗ０ｒｉｄ　Ｊｏｕｍａｌ　ｏｆ　Ｉｎ№　ｍ【ｅｄ　Ｔｒａｄｉｔｉ。ｎａｌ　ａｎｄ　ｗｅｓｃｅｍ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　２０１５Ｖｏ１．１０，Ｎ。．８　１材料与方法　１．１实验材料　１．１．１　药物与试剂　靛玉红粉末（２０　ｍｇ，纯度≥　９７％，批号：２０１２１１２３，购于南京泽郎医药植提科技　有限责任公司）、色胺酮粉末（０．２５　ｇ，纯度≥９７％，　批号：ＳＹ１２１１２２２３，购于上海韶远化学科技有限公　司）、胰蛋白酶一ＥＤＴＡ消化液（北京索莱宝科技有　限公司）。ＭＴｒ试剂盒［普洛麦格（Ｐｒｏｍｅｇａ）生物技　术有限公司］，二甲基亚砜（Ｄｉｍｅｔｈｙｌ　ｓｕｌ￣ｘｉｄｅ，ＤＭ．　ＳＯ）、ＬＰＳ（Ｓｉｇｍａ）；胎牛血清、青霉素链霉素双抗、　ＤＭＥＭ培养液（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ　ｓ　Ｍｏｄｉｇｅｄ　Ｅａｇｌｅ　Ｓ　Ｍｅｄｉｕｍ，　ＤＭＥＭ）（Ｇｉｂｃｏ）；ＴＮＦ一仅、小鼠ＩＬ一６试剂盒（武汉　博士德生物园工程有限公司）。　１．１．２细胞株小鼠巨噬细胞株ＲＡＷ２６４．７细胞　由中国中医科学院提供，冻存于液氮备用。　１．１．３　实验仪器ＺＤ一４２０电热恒温水浴箱、Ｍｕ］．　ｔｉｓｋａｎ　Ａｓｃｅｎｔ酶标仪（美国Ｔｈｅｒｍｏ　Ｅｌｅｃｔｒｏｎ），　ＢＳ２２４Ｓ电子天平（德国赛多利斯），Ｎａｐｃｏ５４１０型二　氧化碳孵箱（美国ＮＡＰＣＯ），倒置显微镜ＤＭＩＬ（德　国ＬＥＩＣＡ），光学显微镜（奥林巴斯），程序冻存盒，　超净台。　１．２　实验方法　１．２．１　细胞培养及传代方法　正常小鼠ＲＡＷ　２４６．７细胞以含终浓度为１０％胎牛血清、１０万Ｕ／Ｌ　青链霉素的ＤＭＥＭ培养液培养，置于５％ＣＯ　、３７　ｏＣ　细胞培养箱中。根据细胞生长情况约ｌ２—２４　ｈ换　液１次；传代方法：待细胞生长至７０％～８０％后，以　０．２５％的胰蛋白酶一ＥＤＴＡ消化，吹打离心分离细　胞后进行传代培养，约４—６　ｄ传代１次，冻存于液　氮中备用。　１．２．２　ＬＰＳ刺激ＲＡＷ２６４．７细胞构建炎症细胞模　型诱导方法：正常小鼠ＲＡＷ２６４．７细胞以含终浓　度为１０％胎牛血清、１０万Ｕ／Ｌ青链霉素的ＤＭＥＭ　培养液培养，按１×１０　／ｍｌ、１００　ｌ／／孑Ｌ接种于９６孔　板中，接种细胞总数为１×１０　孔，置于含５％　ＣＯ　、３７℃细胞培养箱中，贴壁２４　ｈ后，弃细胞培养　液，加入含终浓度为１０　ｇ／ｍｌ　ＬＰＳ的ＤＭＥＭ培养液　１００　１，培养２４　ｈ　。　１．２．３　ＭＴＴ法检测靛玉红及色胺酮对ＲＡＷ２６４．７　细胞的影响　正常小鼠ＲＡＷ２６４．７细胞以含终浓　度为１０％胎牛血清、１０万Ｕ／Ｌ青链霉素的ＤＭＥＭ　培养液培养，按１　Ｘ　１０　／ｍｌ、１００　ｌ／孔接种于９６孔　板中，接种细胞总数为１×１０　个／孔，置于含５％　，ＣＯ　、３７　ｃ【＝细胞培养箱中，贴壁２４　ｈ后，弃细胞培养　液，加入不同终浓度的靛玉红（０￣ｍｏＶＬ、２．５　ｍｏｌ／／　Ｌ、５　ｍｏｌ／Ｌ、１０　ｍｏｌ／Ｌ、２０　ｍ０ｌ／／Ｌ、４０　ｍ０ｌ／Ｌ、８０　ｍ０ｌ／，Ｌ）及色胺酮（０　ｍｏｌ／／Ｌ、０．０８　ｍｏｌ／Ｌ、０．