HBVDNA定量PCR检测对联合用药治疗慢性无症状HBsA(+)携带者的临床意义

・　１６２４　・　国际检验医学杂志２０１１年９月第３２卷第ｌ４期　ｌｎｔ　Ｊ　Ｌａｂ　Ｍｅｄ，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ　２０１１，Ｖｏ１．３２，Ｎｏ．１４　有统计学意义（Ｐ＜Ｏ．０５）；但是稀释３、５倍结果进行比较差异　无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。１２～２Ｏ号标本稀释３、５倍结果分　别与未稀释结果比较差异有统计学意义（Ｐ＜Ｏ．０５），稀释３倍　与５倍结果之间比较差异也有统计学意义（Ｐ＜Ｏ．０５）。　２．２利用ＡＵ４００主机电脑Ｄａｔａ　Ｄｉｓｐｌａｙ程序显示所有检测　结果，可以发现带有＊号的结果均显示为黄色，利用Ｒｅａｃｔｉｏｎ　Ｍｏｎｉｔｏｒ查看所有结果的反应曲线，发现带有＊号的结果，其　加入试剂２后的下降反应曲线均出现长短不等的一段平台期。　３讨　论　平台，反应终点的吸光度不是真实吸光度，由此产生的拟合曲　线计算出来的结果就不是真实值，而且已经出现多个实际检测　点的吸光度与拟合曲线的线性相关度超出１５　，所以结果会　显示为黄色，后面带有＊号。线性度的设置对所有动力学法反　应都适用。　综上所述，通过线性度的设置，每天查看Ｄａｔａ　Ｄｉｓｐｌａｙ和　Ｒｅａｃｔｉｏｎ　Ｍｏｎｉｔｏｒ中的反应曲线，可以及时发现动力学方法检　测中底物耗尽现象的问题，通过对标本稀释重测，再乘以稀释　倍数可以解决这一问题。　参考文献　［１］岳展伊，唐古生，杜大海，等．全自动生化分析仪检测酶活性过程　中底物耗尽的监测和处理ＥＪ］．国际检验医学杂志，２０１０，３１（４）：　４１４—４１５．　１～５号标本３次检测结果差异无统计学意义，说明这５　例标本不存在底物耗尽现象，在Ｄａｔａ　Ｄｉｓｐｌａｙ中显示为黑色，　后面没有标示。６～１１号标本，未稀释时反应曲线存在平台　期，Ｄａｔａ　Ｄｉｓｐｌａｙ中显示为黄色，后面带有＊号，说明存在底物　耗尽现象，将其分别稀释３、５倍后检测，均不存在底物耗尽现　象。１２～２Ｏ号标本未稀释和稀释３倍时，反应曲线都存在平　台期，Ｄａｔａ　Ｄｉｓｐｌａｙ中显示为黄色，后面都带有＊号，说明都存　［２］高小文，王志宏．终点法底物耗尽现象的自动识别［Ｊ］．检验医学　与临床，２００８，５（２２）：１３８６—１３８７．　在底物耗尽现象。将其稀释５倍后无上述情况，说明不存在底　物耗尽现象。　之所以存在底物耗尽现象的结果在Ｄａｔａ　Ｄｉｓｐｌａｙ中显示　为黄色，后面带有＊号，是因为在参数设置中设置了线性度为　１５　，其含义就是所有检测点的０Ｄ值与理想拟合曲线的线性　相关度要在１５　之内，超出这个范围就是超限，仪器对此结果　就会报警，具体表现就是在Ｄａｔａ　Ｄｉｓｐｌａｙ中显示为黄色，后面　［３］谭丽芳，肖建美，肖拥军．３Ｏ例ＡＬＴ严重底物耗尽现象的探讨　ＥＪ］．实用医技杂志，２００８，１５（２０）：２６３３．　Ｅ４］陆希明．ＯＬＹＭＰＵＳ　ＡＵ４００生化分析仪常见故障报警与处理　ＥＪ３．国际检验医学杂志，２００９，３０（６）：６１４—６１６．　Ｅ６］黄志伟．ＡＳＴ动力学法测定时底物耗尽现象浅析ＥＪ］．现代医学仪　器与应用，２００５，１７（２）：３Ｏ一３２．　［６］叶应妩，王毓三．全国临床检验操作规程［Ｍ］．２版．南京：东南大　学出版社，１９９７：３３２．　带有＊号。