慢性淋巴细胞白血病患者抗原表达与核染色体异常在临床诊断中的作用初探

ＴＯＥＡＴＩＳＥ论著　慢性淋巴细胞白血病患者抗原表达与核染色体异常　在临床诊断中的作用初探①　李学军罗伟　（湖南益阳医学高等专科学校湖南益阳　【摘要】目的了解慢性淋巴细胞白血病（ＣＬＬ）患者的抗原表达和染色体异常的一般表现。方法对５１例ＣＬＬ患者做抗原表述分　析，并对之作染色体异’ＩＩ｝检测。结果５１倒ＣＬＬ患者中，ＣＤ１９，ｃＤ２３阳性率最高为２３．５％。ＣＤ１９￣ＣＤ５的？￣０１ｉ对诊断有价值。而染色　体异常的１８例患者中，男女核型异常率比较无统计学意义。结论ＣＬＬ，￣者诊断上，抗原表达测定和核染色体异常，对诊断具有临　床意义。　‘　【关键词ｌ　ＣＬＬ抗原分型染色体异常　【中图分类号ｌ　Ｒ５５　【文献标识码ｌ　Ａ　【文章编号ｌ　１６７２—５６５４（２０１１）０４（ｂ）－０００４—０３　Ｃｈｒｏｎｉｃ　Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ　Ｌｅｕｋｅｍｉａ　Ｐａｔｉｅｎｔｓ　Ａｎｔｉｇｅｎ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎｄ　Ｎｕｃｌｅａｒ　Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ　Ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｙ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｒｏｌｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ｗｅｒｅ　Ｄｉｓｃｕｓｓｅｄ．　ＬＩ　Ｘｕｅｊｕｎ　ＬＵＯ　Ｗｅｉ　Ｈｕｎａｎ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｈｉｇｈｅｒ　Ｃｏｌ　ｌｅｇｅ　ｏｆ　ＹｉｙａｎｇＨｕｎａｎ　４１　３０００，Ｃｈｉｎａ　。［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄ　ｔｈｅ　Ｃｈｒｏｎｉｃ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ　ｌｅｕｋｅｍｉａ（ＣＬＬ）ｐａｔｉｅｎｔｓ　ａｎｔｉｇｅｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉ０ｎ　ａｎｄ　ｅｈｒｏｍｅｓｏｍｅ　ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｙ　ｏｆ　ｇｅｎｅｒａｌ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｉｎ　５１　Ｃａｓｅｓ　ｏｆ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ＣＬＬ　ａｎｔｉｇｅｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｄｏ　ｉｓ　ａｎａｌｙｚｅｄ。．ａｎｄ　ｔｈｅ　ｗｏｒｋ　Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ　ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｙ　ｔｅｓｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　５１　ｃａｓｅｓ　ＣＬＬ　ｐａｔｉｅｎｔｓ，ＣＤ１９，ＣＤ２３　ｐｏｓｉｔｉｅ　ｆｏｒ　２３５％ｈｉｇｈｅｓｔ．