８　ｍ０ｌ／／Ｌ、８　ｍ０ｌ／，Ｌ、８０　ｍｏｌ／／Ｌ、８００　ｍ０ｌ／Ｌ）ＤＭＥＭ　培养液（靛玉红及色胺酮以ＤＭＥＭ溶解，加入ＤＭ—　ｓ０助溶，ＤＭＳＯ终浓度≤０．１％），培养２４　ｈ后，弃　细胞培养液，每孔加入ＤＭＥＭ　１００　ｌ，以ＭＴＴ比色　法检测不同浓度靛玉红及色胺酮对正常ＲＡＷ２６４．７　细胞的影响。每个浓度设置６个平行孔。实验重复　３次。计算抑制率。　ｖ：　Ｖ＝——×１００％　×　其中Ｙ为抑制率，ｍ为实验组平均ＯＤ值，ｎ为空　白对照组平均ＯＤ值。　１．２．４靛玉红及色胺酮对炎症细胞模型的作用　１．２．４．１直接干预作用模式正常小鼠ＲＡＷ２６４．７　细胞按１×１０　／ｍｌ、５００　ｌ／／孔接种于２４孔板中，接　种细胞数为５×１０　个／孔，置于３７℃、５％ＣＯ　细胞　培养箱中贴壁培养２４　ｈ后，弃细胞培养液。根据　ＭＴｒ结果，设置靛玉红实验组（以０．１％ＤＭＳＯ助　溶，靛玉红终浓度为２．５　ｍｏ】／Ｌ、５．０￣ｍｏＶＬ、１０　ｍｏｌ／／Ｌ、２０　ｍｏｌ／，Ｌ＋１０　ｍｌ　ＬＰＳ）、色胺酮实验组　（以０．１％ＤＭＳＯ助溶，色胺酮终浓度为０．０８　ｍｏｌ／／　Ｌ、０．８　ｍｏ１／／Ｌ、８　ｍｏｌ／／Ｌ＋１０　ｇ／ｍｌ　ＬＰＳ），模型组　（０．１％ＤＭＳＯ＋１０　ｇ／ｍｌ　ＬＰＳ），正常组（０．１％ＤＭ—　Ｓ０），继续培养２４　ｈ后，取细胞培养液，４℃低温离　心（３０００　ｒｐｍ、１０　ｍｉｎ）取上清，按照ＥＬＩＳＡ试剂盒说　明检测细胞培养液中ＩＬ一６、ＴＮＦ—ｏ【的浓度。每个　浓度设置６个平行孔。实验重复３次。　１．２．４．２预防性作用模式正常小鼠ＲＡＷ２６４．７　细胞按ｌ×１０　／ｍ］、５００　ｌ／孔接种于２４孔板中，接　种细胞数为５　Ｘ　１０　个／孑Ｌ，置于３７℃、５％ＣＯ：细胞　培养箱中贴壁２４　ｈ后，弃细胞培养液。根据ＭＴＩ＇　结果，靛玉红及色胺酮实验组以不同浓度靛玉红及　色胺酮培养液（浓度设置同１．２．４．１）干预４　ｈ，模型　组和正常组以普通ＤＭＥＭ培养液对照，弃细胞培养　液，除正常组外，各组均加入含终浓度为１０　ｇ／ｍｌ　ＬＰＳ的ＤＭＥＭ培养液，继续培养２４　ｈ，取细胞培养　液，４℃低温离心（３０００　ｒｐｍ、１０　ｒａｉｎ）取上清，按照　ＥＬＩＳＡ试剂盒说明检测细胞培养液中ＩＬ一６、ＴＮＦ—　的浓度。每个浓度设置６个平行孔。实验重复　３次。　１．３统计学方法　数据以均数±标准差（　±ｓ）表示，采用ＳＰＳＳ１８．０　世界中西医结合杂志２０１５年第１０卷第８期Ｗｏｒｌｄ　Ｊｏｕｍａｌ　ｏｆ　Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　ａｎｄ　Ｗｅｓｔｅｒｎ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　２０１５，Ｖｏ１．１０，Ｎｏ．８　・１０７１・　统计软件分析，组间比较符合正态分布且方差齐的　进行单因素方差分析（Ｏｎｅ—ｗａｙ　ＡＮＯＶＡ），ＬＳＤ进　２．２靛玉红对ＬＰＳ诱导的ＲＡＷ２６４．７炎症细胞模　∞∞∞∞∞∞∞∞∞∞　型的作用　行两两比较；不符合正态分布或方差不齐的进行非　参数检验，以Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。　