SLE
2023-02-03
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维普资讯 http://www.cqvip.com 第23卷第3期 武汉大学学报(医学版) Medical Journal of Wuhan University Vo1 23.No.3 2002年7月 Jul,2002 SLE患者PBMC中IFN.丫和IL.6的表达 付继成 蒋正义 黄玉玲 徐 刚 武汉大学人民医院皮肤性病科武汉430060 摘要 目的:在单个细胞水平上研究系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)的细胞内细胞因子 IFN一 和IL-6的表达与疾病发病的关系。方法:用酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测患者PBMC的细胞内细胞因子 IFN一 和IL-6的表达情况。结果:活动期SLE患者PBMC中IL-6及Th /Th,比值与正常人相比显著升高(P<0.01)。 结论:在SLE患者PBMC中细胞因子IL-6升高,表达倾向于向 nk偏移, ,,rr}l2平衡在SLE发病机制中起重要作 用。 关键词 红斑狼疮,系统性;y干扰素;白介素6;酶联免疫斑点法 中图分类号R 593.24 系统性红斑狼疮(SLE)是一种有体液免疫功能 血清封闭10 min,0.1%皂素.PBS 100 l通透10 min FN一7 mAb 0.5 g或抗IL一6 mAb 0. 显著异常的自身免疫性疾病,其抗核抗体产生为T 后,每张片加抗I细胞依赖性 ,其作用机制尚未完全清楚,Th /Th 平衡与SLE的发病有关,但在单个细胞水平上对Th 疫斑点法在单个细胞水平上检测了PBMC内细胞因 25 ug(阴性对照用PBS代替),4℃反应过夜。PBS 冲洗后,每片加生物素标记的羊抗小鼠(二抗)50 l, 物50 l,室温反应30 min,坚固红显色,苏木精复染 1.4试剂 淋巴细胞分离液(d=1.077,上海第一 生化制品厂)10%FCS,RPMI 1640培养液(美国Gibco 公司)。抗人IFN一7和IL.6单克隆抗体(美国P&D公 n,链霉素卵白蛋白.碱性磷酸酶复合 细胞亚群平衡状态的研究还很少。笔者利用酶联免 室温反应30 mi 子的表达,了解Th /Yh:平衡在SLE发病机制中的作 后甘油明胶封片。用,现报告如下。 1材料与方法 1.1 研究对象 2000年5月~2001年5月我院门 诊病人中20例初诊未经治疗的活动期SLE患者。 司),生物素一链霉素卵白蛋白/碱性磷酸酶试剂盒(美 国Lab Vision公司),多聚甲醛、皂素、PMA、离子霉 均为女性病人,年龄14~38岁,均符合ARA1982修 订的SLE诊断标准。活动性判断按Bombardier氏方 法。所有患者均无其它合并性疾病。正常对照组为 我院学生,共10例,均为女性,年龄l8~32岁。 1.2 PBMC的分离和培养PBMC按密度梯度离心 素,莫能菌素(Sigma公司)。 1.5统计学处理 结果用 ±s表示,均数间采用t 检验,P<0.05认为有显著性。 2 结果 1 PBMC细胞内细胞因子着色特征 IFN一7代表 法分离,以2×10 /ml的密度悬浮于含有10%胎牛血 2.L.6代表T 。细胞因子(IFN一7,IL一6)染色阳性 清(PCS)的RPMI一1640培养液内,在24孔培养板 Th ,I(NUNC,丹麦)上每孔加1 m】细胞悬液,PMA 10 ng/ 细胞在高倍镜下或油镜下,可见细胞核周围明亮的 红色颗粒状斑点,阴性细胞无着色,呈均质状。每张 涂片数1 000个淋巴细胞,并计数其中的阳性细胞的 m】,离子霉素1 mol/L,莫能菌素3 t ̄mol/L,37℃,5% CO,条件下培养6 h。 1.3细胞内细胞因子染色 采用张浩 的ELISPOT 百分率。2 PBMC中的Yh,/Yh 阳性率及其比值 正常对 法,收集培养细胞,Hank液洗2次,用离心涂片机甩 2.成细胞涂片,4%多聚甲醛固定30 rain,10%正常小牛 照组如不经PMA+离子霉素刺激,涂片上无IFN一7 课题来源:中华医学会皮肤病学分会1997年度科研基金资助 作者简介:付继成,男。1967~,硕士,讲师,主要从事结缔组织病研究 维普资讯 http://www.cqvip.com 武汉大学学报(医学版) 第23卷 或IL一6阳性细胞,未经刺激培养的患者PBMC中有 现,SLE患者PBMC中IFN—y阳性细胞的比例较正常 18例出现IL一6阳性细胞(阳性率为1%~6.6%),经 人组减少,但差异无显著性(P>0.05),陈子强等报 6 h刺激培养后,患者组IL.6阳性率明显高于正常对 道,SLE患者PBMC中IFN一7 mRNA的表达减少 , 照组[平均(37.6土7.3)%VS(3.6土2.1)%],P<0. Gerez等报道,SLE患者中IFN一7表达增高 ,这种差 01,IFN—y阳性率差异无显著性。