ＣＤ１９　ａｎｄ　ＣＤ５　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ｖａｌｕｅ．Ａｎｄ　Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ　ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｙ　ｉｎ　ｔｈｅ　１８　Ｃａｓｅｓ　ｏｆ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ａｂｎｏｒｍａｌ　ｒａｔｅ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｔｈｅ　ｋａｒｙｏｔｙｐｏ　ｍｅｎ　ａｎｄ　ｗｏｍｅｎ　ｎｏｔ　ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ＣＬＬ　ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ　ａｎｔｉｇｅｎｓ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｎｕｃｌｅａｒ　ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ　ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｉｅｓ．ｔｏ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ｈａｓ　ｅｌｉｎｉｃａｌ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ．　［Ｋｅｙ　Ｗｏｒｄｓｉ　ＣＬＬｌＡｎｔｉｇｅｎｓ　ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎｌＣｈｒｏｍｏｓｏｍｅ　ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｙ　慢性淋巴细胞白血病（ＣＬＬ）是一种　胞少见）。由于单克隆性小淋巴细胞凋　义。现将５１例ＣＬＬ患者的免疫表型及细胞　Ｂ淋巴细胞的克隆性恶性疾病（Ｔ淋巴细　亡受阻、存活时间延长而大量积聚在骨　遗传学特征分析如下。　表１　白血病诊断评分系统　髓、血液、淋巴结和其他器官，最终导致　正常造血功能衰竭。本病在欧美各国较　１资料与方法　常见，在我国发病率约占白血病总数的　１．１一般资料　１．１％～３．２％，占慢性白血病的７．６％。　益阳医学高等专科学校附属医院初　发病年龄以５０岁以上居多，男性多于女　诊ＣＬＬ患者５１例，其中男性３４例，女性ｌ７　性。ＣＬＬ的免疫表型及细胞遗传学特征研　例，年龄４３～８５岁，中位年龄６２岁，其００＞６０　究对ＣＬＬ鉴别诊断及预后判定有重要意　表２　白血病患者抗原表达情况　岁者３７例。ＣＬＬ诊断与分型参照Ⅸ血液病　诊断及疗效标准》…。ＣＬＬ评分依据２００１年　ＷＨＯ计分系（表１），典型ＣＬＬ积分４～５分。　１．２试剂与仪器　单克隆抗体包括ＣＤ５、ＣＤ１０、ＣＤ１９、　ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３８和ＦＭＣ７，所　有单克隆抗体及相应的阴性对照均为　法国Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ公司产品。流世细胞　仪为Ｂｅｃｋｍａｎ－Ｃｏｕｌｔｅｒ公司的Ｅｐｉｃｓ　①作者简介：李学军：男，讲师，湖南益阳人，主要从事医学生物学与遗传学教学和科研及管理工作。　４　中国卫生产业・第八卷・第四期・中　Ｔ嗣ＥＡ　Ｆ　Ｌ｛Ｉ￣３Ｅ论著　０　Ｎ　一　一【一；　　ｊ址一ｌ　＿—　５Ｈ性表达（阳性　Ⅺ型（ＵＳＡ），采用Ｅｘｐｏ３２一ＡＤＣ分析　步凸显了形态学、细胞遗传学和免疫学三　４３％的Ｂ—ＣＬＬ患者ＣＤ３８１软件。　