２结果　模型组细胞培养液ＩＬ一６、ＴＮＦ—ｏｌ的浓度均较　正常组有明显的升高（Ｐ＜０．０５）；直接干预作用模　式下，靛玉红５．０　ｐ￣ｍｏｌ／Ｌ、１０．０￣ｍｏｌ／Ｌ组ＩＬ一６的　浓度较模型组明显降低（Ｐ＜０．０５）；靛玉红２．５　￣ｍｏｌ／Ｌ、５．０￣ｍｏｌ／Ｌ、１０．０　ｔｘｍｏｌ／Ｌ组ＴＮＦ—Ｏｔ的浓　２．１　靛玉红及色胺酮对正常ＲＡＷ２６４．７细胞的　作用　度较模型组明显降低（Ｐ＜０．０５）。预防作用模式　下，靛玉红各浓度组ＩＬ一６、ＴＮＦ—ｏｌ浓度均无明显　当靛玉红浓度为２．５￣ｚｍｏｌ／Ｌ、５　ｔｘｍｏｌ／Ｌ、１０　￣ｚｍｏｌ／Ｌ时，靛玉红对细胞的活性抑制与正常组比较　差异无统计学意义；浓度为２０　ｐ￣ｍｏｌ／Ｌ、４０　ｉｘｍｏＬ／Ｌ、　８０￣ｍｏｌ／Ｌ时，细胞的抑制率明显升高（Ｐ＜０．０５、Ｐ　＜０．Ｏ１），为排除靛玉红对细胞活性的抑制对实验　的干扰，选择０￣ｍｏｌ／Ｌ、２．５　ｆｘｍｏｌ／Ｌ、５　ｐ￣ｍｏｌ／Ｌ、１０　ｔｘｍｏｌ／Ｌ　４个浓度研究抗炎作用（见图１）。当色胺　酮浓度为０．０８￣ｍｏｌ／Ｌ、０．８￣ｍｏｌ／Ｌ、８　ｔｚｍｏｌ／Ｌ时，　色胺酮对细胞的活性抑制与正常组比较差异无统　计学意义，浓度为８０￣ｍｏｌ／Ｌ、８００　ｐ￣ｍｏｌ／Ｌ时，细胞　的抑制率明显升高（Ｐ＜０．０５），为排除色胺酮对细　胞活性的抑制对实验的干扰，选择０　ｐ￣ｍｏｌ／Ｌ、０．０８　￣ｘｍｏｌ／Ｌ、０．８　Ｉｘｍｏｌ／Ｌ、８￣ｚｍｏｌ／Ｌ　４个浓度研究抗炎作　用（见图２）。　一　、－，　褂　磊　嚣　０　２．５　５　１Ｏ　２０　４Ｏ　８Ｏ　靛玉红浓度（　ｍｏｌ／Ｌ）　注：与正常组（靛玉红浓度０￣ｚｍｏｌ／Ｌ）比较，　Ｐ＜０．０５，　Ｐ＜０．０１　图１不同浓度靛玉红对ＲＡＷ２６４．７细胞活性的作用　一　一　褂　磊　嚣　色胺酮浓度（ＬＬｍｏｌ／Ｌ）　注：与正常组（色胺酮浓度０￣ｍｏｌ／Ｌ）比较，　Ｐ＜Ｏ．０５，　Ｐ＜Ｏ．Ｏ１　图２不同浓度色胺酮对ＲＡＷ２６４．７细胞活性的作用　改变。结果见表１。　表１靛玉红对细胞上清液ＩＬ一６、ＴＮＦ—Ｏｒ．的影响（　±Ｓ）　注：与正常组比较，　Ｐ＜０．０５；与模型组比较，　Ｐ＜０．０５　２．３　色胺酮对ＬＰＳ诱导的ＲＡＷ２６４．７炎症细胞模　型的作用　模型组细胞培养液ＩＬ一６、ＴＮＦ—　的浓度均较　正常组有明显的升高（Ｐ＜０．０５）；直接干预作用模　式下，色胺酮０．８、８．０￣ｘｍｏｌ／Ｌ组ＩＬ一６的浓度较模　型组明显的降低（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１）；色胺酮０．８　￣ｍｏｌ／Ｌ组ＴＮＦ一仅的浓度较模型组明显降低（Ｐ＜　０．０１）。预防作用模式下，色胺酮０．０８￣ｍｏｌ／Ｌ、０．８　ｐ．ｍｏ］／Ｌ组ＩＬ一６的浓度较模型组明显降低（Ｐ＜　０．０５）；各色胺酮各浓度组ＴＮＦ一仅浓度均无明显改　变，结果见表２。　表２色胺酮对细胞上清液ＩＬ一６、ＴＮＦ一　的影响（　±ｓ）　注：与正常组比较，　Ｐ＜０．０５，　Ｐ＜０．Ｏ１；与模型组比较，　Ｐ＜　０．０５．　Ｐ＜０．０１　３讨论　中医药防治ＵＣ与现代医学相比副作用少、费　用低、复发率低　，而且作用靶点多样化。亚洲国　家ｕｃ发病率和患病率逐年增加　。因此开展中医　药对ｕｃ的防治研究对于弥补现代医学在治疗ＵＣ　上的不足，扩大治疗思路，改善人们的生活质量和　・１０７２。　