Th2/Th 比值明显 异的存在可能与患者合并感染的情况、研究方法的 升高[T(7.6土4.3)VS(0.35土0.8)],P<0.01,见表 不同以及使用的刺激剂不同有关。笔者还发现,Th々/ 1 111.比值患者较正常人明显升高,这与IL一6表达水平 表1 SLE患者与正常人T ̄/Th。阳性率及比值(;±s) 升高有关,表明Th /Th。细胞因子网络朝 rh2偏移。 总之,上述结果表明,初诊的活动期SLE患者 PBMC中Th2细胞因子IL一6表达升高,111。细胞因子 IFN—y无明显变化,Th /Th。比值升高,表明SLE有 患者组vs正常组・ P<0.Ol, P>0.05 Th /Th。细胞因子网络的改变,朝111 偏移,这可能与 SLE的发病机制有关。 参考文献 1 Reeves WH,Satoh M,Wang JS,et a1.Antibodies to DNA,DNA— binding proteins and histamines.Rheum Dis Clin North AM, 1994,20:1 3讨论 SEE是一种自身免疫性疾病,B淋巴细胞在各种 内外因素的作用下,活化产生大量的自身抗体,并与 DNA结合形成免疫复合物,导致广泛的组织病理损 伤。 朱平,王彦宏,等.类风湿关节炎患者Th2/Th.细胞 B细胞产生自身抗体为T细胞依赖性,T细胞对 2张浩,B细胞的作用主要通过它们所分泌的细胞因子,111, 因子平衡的研究.中华风湿病学杂志,2000,2,72 许桦,许晋.系统性红斑狼疮患者外周血单个核 主要分泌IL一4、IL一6、IL一10等,IL-6由单核巨噬细胞、 3王美美,T细胞、B细胞、肥大细胞、成纤维细胞等分泌,刺激 B细胞分化成熟,并分泌免疫球蛋白 。本研究表 明,SLE初诊患者未经刺激的PBMC中,20例中有18 细胞分泌白细胞介素.1O干扰素一7水平的研究.中华风湿 病学杂志,2002,6(1):28 4陈志强,李子仁,范江,等.SLE患者外周血单个核细胞中 IL-6 IL-IO表达研究.中国皮肤性病学杂志,2000,14(1):4 5陈志强,李子仁,范江,等.系统性红斑狼疮患者外周血单 一例可发现IL一6阳性细胞,涂片上阳性细胞的比例为 1%~6.6%,陈子强等发现活动期SLE患者PBMC 中IL一6 mRNA表达水平升高 ,本研究结果证实了 他们的发现。经刺激后,患者IL-6细胞内水平进一 步增高,说明IL-6可能促进自身抗体的产生,与SLE 的致病密切相关。111.主要分泌IL-2、IFN—y和TNF, 其中以IFN一7为代表。IFN.7主要由淋巴细胞产生, 核细胞中111.型细胞因子的表达..中华皮肤科杂志, 1999,32(1):3 6 Gerez L,Shkolnik T,Hirschmann A,et a1.Hyperinducible ex. pression on inter--feron--gamma gene and its supression in systemic lupus erythematosus.Clin Exp Immunol,1997,109:296 主要介导细胞免疫反应,通过激活单核巨噬细胞、淋 巴细胞和自然杀伤细胞来调节免疫反应。本研究发 (2001.09.24收稿) Expression of IFN一丫and IL一6 in PBMC of Patients with Systemic Lupus Erythematosus Fu Jicheng,Jiang Zhengyi,Huang Yuling,et al Department of Dermatology,Renmin Hospital,Wuhan University,Wuhan 430060,China Abstract Objective:To study the expression of IFN一7 and IL一6 in the peripherla blood mononuclear ceils of systemic lupus 维普资讯 http://www.cqvip.com 第3期 付继成,等.SLE患者PBMC中IFN.),和IL-6的表达 erythematosus(SLE)patients with pathogensis at single-leve1.Methods:Peripheral blood mononuclear ceils(PBMC) from 20 patients with SLE stimulated for 6 hours with phorbol myristate(PMA)plus ionomycin in the presence of monen— sin.Ceils were stained for intracellular cytokines such as IFN一7 and IL一6 by enzyme linked immunospot assay(ELLS— POT).Results:The expression