一、单选题
1.获得纯净培养物的关键是（ ）
A.将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌 B.接种纯种细菌
C.适宜条件下培养 D.防止外来杂菌的入侵 2.高温灭菌的原理是（ ）
A.每种微生物生长的最适温度是一定的 B.微生物对高温环境不适应
C.高温破坏了细胞内的蛋白质、核酸，影响其生命活动 D.高温降低了环境中氧的浓度
3.将配制好的培养基进行灭菌应用（ ）
A.灼烧灭菌 B.高压蒸汽灭菌 C.干热灭菌 D.煮沸灭菌 4.产生标准形态菌落的细菌的最初数目和培养基分别是（ ） A.一个细菌、液体培养基 B.许多细菌、液体培养基 C.一个细菌、固体培养基 D.许多细菌、固体培养基 5.灭菌的标准是（ ）
A.杀死所有的病原微生物 B.杀死所有的微生物 C.杀死所有微生物的细胞、芽孢和孢子 D.是病原菌不生长 6.对不同微生物的培养过程中正确的是（ ） A.细菌培养时将PH调至酸性 B.培养乳酸杆菌时在培养基中不需要添加维生素 C.霉菌培养时将PH调至中性或微酸性 D.培养厌氧微生物时则需要提供无氧环境条件 7.不同培养基的具体配方不同，但一般都含( )
A．碳源、磷酸盐和维生素 B．氮源和维生素
C．水、碳源、氮源和无机盐 D．碳元素、氧元素、氢元素、氮元素8．下列常用的无菌操作中错误的是 ( )
A．用酒精擦拭双手 B．用氯气消毒水源 C．实验操作应在酒精灯火焰附近进行 D．玻璃器皿(吸管、培养皿)可用酒精擦拭 9．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是( )
A．计算、称量、倒平板、溶化、灭菌 B．计算、称量、溶化、倒平板、灭菌 C．计算、称量、溶化、灭菌、倒平板
1
D．计算、称量、灭菌、溶化、倒平板
10.夏天，食品易发生腐败，其原因是空气中微生物在食品上大量生长繁殖的结果，而放入冰箱中贮藏的食品，其腐败的速度比在自然环境中慢得多，对其最好的解释是（ ） A．低温下，食品中物质的代谢速度减慢 B．低温下，微生物的代谢速度减慢
C．隔绝空气，微生物和食品代谢速度均减慢 D．缺乏光照，微生物的合成作用速度减慢 11.下列属于菌落特征的是（ ）
①菌落的形状 ②菌落的大小 ③菌落的多少 ④隆起程度 ⑤颜色 ⑥有无荚膜A.①②③④ B.①②④⑤ C.②③④⑥ D.①②③④⑤⑥ 12、尿素是尿素分解菌的氮源，因此在配制培养基时( ) A、葡萄糖在培养基中越多越好
B、尿素分解菌有固氮能力，故培养基中只需无机氮 C、尿素在培养基中越少越好
D、尿素分解菌无固氮能力，故培养基中的尿素为化合态氮
13、突变型面包霉常需要在基本培养基上添加适当的氨基酸才能生长。现在用两种氨基酸依赖型红色面包霉突变株a和b，分别接种到下面的6种培养基上，两种突变株都不能在1、3、5号培养基上生长，a、b可以分别在2、4和2、6号培养基上生长。培养基成分如下表，关于突变株a和b分别对于A-J中氨基酸需求的说法正确的是 （ ）
培养基 添加氨基酸 1 2 3 4 5 GHIJ 6 EHGJ BCDE BEFG CFHI DEFI A．两种突变株对氨基酸的需求是相同的 B．两种突变株都需要G氨基酸才能生长 C．两种突变株必须同时供应4种氨基酸才能生长
D．两种突变株都能在由4、5号两种培养基组成的混合培养基中生长
14、科学家在被称为“九北”(东太平洋赤道附近的北纬)的漆黑的海底深处的火山口附近发现了“人丁兴旺”的生物村落。这里的细菌能把有毒的废料当“早餐”，能利用硫化氢、铁、氢和其他一些化学物质来产生葡萄糖，从而维持自己的生命活动。这些细菌的新陈代谢类型是( ) A．光能自养型
B．化能自养型
C．光能自养和化能自养的混合型 D．异养型 15、能排除培养基是否有杂菌污染的方法是( ) A、将未接种的培养基放在实验桌培养 B、将未接种的培养基放在窗台培养 C、将未接种的培养基放在恒温箱中培养 D、将已接种的培养基放在恒温箱中培养
16、给含氨(NH3)较多的土壤中耕松上，有利于提高土壤肥力，其原因是（ ）
2
A．改善土壤通气性，根呼吸加强 B．增加土壤中N2的含量
C．改善土壤通气性，硝化细菌繁殖快，有利于土壤中硝酸盐增加 D．促进氮的扩散 17、在光亮处用同一培养液分别培养单细胞绿藻和酵母菌，结果如图。原因是 （ ）