世界中西医结合杂志２０１５年第１０卷第８期Ｗｏｒｌｄ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ　Ｔｒａｄｉｔｉ。ｎａｌ　ａｎｄ　Ｗｅｓｔｅｍ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　２０１５Ｖｏ１．１０．Ｎ。．８　提高工作效率具有重要作用。　靛玉红、色胺酮为青黛的有效成分，同时也是　多种相关复方如锡类散　Ｊ、溃疡散　的主要提取　物。研究证实口服青黛能有效治疗难治性溃疡性　结肠炎，且未发现不良反应　Ｊ。临床ＲＣＴ显示锡类　散灌肠能显著改善轻中度　和难治性　溃疡性结　肠炎患者临床症状、内镜下损伤，作为一种治疗ＵＣ　的辅助药物疗效显著。实验研究显示靛玉红＿９－ｌＯｌ、　色胺酮均有显著的抗炎、抗肿瘤作用，且对ＵＣ动物　模型疗效显著¨　。ＩＬ一６是一种重要的促炎细胞因　子，在慢性肠道炎症的发病机制中起重要的作　用¨　。ＴＮＦ一０【能促使中性粒细胞聚集、内皮细胞　黏附分子上调、凝血酶原效应等，在炎性反应、免疫　应答的启动和持续过程中具有不可或缺的作用，是　肠黏膜炎症反应的核心环节，ＴＮＦ一　的特异性抗　体英夫利辛已经应用在ｕｃ的临床治疗中¨　，都证　实血清ＴＮＦ一　１４１、ＩＬ一６¨　的水平可反映ｕＣ的严　重程度。基于此我们假设靛玉红、色胺酮是青黛和　锡类散主要有效成分，以ＬＰＳ诱导的ＲＡＷ２６４．７细　胞这种炎症反应及抗炎机制的普遍的模型　为研　究载体，以ＩＬ一６／ＴＮＦ一　作为抗炎疗效指标，从直　接干预、预防性干预两种不同的作用模式探讨靛玉　红、色胺酮治疗ＵＣ的作用机制和作用模式。　实验结果表明当靛玉红浓度＞２０￣ｍｏｌ／Ｌ，色胺　酮浓度＞８０　ｉｘｍｏｌ／Ｌ，对ＲＡＷ２６４．７细胞活性的抑　制率明显升高，笔者目前尚未发现对青黛单药毒副　作用的报道，因此对靛玉红、色胺酮相关中药如青　黛、锡类散等的毒副作用有待进一步探索；在直接　干预模式下，靛玉红、色胺酮均能够显著减轻　ＲＡｗ２６４．７炎症细胞模型的炎症反应，预防模式下，　靛玉红对ＩＬ一６／ＴＮＦ—ＯＬ含量均无明显影响，抗炎　作用不明显；色胺酮０．０８　ｔｘｍｏｌｆＬ、０．８ｖｍｏｌ／Ｌ组能　显著减低ＩＬ一６的浓度，但对ＴＮＦ一　无影响；靛玉　红、色胺酮抗炎的干预模式均以直接干预作用为　主，预防作用均不明显，推测可能与药物预防性处　理的时间及预防处理的方式有关，有待进行进一步　研究。　本研究对借助细胞模型对靛玉红、色胺酮的抗　炎作用做了初步的探讨，为有效的防治ＵＣ的发生　发展提供了实验参考。除靛玉红、色胺酮外青黛还　有没有其他的有效成分，靛玉红、色胺酮抗炎的具　体作用机制及作用模式是什么，预防性治疗在ＵＣ　．的防治中有无明确的意义，需要做更加系统和深入　的研究。　参考文献　［１］Ｈｉｄｅｏ　Ｓ，Ｔｓｕｙｏｓｈｉ　Ｋ，Ｙｕｊｉ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　ｅｆｆｉｃａｃｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｑｉｎｇ　ｄａｉ　ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｉｎｔｒａｃｔａｂｌｅ　ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ　ｃｏｌｉｔｉｓｆ　Ｊ］．