of IL一6 and Th2/Thl ratio were signiicafntly increased in patients compared with 10 healthy individuals(P<0.01).Condusion:The increased expression of IL一6 and a shift toward Th2 Cytokine profile is observed in the PBMC of SLE patients.Thl/Th2 cytokine balance has important implication in the pathogensis. Key Words lupus erythematosus,systemic;IFN一7;IL一6;enzyme linked immunospot assay (上接第195页) involved in sperm-induced fertilization.Seience,1993,261:484 7 Li C,Peoples RW,IA册,Weight FF.Zn“potentiayes exci tatory action of ATP on malllmallan neuI_(】ns.Proc Nail Acad Sci USA,1993,90:8 264 6杨青,李之望,魏劲波.非洲爪蟾卵母细胞上GABA。和 GABA 受体介导的电流反应.生理学报,2001,53(4),271 ~275 (2001.o7.2O收稿) Comparison between the Responses Mediated by Endogenous and Expressed ATP--and GABA--Receptors in Xenopus Laevis Oocytes Yang Qing,Xu Yi,Li zhiWang,et al Department of Physiology,School of Medicine,Wuhan University,Wuhan 43007 1,China Abstract Objective:To sludy the comparison between the responses mediated by endogenous and expressed ATP—and GABA— receptors in Xenopus laevis oocytes.Methods:The two-electode volrtage—clamp technique was used.Results:(1)Zn“ (10 mol/L)could potentiate the current responses mediated by expressed P2X2 and P2X4 receptors in oocytes;(2) GABA—activated current in the oocytes which were injected mRNA of chicken brain could be blocked by bicucuiline (10一 mol/L),a selective GABA^receptor ntaagonist;(3)GABA—activated current mediated by pl subunit of human ret— ina could not be blocked by bicucuiline(10 mol/L),but it could be abolished by picrotoxin(10 mol/L);(4)there were three types ATP—activated current in the follicular oocytes,while there was only one type GABA.activated current: (5)there were no responses mediated by ATP or GABA receptors in the defoilicular oocytes.Conclusion:There exist endogenous GABA^and GABAc receptors and ATP receptors in the follicular oocytes.The current responses mediated by exogenous GABA receptors and P2x2 and P2X4 receptors are diferent from that mediated by endogenous GABA receptors nd A,aI’P receptors. Key Words xenopus laevis oocyte;endogenous ATP receptor;endogenous GABA receptor