者联检在白血病诊断分型中的重要性。　细胞率≥２０％），ＣＤ３８￣Ｈ性患者与ＣＤ３８阴　１．３抗原表达分析　新鲜抽取（６ｈ内）的骨髓或外周　流式细胞术（ＦＣＭ）白血病免疫分型是利　性患者相比临床分期偏后期，生存期也明　用荧光素标记的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）作分　显缩短。有学者对２４２例患者进行研究发　　血置于肝素抗凝管内，调整细胞数至　子探针，多参数分析白血病细胞的免疫表　现ＣＤ３８＋与ＣＤ３８一相比，男性多于女性，淋巴细　（０．５～１．０）×１０　／ｍＬ，取１００　Ｌ经直接免　型，由此了解被测白血病细胞所属细胞　血红蛋白和血小板计数显著减少，而在年龄、乳酸脱氢酶　疫荧光标记法标记，避光保存１　５ｍｉｎ之后　系列及其分化程度。由于能够快速、多参　胞计数明显增加；加溶血剂溶解红细胞。流式细胞术分析时　数、客观地测定细胞抗原表达，近年ＦＣＭ　水平、形态学及免疫学特征方面无明显差　均采用ＦＳｖｓＳＳ－－次设门取淋巴细胞群，再　行二次设门取ＣＤ５＋ＣＤ１９＋双阳性细胞后　分析其余抗原表达，ＣＤ５一患者二次设门　采用ＣＤ２３＋ｃＤ１９＋设门后分析其余抗原　表达。结果判断以白血病细胞表面抗原表　达≥２０％幼稚细胞群为阳性。　１．４细胞遗传学分析　治疗前抽取患者骨髓或外周血，肝素　抗凝，调整细胞数至（１～２）×１０　／ｍＬ，在　培养液中分别加入刺激淋巴细胞生长的　有丝分裂刺激剂ＰＨＡ／ＩＬ一２培养７２ｈ，按　常规制备染色体标本，然后采用Ｒ显带技　术进行核型分析。每例患者至少分析２０个　中期细胞，染色体核型描述按《人类细胞　遗传学国际命名￣￥ｔｌ（ＩＳＣＮ　２００５）））　。　１．５统计学分析　采用ｘ　检验。　２结果　各抗原在ＣＬＬ中的表达情况：本　组５１例ＣＬＬ患者中，ＣＤ１９￣ＮＣＤ２３阳性　率均为９６．１％，其次为ＣＤ５（９４．１％）、　ＣＤ２０（８２．４％）和ＣＤ２２（７８．４％），ＣＤ３８　阳性率２３．５％。ＣＤ５￣ＩＩＣＤ１９共阳性者４６　例。分别有２例和５例患者表达ｃＤ１０和　ＦＭＣ－７（表２）。　３讨论　白血病是造血干细胞异常克隆性　疾病，具有高度异质性，传统的ＦＡＢ形　态学分型仅使７０％左右的ＡＬ得以分　型。新近ＷＨＯ提出的关于恶性血液肿瘤　的诊断分型建议对白血病分型不再使用　ＦＡＢ分型的命名法，而是直接用特异性染　色体易位或免疫表型来命名其亚型，进一　已成为诊断血液恶性肿瘤不可缺少的重　异。ＣＤ３８＋还是疾病侵袭性的一个重要标　要检测手段。ＣＬＬ好发于老年男性，平均　志，无论患者的临床分期如何，即使处于　发病年龄为６０～７０岁，罕见＜３０岁的病　Ｒａｉ分期的０期，ＣＤ３８＋患者亦常具有明　例。本组５１例患者中位发病年龄为６３岁，　显的侵袭性。以上这些资料显示，ＣＤ３８的　其中＞６０岁者３８例，也说明了ＣＬＬ好发于　表达是ＣＬＬ的重要的独立的预后因素。　老年患者。　本研究５１例ＣＬＬ患者中有１２例患者表达　在ＣＬＬ患者中，淋巴细胞具有特征性　ＣＤ３８，其中１８Ｎ伴有染色体异常的患者　的免疫表型。Ｂ－ＣＬＬ病例起源于Ｂ淋巴细　中３例阳性，其染色体异常均为复杂染色　胞恶性转化和克隆，其主要的表型特点是　体异常，提示可能与预后不良有关，但是　ＣＤ５阳性的Ｂ细胞，即ＣＤ５＋ＣＤ１９＋，同时　由于病例数较少，有待进一步积累病例进　伴ＣＤ２３＋，ＣＤ２０＋，弱表达ＣＤ２２，不表达　行研究。　ＦＭＣ７。本研究中有４６例（９０．２％）为ＣＤ５　目前大部分研究表明，染色体异常　＃ＨＣＤ１９共阳性；另有３例患者（５．８％）不表　是判断ＣＬＬ预后的重要因素。有学者认　达ＣＤ５，２例患者（３．