Ｗｏｒｌｄ　Ｊ　Ｇａｓｔｒｏ—　ｅｎｔｅｒｏｌ，２０１３，１９（１７）：２７１８—２７２２．　１　２］Ｋｉｍ　ＪＫ，Ｐａｒｋ　ＧＭ．Ｉｎｄｉｒｕｂｉｎ一３一ｍｏｎｏｘｉｍｅ　ｅｘｈｉｂｉｔｓ　ａｎｔｉｉｎｆｌａｍｍａｔｏ．　ｒｙ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｂｙ　ｄｏｗｎ——ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ　ＮＦ——ｋａｐｐａＢ　ａｎｄ　ＪＮＫ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　ｐａｔｈｗａｙｓ　ｉｎ　ｌｉｏｐｐｏｌｙｓａｃｅｈａｒｉｄｅ—ｔｒｅａｔｅｄ　ＲＡＷ２６４．７　ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｉｎ—　ｆｌａｍｍ　Ｒｅｓ，２０１２（６１）：３１９—３２５．　［３］崔长虹，邓虎，高翻英，等．２００２～２０１２年中医药治疗溃疡性结肠　炎的文献计量分析［Ｊ］．世界中西医结合杂志，２０１２，７（１１）：９２９　—９３０，９５４．　［４］Ｐｒｉｄｅａｕｘ　Ｌ，Ｋａｍｍ　ＭＡ，Ｄｅ　Ｃｒｕｚ　ＰＰ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｂｏｈｔｔｐ：Ｉ１　ｗ２ｃ．ｐｐｔｖ．ｃｏｒｎ／ｐ／ｓｐｏｒｔｓ．ｐｐｔｖ．ｃｏｒｎ／ｉｎｄｅｘ２０１２０９／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌｗｅｌ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｉｎ　Ａｓｉａ：ａ　ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　ｒｅｖｉｅｗ［Ｊ］．Ｊ　Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ　Ｈｅｐａｔｏｌ，　２０１２，２７（８）：１２６６—１２８０．　［５］罗晓健，张任，何雁．八味锡类散质量标准的研究［Ｊ］．中草药，　２００６，３７（４）：５３７—５５３．　【６］徐静，张大勇，腺宇宏．溃疡散有效成份靛蓝的含量［Ｊ］．黑龙江　医学，２００６，３０（９）：７１０．　［７］Ｚｈａｎｇ　Ｆ，Ｌｉ　Ｙ，Ｘｕ　Ｆ，ｅｔ　ａ１．Ｃｏｍｐａｉｒｓｏｎ　ｏｆ　Ｘｉｌｅｉ—ｓａｎ，ａ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｈｅｒｂａｌ　ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ａｎｄ　ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ　ｉｎ　ｍｉｌｄ／ｍｏｄｅｒａｔｅ　ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ　ｐｒｏｃｔｉｔｉｓ：ａ　ｄｏｕｂｌｅ—ｂｌｉｎｄ　ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｔｒｉａｌ［Ｊ］．