A.培养液中缺少无机盐 B.培养液中缺少O2 C.培养液中缺少CO2 D.培养液中缺少有机物
18．用来判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是（ ） A．未接种的选择培养基 B．未接种的牛肉膏蛋白胨培养基 C．接种了的牛肉膏蛋白胨培养基 D．接种了的选择培养基 19、请选出下列正确的操作步骤（ ） ①土壤取样
②称取10g土壤取出加入盛有90ml无菌水的锥形瓶中 ③吸取0.1ml进行平板涂布
④ 依次稀释至101、102、103、104、105、106、107稀释度
A、① ② ③ ④ B、① ③ ② ④ C、① ② ④ ③ D、① ④ ② ③
二、多选题
20.有关平板划线操作正确的是（ ）
A.使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌 B.将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红 C.将烧红的接种环在火焰旁边冷却
D.打开含菌种的试管需要通过火焰灭菌，取出菌种后需要马上塞上棉塞 E.将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线即可 F.接种环在平板上划线位置是随机的
G.在挑取菌种前和接种完毕后均要将试管口通过火焰 H.最后将平板倒置，放入恒温箱中培养 21.在涂布平板操作时错误的是（ ） A．首先将菌液进行一系列的梯度稀释 B.将涂布器在酒精灯火焰上灼烧，直到烧红
C.将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃待酒精燃尽后，冷却8～10 s再用 D.取少量菌液滴加在培养基表面
3
E.涂布时可转动培养皿，使涂布均匀
F．然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面 G．再放在适宜条件下培养 H．结果都可在培养基表面形成单个的菌落 22、有关培养基配制原则叙述正确的是（ ） A．异养微生物的培养基至少要有一种有机物 B．任何培养基都不能没有有机物
C、任何培养基都必需含有水、 碳源 、 氮源、无机盐及生长因子 D．配制培养基时，要注意各种营养物质的浓度和比例 E、碳源和氮源必需具有一定的比例，且碳源比氮源要多
F、微生物的生长除受营养因素影响外，还受到PH、氧、渗透压的影响 G、营养物质的浓度越高越好
23、在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应106培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。A同学的结果产生原因可能有（ ） A、由于土样不同 B、由于培养基污染 C、由于操作失误 D、没有设置对照
24、通过选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微生物。在缺乏氮源
的培养基上大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌；在培养基中加入10％酚可以抑制细菌和霉菌。利用下述方法能从混杂的微生物群体中分别分离出 （ ）
A．大肠杆菌 B．霉菌 C．放线菌 D．固氮细菌 25、 下列说法错误的是（ ）
A同一种物质不可能既作碳源又作氮源。 B凡是碳源都能提供能量。 C除水以外的无机物仅提供无机盐。 D无机氮源也能提供能量。 26、使用选择培养基培养微生物的目的是（ ）
A、除去其他微生物 B、通过表现特殊性状，与其他微生物相区别 C、使需要的微生物大量繁殖 D、可以增加要培养的微生物的浓度 27、设置对照实验的要求是（ ）
A、控制单一变量 B、其他条件相同 C、其他条件要适宜 D、只要其他条件相同就可以
28、发酵工程的第一个重要工作是选择优良的单一纯种。消灭杂菌，获得纯种的方法包括（ ） ．．A．根据微生物对碳源需要的差别，使用含不同碳源的培养基 B．根据微生物缺乏生长因子的种类，在培养基中增减不同的生长因子 C．根据微生物遗传组成的差异，在培养基中加入不同比例的核酸 D．根据微生物对抗菌素敏感性的差异，在培养基中加入不同的抗菌素 三、非选择题