在超高值、高值标本未稀释检测的反应曲线图中，　反应起点和反应终点的连线为理想的拟合曲线，反应过程中由　于酶底物耗尽使得多个反应点吸光度趋于一致，曲线产生一段　・（收稿日期：２ＯｌＯ—ｌ２　１８）　经验交流・　ＨＢＶ　ＤＮＡ定量ＰＣＲ检测对联合用药治疗慢性无症状　ＨＢｓＡｇ【＋）携带者的临床意义　孑乙亚红　（广西壮族自治区南宁市第四人民医院检验科　５３００２３）　摘要：目的探讨ＨＢＶ　ＤＮＡ定量ＰＣＲ检测对临床应用复肝宁联合香菇多糖片联合治疗慢性无症状ＨＢｓＡｇ（＋）携带者　（ＡＳＣ）的临床指导意义。方法　采用Ｌｉｇｈｔ　Ｃｙｃｌｅｒ实时荧光定量ＰＣＲ仪对门诊８２例患者进行血清ＨＢＶ　ＤＮＡ检测；分别观察用　药后６个月和１２个月的ＨＢＶ　ＤＮＡ结果并进行统计学分析。结果　治疗后６个月和１２个月的有效率分别为１９．５１　、３６．５９　；　治疗６个月与治疗前对比差异有统计学意义（Ｐ％０．０１）；治疗１２个月与治疗前ＨＢＶ　ＤＮＡ阳性率对比差异更加显著；治疗１２个　月与治疗６个月后ＨＢＶ　ＤＮＡ阳性率对比差异也有统计学意义（Ｐ％０．０１）。结论　复肝宁联合香菇多糖片治疗ＡＳＣ有明显疗　效，其有效率随着用药时间的延长而增高，ＨＢＶ　ＤＮＡ定量检测灵敏度高、重现性好的特点为ｌ】盏床提供了良好的疗效指标。　关键词：聚合酶链反应；慢性无症状ＨＢｓＡｇ携带者；复肝宁／香菇多糖茵片　ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３—４１３０．２０１１．１４．０４９　文献标识码：Ｂ　１．２　治疗方法文章编号：１６７３～４１３０（２Ｏ１１）１４—１６２４　０２　复肝宁（广西桂西制药有限公司生产，国约　复肝宁主要由板蓝根、金银花、柴胡、牡丹皮、六神曲等中　药组成，具有舒肝健脾，清热利湿功能。香菇多糖系从人工培　准字Ｚ４５ｏ２ｏｏ９９），每日３次，每次６片。香菇多糖片（浙江家　养的伞菌科真菌香菇子实体中提纯得到的高分子葡聚糖，是一　种宿主免疫增强剂和Ｔ细胞定向辅助剂，可激活细胞免疫功　能并产生肿瘤坏死因子，从而增强机体清除病毒的能力　１。］。　笔者用复肝宁联合香菇多糖治疗慢性无症状ＨＢｓＡｇ（＋）　（ＡＳＣ）取得了较好的近期疗效，现报道如下。　１资料与方法　园药业有限公司生产，国药准字Ｚ２００２６２１５）每日３次，每次２　片。联合用药３月为一疗程。　１．３检测方法　使用瑞士罗氏公司Ｌｉｇｈｔ　Ｃｙｃｌｅｒ实时荧光定　量ＰＣＲ仪进行ＨＢＶ　ＤＮＡ检测，数据采用Ｌｉｇｈｔ　Ｃｙｃｌｅｒ　Ｖｅｒ—　ｓｉｏｎ３．５分析软件进行分析。ＨＢＶ　ＤＮＡ定量检测参照深圳匹　基公司乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＰＣＲ荧光检测试剂盒操作说明进　行。取阳性工作标准品（５×１０　ｃｏｐｙ／ｍＬ）进行１Ｏ倍梯度稀释　１．１一般资料　为在本院肝科门诊已确诊的ＡＳＣ　８２例，其　中男性４４例，女性３８例；年龄为３～６５岁。治疗前查肝功正　常，无临床症状和体征，ＨＢｓＡｇ为阳性，ＨＢＶ　ＤＮＡ≥１０。　ｃｏｐｙ／ｍＩ　。　４次，最低检出限可测到５×１０　ｃｏｐｙ／ｍＬ，实际临床可信灵敏　度为１０。ｃｏｐｙ／ｍＬ。重复性实验ＨＢＶ　ＤＮＡ定量结果显示，批　内ＣＶ＜２０　，批间ＣＶ＜３０　。　国际检验医学杂志２０１１年９月第３２卷第１４期Ｉｎｔ　Ｊ　Ｌａｂ　Ｍｅｄ，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ　２０１１，Ｖｏ１．