动物营养实验

实验一 饲料水分的测定

一、实验目的

通过饲料样品中干物质的测定，了解饲料干物质含量与饲料营养价值之间的关系，并能够掌握各类饲料样品中干物质的测定方法。

二、实验原理

试样在105±2℃烘箱，在一个大气压下烘干，直至恒重，逸失的重量为水分。

三、实验设备

1、样品粉碎机或研钵；2、分样筛：40目；3、分析天平：感量0.1mg；4、烘箱；5、称样皿；6、干燥器。

四、测试方法

洁净称样皿，在105±2℃烘箱中烘1h，取出，在干燥器中冷却30min，称准至0.2mg，再烘干30min，同样冷却称重，两次称重之差小于0.5mg为恒重。

用已恒重称样皿称取两分平行试样，每份2-5g，准确至0.2mg，不盖称样皿盖，在105±2℃烘箱中烘3h，取出，盖好盖，干燥器中冷却30min，称重。

再同样烘干1h，冷却，称准，直至两次称重之差小于2mg。

五、计算

m1m2 水分（%）=m1m0×100

式中：m1-105℃烘干前试样及称样皿质量（g）；m2-105℃烘干后试样及称样皿质量（g）；m0-已恒重称样皿质量（g）。

每个试样取2个平行样测定，以其算术平均值为结果。平行样测定值相差不得超过0.2%。

实验二 饲料粗脂肪含量的测定

一、实验目的

通过饲料样品中粗脂肪的测定，掌握各类饲料样品中粗脂肪的测定原理和方法。

二、测定原理

索氏脂肪提取器中用乙醚提取试样，称提取物的重量，除脂肪外，还有有机酸、磷脂、脂溶性维生素、叶绿素等，因而测定结果称粗脂肪。

三、实验设备

1、样品粉碎机或研钵；2、分样筛（40目）；3、3、分析天平，0.1mg；恒温水浴锅；4、索氏脂肪提取器；5、滤纸；6、干燥器。

四、实验内容

索氏脂肪提取器应干燥无水，抽提瓶在105±2℃烘箱中烘30min，干燥器中冷却30min，称重。再烘干30min，冷却称重，两次称重差小于0.8mg为恒重。

取试样1-5g，准确至0.2mg，用滤纸包好，放入150℃烘箱中烘干2h，滤纸筒应高于提取器虹吸管的高度。滤纸包长度以全部浸入乙醚中为准。将滤纸包放入抽提管，在油提瓶中加入60-100ml无水乙醚，60-75℃水浴上加热，使乙醚回流，控制乙醚回流次数每小时10次，共回流50次。

取出试样，仍用原提取器回收乙醚至抽提瓶中乙醚几乎完全收完，取下抽提瓶，在水浴上蒸去残余乙醚，擦净瓶外壁。将抽提瓶放入105±2℃烘箱中烘干1h，干燥器中冷却30min，称重。再烘干30min，冷却。两次称重之差小于1mg为恒重。

五、计算

式中：m-风干试样质量，g；m1-已恒重的抽提瓶重量，g；m2-已恒重的盛有脂肪的抽提瓶重量。

每个试样取2个平行样测定，以算术平均值为结果。粗脂肪含量在10%以上，允许相对偏差3%；粗脂肪含量10%以下，允许相对偏差5%。

实验三 粗蛋白的测定

一、实验目的

通过饲料样品中粗蛋白的测定，了解凯氏定氮法的基本原理，掌握粗蛋白含量的计算方法。

二、实验原理

饲料中的有机物在还原剂作用下，用浓硫酸进行消化，使蛋白质和其他态氮转变为NH4，并与硫酸形成(NH3)2SO4。消化液在浓碱作用下蒸馏，释放出铵态氮，用硼酸吸收，变为四硼酸铵。 用甲基红溴甲酚绿作指示剂，用标准烟酸滴定，求出氮的含量。根据不同饲料，乘以相应系数（一般用6.25），即为粗蛋白质的含量。

主要化学反应如下：

本法不能区分蛋白氮和非蛋白氮，故称粗蛋白。

三、实验设备

1、粉碎机；2、分析筛；3、分析天平；4、消煮炉；5、酸式滴定管；6、凯氏烧瓶；

7、凯式蒸馏装置；8、锥形瓶；9、容量瓶。

四、实验过程

1、称取样品0.5-1g，无损失地放入凯氏烧瓶，加入硫酸铜0.9g，无水硫酸钾15g，混合均匀，加硫酸25ml和2粒玻璃珠，在消化炉上小心加热，待样品焦化，泡沫消失，加强火力直至溶液澄清，再消化15min。