4
29．无菌技术主要通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。实验室中常用的消毒方法
有 消毒法和 消毒法。常用的灭菌方法有 灭菌、 灭菌和 灭菌。
30.不同的培养基一般都含有 、 、 和 等营养要素，另外还要有适宜的外界条件，如 、 和 。 31．如下表所示为某微生物培养基的配方，请回答： ⑴依物理性质，该培养基属于 培养 成分 基。依用途划分，则属于 培养基。 NaNO3 ⑵根据培养基原料，所培养微生物的同化作K2HPO4 用的类型是 ，培养的微生物可能是 。
⑶该培养基中的碳源是 。不论何种培养基，在各成分都溶化后分装前，要进行的是 。
（4）细菌种群进化过程中，其主要作用的变异来源是（ ）
A．环境条件 B．基因重组 C．基因突变 D．染色体变异
32.某同学在做微生物实验时，不小心把圆褐固氮菌和酵母菌混在一起，请你设计一实验。实验目的：分离得到圆褐固氮菌和酵母菌。
（1）实验原理： ；（2分） （提示：请根据方法步骤写实验原理） （2）材料用具：略 （3）方法步骤：
①制备A、B两种培养基：用于培养圆褐固氮菌的A培养基特点是 ，用于培养酵母菌的B培养基特点是添加了 。
②调节培养基pH：A培养基pH约为 ；B培养基pH约为 。 ③灭菌：在高压蒸汽灭菌开始以前，必须要将灭菌锅 。 ④搁置斜面：搁置的长度不超过试管的 。 ⑤接种：分别向A、B培养基中接种混合菌。 ⑥培养。 （4）实验结果：略
33、下表为一种营养液的配方，试根据表中的内容作答：
（1）若用于植物培养，在培养的初期，植物出现萎蔫现象，最可能的原因是_ _____。 可采用的最简单的有效措施是__________。
（2）要使植物正常生活，培养液中至少还应加入_____种必需元素。
（3）培养一段时间后，检测到培养液中留存的NO3-较少而Ca2+等离子较多，这一现象与细胞膜的_________________有关。
（4）此培养液若用于培养微生物，则可以培养的微生物代谢类型是
5
含量 成分 3 g 1 g FeSO4 (CH2O) 青霉素 含量 0.01 g 30 g 1 000 ml 0.1万单位 琼脂 15 g H2O g MgSO4·7H2O 0.5 __________。培养液中含有的营养物质有____________类。表中各成分重量确定的原则是 ，若用于菌种的鉴定，应该增加的成分是 。 34、有人送来一支芽孢杆菌，其中一部分芽孢杆菌有抗青霉素能力，另一部分没有抗性。 请你把对青霉素有抗性的芽孢杆菌分离出来。（1）现有条件：无菌牛肉膏培养基两个，无菌接种台,接种工具齐备,医用青霉素两支。请你填写有关的实验操作及实验分析。
①取两个培养基，分别标号A、B，A、B培养基分别加入___________，加入过程一定要 ______________操作。②向A培养基中接种__________________。③接种后，将A培养基放入恒温箱培养两天。④从____________挑取生长良好的芽孢杆菌，接到B培养基中。⑤接种后，将B培养基放入恒温箱内培养两天，即可获得较多抗青霉素芽孢杆菌。第④⑤两个步骤的目的是_________________。
35、现有①金黄色葡萄球菌、②酵母菌、③硝化细菌、④圆褐固氮菌、⑤乳酸菌等微生物混合在一起的液体。请设计实验，利用改变培养基成分等培养条件，将它们分离开来（它们不能在同一种培养基上生长），并说明注意事项。
例如：①用加高浓度食盐的培养基，加少许液体，分离金黄色葡萄球菌。 ①培养基加______________，加少许液体，培养，可分离酵母菌。 ②培养基中只加NH3·H2O，加少许液体，培养，分离______________。 ③用______________的培养基，加少许液体，培养，分离圆褐固氮菌。
④培养基加少许液体，密闭培养，分离出_____ _________，再移接到酸性培养基培养，分离______________注意培养温度25℃～37℃，调节pH，用固体培养基。 36、下面是最早发现青霉素的科学家弗莱明所进行的探索过程。
观察及对问题的认识：细菌培养基中，偶然生出青霉菌，在其周围细菌没有生长。为什么出现这种现象？ 假设：