３２，Ｎｏ．１４　２结　果　ＨＢＶ　ＤＮＡ≥１０　ｃｏｐｙ／ｍＬ者８２例；治疗后６个月后，ＨＢＶ　患者经６个月、１２个月治疗后分别进行ＨＢＶ　ＤＮＡ定量　ＤＮＡ≥１０　ｃｏｐｙ／ｍＬ者６６例（８０．４９　）；ＨＢＶ　ＤＮＡ＜１０　ｃｏｐ—　检测，结果见表１。治疗６个月、１２个月后ＨＢＶ　ＤＮＡ阳性率　ｙ／ｍＬ者１６例（１９．５１　）；治疗后１２个月后，ＨＢＶ　ＤＮＡ≥１０　与治疗前对比差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０１）；治疗１２个月　ｃｏｐｙ／ｍＬ者５２例（６３．４１％）；ＨＢＶ　ＤＮＡ＜１０　ｃｏｐｙ／ｍＬ者３Ｏ　与治疗６个月对比差异也有统计学意义（Ｐ＜０．０１）。治疗前　例（３６．５９　）；另有５例低于可检出限。　表１　ＨＢＶ　ＤＮＡ定量检测结果（　）　治疗前　治疗６个月　１５　治疗１２个月　１４　：无数据。　３讨　论　志，１　９９７，７（１）：５９　６２．　临床以ＨＢｓＡｇ（＋）、ＨＢＶ　ＤＮＡ≥１０　ｃｏｐｙ／ｍＬ者作为治　Ｅ２］张国强，盖美茹．杨进洲，等．拉米夫定联合香菇多糖治疗慢性乙型　疗对象；以ＨＢＶ　ＤＮＡ＜１０　ｃｏｐｙ／ｍＬ为治疗目的。从表１看　病毒性肝炎６２例近期疗效观察ＥＪ３．新医学，２００３，３４（４）：２３９—２４０．　出，经６个月和１２个月的治疗后ＨＢＶ　ＤＮＡ水平下降至有效　９　［３７　Ｈｏｎｋｏｏｐ　Ｐ，Ｎｉｅｓｔｅｒｓ　ＨＧ，ｄｅ　Ｍａｎ　ＲＡ，ｅｔ　ａ１．Ｌａｍｉｖｕｄｉｎｅ　ｒｅｓｉｓｔ—　范围的病例，分别占１９．５１　、３６．５９　，甚至还出现低于检测　ａｎｔｅ　ｉｎ　ｉｍｍｕｎｏｃｏｍｐｅｔｍｅｎｔ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　Ｂ　ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ　ａｎｄ　ｐａｔ—　范围的病例，说明该联合用药治疗方案有一定的疗效，且以１２　ｔｅｒｎｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｈｅｐａｔｏｌ，１９９７，２６（６）：１３９３—１３９５．　个月后的疗效更加明显。从临床观察，８２例患者中有１例在　［４］Ｎｉｅｓｔｅｒｓ　ＨＧ，Ｈｏｎｋｏｏｐ　Ｐ，Ｈａａｇｓｍａ　ＥＢ，ｅｔ　ａ１．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｏｒｅ　ｔｈａｎ　ｏｎｅ　ｍｕｔａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　Ｂ　ｖｉｒｕｓ　ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　ｇｅｎｅ　治疗过程中出现肝功能异常而住院（转氨酶升高，黄疸明显升　ａｍｉｖｕｄｉｎｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ［Ｊ］．Ｊ　Ｉｎｆｅｃｔ　Ｄｉｓ，　高），有８例转为慢性肝炎，其他无特殊情况发生。经１２个月　＂　孔　ａｒｉｓｉｎｇ　ｄｕｒｉｎｇ　ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ　ｌ１９９８，１７７（５）：１３８２—１３８５．　