华南师范年夜学实验陈说之南宫帮珍创作
创作时间：二零二一年六月三十日 液相色谱分析混合样品中的苯和甲苯
一、实验目的
1、掌握高效液相色谱定性和定量分析的原理及方法；2、了解高效液相色谱的构造、原理及把持技术. 二、实验原理
高效液相色谱由储液器, 泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部份组成, 储液器中的流动相被高压泵打入系统, 样品溶液经进样器进入流动相, 被流动相载入色谱柱内, 由于样品溶液中的各组分在两相中具有分歧的分配系数, 在两相中作相对运动, 经过反复屡次的吸附—解吸的分配过程, 各组分在移动速度上发生较年夜的分歧, 被分离成单个组分依次从柱内流出, 通过检测器时, 样品浓度被转换成电信号传送到记录仪.
三、主要仪器和试剂
主要仪器：岛津液相色谱仪(LC-10AT)[配有紫外检测器,
Phenomenex ODS 柱]；10μL微量注射器
创作时间：二零二一年六月三十日
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试剂：苯标准溶液：10.0μL/mL ；
甲苯标准溶液：10.0μL/mL； 苯、甲苯混合标准溶液：1 ；
甲醇：80% ； 苯和甲苯混合待测溶液；
四、实验步伐
1、标准溶液的配制系列
用100μL的微量注射器分别量取10μL、20μL、 50μL 、100μL的苯和甲苯的混合标准溶液（10.0μL/mL）, 再分别加入90μL、80μL、50μL 、0μL甲醇将其稀释, 作为待测液, 其浓度分别为1μL/mL 、2μL/mL 、5μL/mL 、10μL/mL
2、色谱条件优化
①按把持规程开机, 并调好色谱条件, 使仪器处于工作状态.控制流动相流速为甲醇：0.8mL/min、水：0.2 mL/min；柱温30℃；检测波长254nm；观察记录保管时间, 通过软件分析两峰分离效果.
②改变色谱条件, 控制流动相流速为甲醇：0.95mL/min、水：0.05 mL/min；柱温30℃；检测波长254nm；观察记录保管时间, 通过软件分析两峰分离效果.
创作时间：二零二一年六月三十日
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③通过观察两种色谱条件下的峰分离效果, 选择最佳的色谱条件.若还不能到达最佳的分离效果, 可以再设定分歧的色谱条件, 然后根据峰分离效果, 选择最佳的色谱条件.
3、苯、甲苯定性分析
在最佳条件下, 待基线走稳后, 用10μL微量注射器分别进样5μL苯和甲苯混合待测溶液, 5μL苯标准溶液（10.0μL/mL）和5μL甲苯标准溶液（10.0μL/mL）(微量注射器用甲醇润洗3～5遍), 观察并记录色谱图上显示的保管时间, 确定苯和甲苯的峰.
4、苯、甲苯定量分析
最佳条件下, 待基线走稳后, 用10μL微量注射器分别进样1.0μL/mL 、5μL.观察并记录各色谱图上的保管时间和峰面积.绘制苯和甲苯混合标准溶液峰面积与相应浓度的标准曲线. 5、苯和甲苯混合待测溶液分析
最佳条件下, 待基线走稳后, 用10μL微量注射器进样苯和甲苯混合待测液5μL, 观察并记录各色谱图上的保管时间和峰面积.根据峰面积在工作曲线上查出苯和甲苯待测液的浓度, 并计算试样中苯和甲苯的含量.
五、实验数据及分析
创作时间：二零二一年六月三十日
创作时间：二零二一年六月三十日
高效液相色谱数据陈说
一、色谱条件优化
2.0μV(x100,000)色谱1.595% 1.080% 0.5
0.00.01.02.03.04.05.06.0min
二、定性分析
三、
定样品 苯 甲苯 量分
保管时间
析
苯、甲苯混合标准溶液浓度分别为：1 ul/ml, 2 ul/ml, 5 ul/ml,10 ul/ml.
10 ul/ml 苯
甲苯
2.0面积(x1,000,000)3.0面积(x1,000,000)1.52.51 ul/ml 2.01.01.50.51.00.50.00.02.55.07.5浓度
0.00.02.55.07.5浓度浓度 峰面积 浓度 峰面积 1 ul/ml 212685 1 ul/ml 387710 2 ul/ml 429291 2 ul/ml 747983 5 ul/ml 954537 5 ul/ml 1533892 10 ul/ml 1905343
10 ul/ml 2928373
Y = aX + b
Y = aX + b
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苯
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四、
未知样品浓度
未知样品 浓度2 浓度1
苯 2.9 ul/ml
甲苯
六、
实验讨论
①由于实验中待测溶液的组分只有苯和甲苯两种物质, 组分比力简单, 只要在实验过程中, 严格控制且定量进样, 就能采纳把持、计算简便的标准曲线法得出准确的实验结果, 因而采纳标准曲线法.若采纳归一化法或内标法, 虽然能获得准确更高的实验结果, 但由于实验把持及计算均较为复杂, 实验及数据处置的时间长, 效率相对不高, 故实验中采纳标准曲线法作为定量的方法.
②最佳色谱条件的选择是本实验准确度的关键.若苯与甲苯的峰分离效果过小, 苯与甲苯的峰未能完全分离, 肯定影响其保管时间和峰面积的计算, 是实验准确度减小, 数据误差加年夜；若苯与甲苯的峰分离效果过好, 虽然能将苯与甲苯的峰完全分离, 实验准确度好, 可是耗费的实验时间较长, 效率欠好.因而, 应选择合适的色谱条件.
创作时间：二零二一年六月三十日
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③为了提高标准曲线的拟合度, 可以重复进样屡次, 而且由同一人进样, 以免因个体习惯分歧引起实验误差.进样针进样时确保进样针中没有残留气泡, 另外, 在进分歧浓度或分歧的物质前因先用乙醇溶液润洗干净, 以免相互影响.
创作时间：二零二一年六月三十日 创作时间：二零二一年六月三十日
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