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Mini Protean III 电泳槽安装使用指南

2023-11-25 来源:好走旅游网


Mini Protean III电泳槽安装使用指南

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1.将短玻璃板放在带有边条的长玻璃板上,做成玻璃板夹心 2.将玻璃夹心放入灌胶架,短玻璃板冲前。两块玻璃板底部齐平 3.锁紧夹子(绿色),夹紧玻璃板夹心,做成灌胶模块

4.把灰色的橡胶垫放在灌胶架底部,将灌胶模块放在灰色的胶垫上,灌胶架上部有一透明夹子,

用此夹子夹住长玻璃板

5.灌入新鲜配置好的凝胶溶液(无须任何封边),如用梳子,水平放好梳子

常用聚丙烯酰胺凝胶电泳凝胶的配方见下

5.聚丙烯酰胺凝胶电泳凝胶的配方

配制Tris-甘氨酸SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液

不同体积(ml)凝胶液中各成分所需体积(ml)

溶液成分

10% 水

30%丙烯酰胺溶液 1.5 mol/L Tris (pH8.8) 10% SDS 10%过硫酸氨 TEMED 12% 水

30%丙烯酰胺溶液 1.5 mol/L Tris (pH8.8) 10% SDS 10%过硫酸氨 TEMED

1.621.30.050.050.002

1.91.71.30.050.050.002

3.342.50.10.10.0045

43.32.50.10.10.004

4.963.80.150.150.00610

5.953.80.150.150.006

6.6850.20.20.00815

7.96.750.20.20.008

8.2106.30.250.250.01

20

9.98.36.30.250.250.01

25

30 40 50 11.9 15.9 19.810 13.3 16.77.5 0.3 0.012

10 12.50.4

0.5

0.3 0.4 0.5

0.016 0.02

9.9 13.2 16.512 16 207.5 0.3 0.012

10 12.50.4

0.5

0.3 0.4 0.5

0.016 0.02

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6.凝胶凝固后,取出梳子,加入准备好的样品。把玻璃板

夹心(凝胶)从灌胶架上取下

7.把玻璃板夹心放入电泳架,短玻璃板面冲里,做成电泳模块。

8.把电泳模块完全插入电泳架

9.合上电泳架上的密封夹

注:如只跑一块胶,在另一侧放入随仪器配的挡板;在装配的过程中,会觉得很紧,为正常现象 10.将整个装配好的电泳架放入电泳槽

11.加入电泳液,内槽没过短玻璃板,外槽略低于内槽电泳液

12.盖上电泳槽的盖子,将电泳电极和电泳仪相连接,正极对

正极,负极对负极(红对红,黑对黑)

13.在电泳仪上设定电泳电压或电流,开始电泳。一般

SDS-PAGE可用200V恒压,大约35min能完成电泳。也可用低电压如120V等,时间较长但效果更好。具体条件根据样品摸索

14.电泳完成后,关闭电泳仪,拔出电极线

15.打开盖子,取出电泳模块,打开密封夹,取出玻璃板(凝胶)

16.轻轻用撬胶板(绿色)撬开玻璃板,让凝胶滑入缓冲液或

蒸馏水中

17.清洗电泳槽,玻璃板

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