治疗后，仍有相当部分患者的ＨＢＶ　ＤＮＡ水平没有变化或变　Ｅｓ］陈洪涛，贺春民，孙爱民，等．荧光定量ＰＣＲ检测ＨＢＶ　ＤＮＡ［Ｊ］．　化不大，也有个别患者ＨＢＶ　ＤＮＡ水平升高，这类患者有的可　现代预防医学，２００３，３（３０）：３２７—３２９．　能在用此治疗方案之前已用过其他药物或ＨＢＶ　ＤＮＡ已发生　［６］朱映华，杨旭，王文龙，等．实时荧光定量ＰＣＲ法检测血清ＨＢＶ　变异而造成对该药物无反应。因此，不能确定所有的ＡＳＣ患　ＤＮＡ的临床意义ＥＪ］．湖南医学，２００１，１８（４）：２９９—３０１．　者均适宜使用该治疗方案。在临床治疗中发现，治疗明显有效　［７］牟玲，王佳贺，王英，等．干扰素治疗慢性乙型肝炎疗效与ＨＢＶ—　者多为首次治疗的患者。　ＤＮＡ水平研究［Ｊ］．中国医师杂志，２０００，２（７）：４３７—４３８．　定量检测血清中ＨＢＶ　ＤＮＡ水平为制定抗病毒治疗方案　［８３杨洁，关宇，王燕军，等．Ｌｉｇｈｔ　Ｃｙｃｌｅｒ实时监测ＰＣＲ定量分析血　和监控抗病毒疗效提供了重要的临床指标。。。］，也为判断乙型　清ＨＢＶＤＮＡ［Ｊ］．热带医学杂志，２００２，２（２）：１１８—１２０．　¨　肝炎患者传播ＨＢＶ的传染性强弱提供了直接依据。实时荧　（收稿日期：２０１１—０３—０７）　光定量ＰＣＲ兼具灵敏度高和重现性好的特点＿８］，可为指导临　床用药和观察分析疗效提供有效的帮助。　７　　—１　参考文献　［１］程良斌．香菇多糖的作用机理及临床应用［Ｊ］．中西医结合肝病杂　・经验交流・　胶体金与酶联免疫法检测乙肝表面抗原结果分析　张茂海　，吴建业　，陆玲娜　，宋立敏　（１．武汉大学基础医学院４３００７１；２．湖北省大冶市人民医院检验科４３５１００）　摘　要：目的　了解国产胶体金法快速检测乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ）的特异性和敏感性，及其与ＥｕＳＡ的一致性。方法　使　用２个厂家生产的胶体金法试纸条及１个厂家生产的ＥＬＩＳＡ试剂检测６００份标本的ＨＢｓＡｇ，对结果进行统计分析。结果　２个　生产厂家的胶体金法检测的阴、阳性结果与ＥＬＩＳＡ法总的一致性分别为９６．５　和９７．３　。阳性标本检测结果的一致性分别为　８６．７　和８９．４　。阳性标本的ｓ／ｃ在１０以下时，２种国产试纸条的检测结果与ＥＬＩＳＡ一致性均为０．０　。阴性标本的检测结果　的一致性均大于１００．０　。结论依据两法检测结果总的一致性较高而在临床推广使用胶体金法检测ＨＢｓＡｇ不合适。医疗机　构应选择敏感性较强的试剂进行ＨＢｓＡｇ筛选试验。　关键词：胶体金；　酶联免疫吸附测定；肝炎表面抗原，乙型；　结果分析　ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３—４１３Ｏ．２Ｏ１１．１４．０５０　文献标识码：Ｂ　文章编号：１６７３—４１３０（２０ｌ１）１４—１６２５—０２　乙型肝炎在中国是一种常见病，医疗机构在对患者进行手　工作前尽快搞清患者是否感染乙肝病毒，检验科便采用了胶体　术前、输血前、产前、侵人性检查前、注射疫菌前应尽可能搞清　金法快速检测乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ），结果部分患者在被进　患者是否已经感染乙肝病毒。不少医疗机构为了在进行这些　行上述工作后就会拿着快速检测的阴性结果和ＥＬＩＳＡ检测的