改良抗酸染色操作程序
1 目的
改良传统抗酸染色方法，以增加抗酸杆菌检出的阳性率。
2 原理
由于抗酸杆菌含有分枝菌酸，可与石碳酸复红牢固结合。因其不允许被石碳酸复红染上色的类脂质外溢，所以抗酸杆菌虽经盐酸酒精脱色，但仍能保持红色。而非抗酸杆菌则被染为蓝色。
改良抗酸染色法在标本制备及染色方面的改进，极大地提高了细胞内外抗酸杆菌检出的阳性率。尤其是细胞内抗酸杆菌的检出，有助于临床判定现症或潜伏感染。
3 仪器
3.1 器材
3.1.1 FMU-6型细胞涂片离心仪
3.1.2 FMU-6型细胞涂片沉淀器
3.1.3 显微镜。
3.1.4 载玻片
3.2 试剂
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3.2.1 0.3 % TritonX-100萋纳石碳酸复红溶液
碱性复红乙醇饱和溶液 10 ml
5 % 石碳酸溶液 90 ml
TritonX-100 0.3 ml
3.2.2 脱色剂
浓盐酸 20 ml
95 % 乙醇 80 ml
3.2.3 复染液（吕弗勒美篮液）
美篮乙醇饱和溶液 30 ml
10 % 氢氧化钾 0.1ml
蒸馏水 100 ml
3.2.4 0.3 % TritonX-100（曲拉通）溶液
TtritonX-100 3 ml
蒸馏水 1000 ml
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3.2.5 APES（3-氨丙基-3-乙氧基甲硅烷）工作溶液
现用现配，用丙酮1:50稀释。
3.2.6 固定液（pH 6.6）
丙酮 45ml
甲醛 25ml
磷酸氢二钠 20mg
磷酸二氢钾 100mg
蒸馏水 30ml
3.2.7 0.1M 磷酸盐缓冲液（PH7.4）
Na2HPO4·12H2O 26.46 g
NaH2PO4·2H2O 2.664 g
NaCl 40 g
KCl 1.8 g
蒸馏水 900 ml
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4 操作步骤
4.1 载玻片处理
将酸碱处理后的载玻片浸泡于APES工作溶液30秒，取出冲洗，晾干，备用。
4.2 标本收集
4.2.1 将载玻片和滤纸插入FMU-6型细胞涂片沉淀器中，滤纸上的孔必须与FMU-6型细胞涂片沉淀器上
的孔对准，并旋紧FMU-6型细胞涂片沉淀器。
4.2.2 在FMU-6型细胞涂片沉淀器的沉淀管中加入0.5 ml 脑脊液（若脑脊液呈浑浊或血性，应先根据情况稀释后再加入）。
4.2.3 将FMU-6细胞涂片沉淀器放入FMU-6细胞涂片离心仪的挂钩上， 盖上离心仪的盖子，离心3 ~ 5 分钟。待脑脊液中的有形成分完全沉淀到玻片上后，取下涂片固定。
4.3固定
将涂片浸泡于固定液中30秒，水洗，晾干。
4.4 染色步骤
4.2.1 固定后的涂片浸泡于0.3 % TritonX-100溶液30分钟，0.1M磷酸盐缓冲液洗3次，晾干。
4.2.2 初染 涂片加0.3 % TritonX-100萋纳石碳酸复红溶液，染5分钟，水洗。
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4.2.3 脱色 脱色剂脱色约1分钟，轻轻摇动玻片，无红色脱落为止，水洗，晾干。
4.2.4 复染 复染液复染 0.5 ~ 1分钟, 水洗。自然干燥后镜检。
5 结果判断
抗酸杆菌呈红色，非抗酸杆菌呈蓝色。
6 质控
6.1 质控菌株及质控频率 利用铜绿假单胞菌ATCC27853、结核杆菌ATCCH37RV做阴阳性质控对照，每日及更换染液批号时质控。
6.2 质控方法 参照麦氏比浊仪或麦氏比浊管，将标准菌株配制菌液3 MCF浓度单位，高压灭菌后储存
冰箱备用。或将高压后的菌液制成均匀的图片，放置室温备用。
7 注意事项
7.1 凡需进行抗酸染色的标本，每份标本只允许单独涂在一张载玻片上，不得将两份或两份以上的标本涂在同一张载玻片上，以免染色过程中因冲洗菌体脱落，致阴阳性结果混淆。
7.2 抗酸染色切勿使用染色缸，以免着色的抗酸菌可能自涂膜上脱落而浮游于染色液或脱液缸中，连续使用造成假阳性的出现。染色后印干用的滤纸，不得重复使用。
7.3 脱色时间需根据涂片薄厚而定，厚涂片可适当延长，以几乎无红色为度。
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8 临床意义
针对结核病、麻风病的细菌检查，初步诊断。奴卡菌可呈弱抗酸性，有利于鉴定细菌。
9 安全防护措施
9.1 为了防止交叉感染，标本应先高压灭菌后再涂片染色，气管刷片标本，应在紫外线灯下照射30分钟进行染色镜检。
9.2 镜检后的玻片均浸泡在含有有效氯1000 mg / L 的消毒液。
10 参考文献
10.1 周庭银编著.临床微生物学诊断与图解. 第二版. 上海. 上海科学技术出版社，2007
10.2 叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程. 第三版. 南京. 东南大学出版社，2006
10.3 张秀珍，朱德妹主编. 临床微生物检验问与答. 北京. 人民卫生出版社，2008年7月.
11 支持文件
微生物室室内质量控制管理程序
12 记录表格
抗酸染液质控记录表
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