９％）不表达ＣＤ２３，但　为，１３ｑ一常于ＢｉｎｅｔＡ期时出现，预后较好，　此５例患者无一例出现ＣＤ５￣ｎＣＤ２３双阴　或与正常核型患者相似；而伴有＋１２、ｌ１ｑ一　性，结合细胞形态学、遗传学及临床表现　或１７ｐ一患者的预后均较差，复杂异常和不　进一步诊为不典型Ｂ—ＣＬＬ。因此联合测　良预后显著相关。　定ＣＤ１９￣Ｉ１ＣＤ５对ＣＬＬ诊断有重要价值。　＋１２见于１５％～４５％的ＣＬＬ患者，在　在对Ｂ—ＣＬＬ免疫表型分析时，应先以　外周血、骨髓、淋巴结中均能检出。一对　ＦＳｖｓＳＳ设门取淋巴细胞群后，再行二次设　１２号染色条染色体复制，另一条保留，存　门取ＣＤ５＋ＣＤ１９＋双阳性细胞后分析其余　在于同一细胞，形成三体。但在Ｂ—ＣＬＬ中　抗原表达，对于少数ＣＤ５－Ｂ－ＣＬＬ患者　很少发现部分１２染色体三体，因此难以找　应设门取ＣＤ２３＋ＣＤ１９＋双阳性细胞后再　到１２染色体上与发病机理有关的基因。　进一步分析其余抗原表达，以确保所测得　在不典型ＣＬＬ中，＋１２的发生率显著高　的抗原表达为肿瘤细胞。尽管有文献报道　于典型ＣＬＬ，前者占３５．８％～６５％，而　ＣＬＬ中ＣＤ２２的表达多为阴性，本研究中　后者仅占３．５％～９．７％，常在疾病的进　有７８．４％患者表达ＣＤ２２，可能与抗体荧　展期或晚期出现，约５０％以上的＋１２患　光素的选择相关。　者伴有不典型的淋巴细胞形态，Ｓｍｌｇ＊Ｈ　目前大部分研究认为　】，ＣＤ３８表达与　ＦＭＣ７强表达，Ｂｉｎｅｔ分期提前，疾病进　ＣＬＬ预后呈负相关。有学者　探讨了１６８例　展，对嘌呤类似物的反应较差，生存期　Ｂ－ＣＬＬ患者ＣＤ３８表达的临床意义，发现　短，因而需要积极的治疗。以上研究提示　ＣＤ３８＋患者无进展生存期（ＰＦＳ）较ＣＤ３８一　＋１２在ＣＬＬ的发病机制中起着重要作用，　●　者明显缩短（５年ＰＦＳ分别为３７％ＶＳ５％），　检测＋１２对诊断、预后都有相当特异性和　对化疗药物反应差、病情进展迅速、完全　重要意义。　缓解（ＣＲ）率低。Ｉｂｒａｈｉｍ等的研究显示，仅　（下转７页）　中国卫生产业・第八卷・第四期・中　５　Ｔ日ＥＡ丁工∈ｊＥ论著　ｒ二ｈⅡ　』　＿＼　一量　Ｌ㈠｛工Ｎ０ｆ：岛｝　：ｎ　定位器定位，并调整前倾角，随后并置入　股骨矩的接合部是骨质最薄弱处，因此，　临床效果，而且可以显著降低术后并发　ＤＨＳ。冲洗和负压引流同实验组。术后２组　转子间骨折发生率较高。有些患者发生骨　症，对于患者更好的恢复和提高患者生活　均常规使用抗生素抗感染，根据恢复情况　折后，还具有一定的生活自理能力，但如　质量是很有意义的，值得临床应用推广。　在合适的时间行功能锻炼。　骨折后长期卧床，将减少患者的活动锻炼　１．３效果评价　机会，使原有的慢性病进一步恶化，手术　参考文献　采用Ｈａｒｒｉｓ评分系统，分为疼痛，功　的危险性增加，因此，应尽早采取手术治　【１】潘李德，周崇斌．股骨转子间骨折的ＰＦＮ　能，下肢畸形和髋关节活动范围４项，总分　疗。　与ＤＨＳ内固定临床比较【Ｊ】．浙江创伤外　为１００分。优：８９分以上；良好：７０～８９分；　股骨转子间骨折手术治疗对骨折端　科，２Ｏ０６，１１（５）：４２３．　差：７０分以下。并统计２组愈合时间和并发　的程度主要取决于以下几个因素：骨折　［２】杨久山．ＤＨＳ、ＰＦＮ内固定治疗股骨转　症发生情况。　块的几何形状、骨骼的强度、骨折复位程　子间骨折的疗效及并发症比较【Ｊ】．山东　１．４数据处理　度、内固定物的种类和放置方法　ｌ。ＤＨＳ手　医药，２００９，４￣３８）：５８－５９．　相关数据采用ＳＰＳＳ　１２．０软件进行　术设计合理，抗弯强度大，具有动、静力加　［３】章伟，邹剑，罗从风，等．股骨近端髓内钉　统计学分析，计数资料ｘ　检验，计量资料ｆ　压及张力带作用，适用于各种类型股骨转　与动力髋螺钉治疗老年股骨转子间及　检验，以尸＜０．０５为统计学差异具有显著　子间骨折。但由于股骨应力主要集中在内　转子下骨折的比较研　Ｊ】．中华骨科杂　性。　侧，ＤＨＳ主要固定外侧皮质，容易导致骨　志，２００４，４２（１１）：６４９－６５２．　