Ｊ　Ａｈｅｍ　Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ　Ｍｅｄ，２０１３（１９）：８３８—８４２．　［８］Ｆｕｋｕｎａｇａ　Ｋ，Ｏｈｄａ　Ｙ，Ｈｉｄａ　Ｎ，ｅｔ　１ａ　Ｐｌａｃｅｂｏ　ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｘｉｌｅｉ　Ｓａｎ，ａ　ｈｅｒｂａｌ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｉｎｔｒａｃｔａｂｌｅ　ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ　ｐｒｏｃｔｉｔｉｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ　Ｈｅｐａｔｏｌ，２０１２（２７）：１８０８—１８１５．　［９］刘雅波，陶文沂．１８种青黛７一氮杂靛玉红对６种肿瘤细胞增殖　的影响［Ｊ］．天然产物研究与开发，２０１０，２２（５）：８９９—９０６．　［１０］吴琦玮，葛忠良，高月．靛玉红对肿瘤细胞抑制作用的研究及相　关机制探讨［Ｊ］．天津中医药，２００８．２５（１）：５５—５８．　［１１］朱世敏，郝微微，唐志鹏，等．靛玉红对溃疡性结肠炎小鼠肠黏　膜细胞因子含量的影响［Ｊ］．中国中西医结合消化杂志，２０１１　（６）：３７０—３７２．　［１２］Ｓｕｚｕｋｉ　Ａ，Ｉｔａｎａｄａ　Ｔ，Ｍｉｔｓｕｙａｍａ　Ｋ，ｅｔ　ａ１．ＣＩＳ３／ＳＯＣＳ３／ＳＳＩ３　ｐｌａｙｓ　ａ　ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　ｒｏｌｅ　ｉｎ　ＳＴＡＴ３　ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ　ｉｎｆｌａｍｍａ—　ｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ　Ｅｘｐ　Ｍｅｄ，２００１（１９３）：４７１—４８１．　［１３］Ｂｌｏｎｓｋｉ　Ｗ，Ｂｕｃｈｎｅｒ　ＡＭ，Ｌｉｃｈｔｅｎｓｔｅｉｎ　ＧＲ．Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ　Ｃｏｌｉｔｉｓ［Ｊ］．ＣｕｒｔＯｐｉｎＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，２０１４，３０（１）：８４－９６．　［１４］贾长河，许泼实，康谊．溃疡性结肠炎患者血清ＩＬ一８、ＩＬ一１Ｏ、　ＴＮＦ—ｄ的水平及临床意义［Ｊ］．中华实用诊断与治疗杂志，　２００８，２２（８）：５７４—５７５，５７８．　［１５］田志颖，王丽华，苏新爱，等．溃疡性结肠炎患者树突状细胞及　ＩＬ一６、ＩＬ一１２研究［Ｊ］．胃肠病学和肝病学杂志，２０１０，１９（１１）：　１０３６一】０３９．　（收稿日期：２０１５—０３—１３）