进行实验：把青霉菌放在培养液中进行培养，然后观察使用这种培养液对细菌生长的影响。 结果：这种培养液阻止了细菌的生长和繁殖。 结论：
弗莱明在持续的研究中分离出了这一物质，分析出它的特征，并将它命名为青霉素。 说明：①在实验室里培养细菌常用琼脂配制成凝胶，平铺在培养皿里作为培养基（图2—9A）。②某细菌需要添加特殊培养液才能正常生长（图2—9B）。
请回答：
（1）作为这一实验的下列假设中，最为恰当的是（ ）
6
A.青霉菌能产生有利于人类的物质 B.青霉菌污染了细菌生长的培养基 C.青霉菌可能吞噬了细菌
D.青霉菌可能产生了不利于细菌繁殖的物质
（2）为了证明青霉素确实是由青霉菌产生的而不是培养液和培养基中的其他物质产生的，则应设计对照实验，其实验方法是 。
（3）若对照组实验结果为 ，则充分证明青霉素确实能产生可阻止细菌繁殖的物质。
37．请分析回答下列有关生物技术实践方面的问题：
(1)微生物培养基一般都含有：水和无机盐以及 (2)在微生物接种过程中，试管口需要通过酒精灯火焰，其目的是 。 (3)某同学用稀释涂布平板法测定一个土壤样品中的细菌数(取10g该土壤加90ml无菌水制成稀释液)。在对应稀释倍数为106的培养基中统计3个平板上的菌落数分别为：121、
212、256．则每克该土壤样品中的菌落数为 。 培养基上、挑选 。
(5)植物组织培养技术基本操作的正确顺序是 。
①外植体消毒 ②制备MS培养基 ③接种 ④培养 ⑤栽培 ⑥移栽 A．①→②→③→④→⑤→⑥ B．②→①→③→④→⑤→⑥ C．②→①→③→④→⑥→⑤ D．①→②→③→④→⑥→⑤
(6)在植物组织培养过程中，往往需要使用植物激素启动细胞分裂，人为地控制细胞的 和 。
(7)通过电泳法分离提纯蛋白质时，影响蛋白质迁移速率的因素是蛋白质分子的带电性质、 分子大小以及 。
(8)PCR反应过程中需要DNA聚合酶参与的是 阶段。 (9)根据果胶酶在果汁生产中的作用的系列实验结果回答下列问题： ①能正确表示温度对果胶酶活性影响的曲线是 ②能正确表示pH对果胶酶活性影响的曲线是
③在原材料有限的情况下，能正确表示相同时间内果胶酶的用量对果汁产量影响的曲线 是 。
(4)分离分解尿素的微生物的实验流程包括：土壤取样、梯度稀释、样品涂布到
专题2 微生物的培养与应用答案
7
1～20 DCBCC DCDCB BDDBC CDC C
20～28 BCGH BH ADF ABC BCD ABC ABD ABC ABD ABC 29.化学药剂 紫外线 灼伤 干热 高压蒸汽 30.水 无机盐 碳源 氮源 适宜的温度 PH 氧气的有无 31．提示：本题考查培养基的配制及类型，选择培养基的配制。
⑴固体 ；选择 ⑵异养型；酵母菌或霉菌 ⑶(CH2O) 先调整pH （4） C
32. （1）圆褐固氮菌是自生固氮菌，能在无氮培养基上生长繁殖而酵母菌不能；青霉素不影响酵母菌等真菌的生长繁殖，而会抑制圆褐固氮菌生长；酵母菌培养基pH5.0~6.0，圆褐固氮菌培养基pH6.5~7.5
（3）①无氮 青霉素 ②6.5~7.5 5.0~6.0 ③冷空气排出 ④1/2 33、（8分）
（1）培养液浓度过高、加水稀释 （2）4 （3）选择透过性 （4）自养型微生物、3、依据微生物的生长需要确定、琼脂 34、（5分）
①青霉素、无菌 ②选来的菌种 ③A培养基的菌落
④获得纯度高的抗青霉素芽孢杆菌（分离出对青霉素有抗性的芽孢杆菌）。 35、（5分）
①培养基加青霉素，加少许液体，培养，分离酵母菌（1分） ②培养基中只加NH3·H2O，加少许液体，培养，分离硝化细菌（1分） ③用不含氮的培养基，加少许液体，培养，分离圆褐固氮菌（1分）
④培养基加少许液体，密闭培养，分离出酵母菌和乳酸菌，再移接到酸性培养基培养，分离乳酸菌（或答划线法分离开乳酸菌和酵母菌也可）（1分）注意培养温度25℃～37℃，调节pH，用固体培养基（1分）
36、（6分）（1）D（2）对照组的培养液和培养基中均不加入青霉菌，观察细菌的生长繁殖 37．(15分)O 0.14mol/L NaCI溶液 ③促性腺激素
(1)碳源和氮源 (2)灭菌 (3)1．96×109 (4)选择 菌落 (5)C (6)脱分化 再分化 (7)带电荷量和分子形状 (8)延伸 (9)①乙 ②乙 ③丙
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