折畸形愈合，而且手术创伤大，患者多为　［４］石庆尧．股骨转子间骨折不同内固　２结果　老年患者，术后恢复较慢，而且免疫力不　定方法的疗效比较［Ｊ】．浙江临床医　２．１治疗效果　高，增加了术后感染和骨性关节炎等的发　学，２００６，８（２）：１６９．　经过治疗，２组患者均有不同程度　生。ＰＦＮ通过髓腔中央承受应力，股骨颈　［５】刘斌，张立岩，王济玮，等．ＰＦＮ治疗　的好转，临床效果统计如表１所示。２组　螺钉和主钉钉体较细，对股骨头的髓内血　股骨粗隆骨折２５例分析【Ｊ】．浙江医　优良率无显著统计学差异（ｚ　＝０．８３５，　液循环破坏程度小，偏心性入针降低了钻　学，２００６，２８（１）：３９．　Ｐ＞０．０５）。但实验组愈合时间显著少于对　孔、扩孔时引起的股骨头异常旋转；前部　照组（ｆ＝２．６７３，Ｐ＜０．０５）。　螺纹的肩颈设计可进行骨折端加压，有　【收稿日期】２０１　１－０４－０２　２．２术后并发症　效防止旋转及螺钉向股骨头内侧滑移，　术后并发症如表２所示，实验组总并　又能进行骨折端加压，远端锁定可避免　发症率显著少于对照组（）［２＝５．８４１，ｐ／０．ｏ５）。　骨折端旋转移位，从而达到更好的愈合　２组患者相关并发症经过对症处理，除骨　效果　。　。而且对患者创伤相对较小，可减　性关节炎外，均得到有效控制。　少患者术后相关并发症的发生。　从临床统计来看，２组优良率无显著　３讨论　性差异，但实验组优良率还是稍微高于对　股骨转子间骨折是指股骨颈基底至　照组。实验组愈合时间（ｔ－２．６７３，Ｐ＜０．０５）　小转子水平以上部位所发生的骨折。转子　和总并发症率（ｘ　＝５．８４１，Ｐ＜０．０５）均显著　间是骨质疏松的好发部位，骨质疏松的发　少于对照组，显示了更好的临床效果。因　生速度在股骨矩则较慢，在骨小梁较快，　此我们认为，股骨近端带锁髓内钉（ＰＦＮ）　在发展速度快的骨下粱与发展速度慢的　应用于股骨转子间骨折患者，具有较好的　（上接５页）　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　ｌｅｕｋｅｍｉａ［Ｊ］．　ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ　ｖａｌｕｅ　ｏｆ　ＣＤ３８　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　参考文献　Ｂｌｏｏｄ，２００６：７４２－７５１．　ｉｎ　１ＹｍｐｈＯＣＹｔｅ　１ｅｕｋａｅｍｉａ【Ｊ】．　［１］张之南，沈雅．血液病诊断及疗　【３］李倩，薛永权，姜海燕，等．ＰＨＡ、ＩＬ一２　Ｂｌｏｏｄ２００５，１３０：５４９－５５７．　效标准【Ｍ】．第２版．北京科学出版　ＳｎＰＨＡ／ＩＬ一２在慢性淋巴细胞白血病　社，１９９８：２２８－２３７．　染色体系统中的应用【Ｊ】．江苏医学杂　【收稿日期】２０１　１－０３—２６　［２】Ｍａｙｒ　Ｃ，Ｓｐｅｉｃｈｅｒ　ＭＲ，Ｋｏｆｌｅｒ　ＤＭ，ｅｔ　志，２００４，３０：２９６－２９７．　ａ１．Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ　ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎｓ　ａｒｅ　［４１　Ｇｅｎｔｉｌｅ　Ｍ，Ｍａｕｒｏ　ＦＲ，Ｃａｌａｂｒｅｓｅ　Ｅ，ｅｔ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｐｏｏｒ　ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ　ｉｎ　ａ１．ＣＤ３８ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｓ　ａｎ　ｉｍｐｏｒｔａｎｔ　中国卫生产业・第八卷・第四期・中　７