2、氨的蒸馏。将上述试样消化液冷却，加蒸馏水200ml，摇匀，冷却。沿瓶壁小心加入10%氢氧化钠溶液100ml，立即与蒸馏装置相连。蒸馏装置冷凝管末端应浸入硼酸溶液。加入混合指示剂2滴，轻摇凯氏烧瓶，使溶液混匀。加热蒸馏，直至馏出液体积约150ml，先将吸收液取下，再停止加热。

3、滴定。用硼酸吸收氨后，立即用0.05mol/l的盐酸溶液滴定，扔以混合甲基红为指示剂。

4、空白测定。称取蔗糖0.01g，代替试样，按上述步骤进行测定，消耗标准盐酸的体积不得超过0.3ml。

5、计算

每个试样取2个平行样测定，以算术平均值为结果。粗蛋白含量在25%以上，允许相对偏差1%；含量在10-25%，允许相对偏差2%；含量在10%以下，允许相对偏差3%。

实验四 粗灰分的测定

一、实验目的

通过饲料样品中粗灰分的测定，掌握粗灰分的测定原理和方法。

二、实验原理

在550℃灼烧后所得残渣，用质量百分率表示。残渣中主要是氧化物、盐类等矿物质，也包括混入饲料的沙石、土等，故称粗灰分。

三、实验设备

1、粉碎机或研钵；2、分样筛（40目）；3、分析天平，0.1mg；4、高温炉；5、坩埚；6、干燥器

四、实验过程

将干净坩埚放入高温炉，在550±20℃下灼烧30min，取出，空气中冷却1min，放入干燥器冷却30 min，称重。再重复灼烧、冷却、称重，两次称重之差小于0.5mg为恒重。

在已恒重的坩埚中准确称取2-5g试样，电炉上碳化，再放入高温炉，于550±20℃灼烧3h，取出，空气中冷却1 min，干燥器中冷却30min，称重。再灼烧1h，同样冷却称重，两次称重差小于1mg为恒重。

式中，m0为已恒重空坩埚质量，g；m1为坩埚加试样质量，g；m2为灰化后坩埚加灰分质量，g。

每个试样取2个平行样测定，以算术平均值为结果。

实验五 饲料中总磷含量的测定

一、实验目的

通过饲料样品中磷的测定，掌握钼黄比色法测定饲料中总磷含量的原理和方法。

二、实验原理

将试样中有机物破坏，使磷游离出来。在酸性溶液中，用钒钼酸铵处理，生成黄色络合物，在波长420nm下进行比色。此法测得为总磷，包括难以吸收的植酸磷。

三、实验设备

1、粉碎机或研钵；2、分样筛；3、分析天平；4、分光光度计，带比色池；5、高温炉，550±20℃；6、坩埚；7、容量瓶，100ml；8、比色管，50ml；9、刻度移液管，10ml；10、凯氏烧瓶。

四、实验过程

1、试样分解：（1）干法。取试样3-5g于坩埚中，准确至0.2mg，在电炉上小心碳化，再放入550±20℃灼烧3h（也可测灰分后接续进行）。在盛灰坩埚中加入盐酸溶液10ml和浓硫酸数滴，小心煮沸。将此溶液转入100ml容量瓶，冷却至室温，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，为试样分解液。（2）湿法（用于液体饲料）。取试样2-5g于凯氏烧瓶，加入硝酸30ml,加热煮沸，至二氧化氮逸尽，冷却。加入70-72%高氯酸10ml，小心煮沸至溶液无色（不得蒸干，极危险！）。冷却后加蒸馏水50ml，煮沸驱逐二氧化碳，冷却。转入100ml容量瓶，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，为试样分解液。

2、标准曲线绘制。准确移取磷标准溶液（50μg/ml）0,1,2.4,6,8,10,12,15 ml于50ml

容量瓶，各加入钒钼铵显色试剂50ml，煮沸，冷却后转入100ml容量瓶，蒸馏水定容。以0ml为参比，420nm波长下比色，用分光光度计测各溶液的吸光度。以磷含量为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。

3、试样的测定。准确移取试样分解液1-10ml于50 ml容量瓶中，加入钒钼酸铵显色剂10ml，按上述方法显色和比色测定，测得试样分解液的吸光度，用标准曲线查试样分解液的含磷量。