凝胶电泳缓冲液及配制

98%去离子甲酰胺 10mol/L EDTA(pH8.0) 0.025%二甲苯青FF 0.025%溴酚蓝

甲酰胺：许多批号的试剂级甲酰胺，其纯度符合使用要求，无须再进行处理。不过，一旦略呈黄色，那么应用在磁力搅拌器上将甲酰胺与Dowex XG8混合床树脂共同搅拌1小时进行去离子处理，并用Whatman 1号滤纸过滤2次，去离子甲酰胺分装成小份，充氮存于-70℃。

3．常用的电泳缓冲液

缓冲液 Tris-乙酸（TAE）

使用液

浓贮存液（每升） 50×：242g Tris碱

100ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 10×:10g Tris碱

15.5ml85%磷酸（1.679g/ml） 40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 5×：54g Tris碱

20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 1×:5ml 10mol/L NaOH 2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0) 5×:15.1g Tris

94g 苷氨酸（电泳级）（pH8.3） 50ml 10% SDS(电泳级)

Tris-磷酸（TPE）

Tris-硼酸（TBE）a

碱性缓冲液

Tris-甘氨酸c

b

1×:50mmol/L NaOH 1mmol/L EDTA 1×:25mmol/L Tris 250mmol/L 甘氨酸 0.1% SDS

说明：

①TBE溶液长时间存放后会形成沉淀物，为避免这一问题，可在室温下用玻璃瓶保存5×溶液，出现沉淀后那么予以废弃。

以片都以1×TBE作为使用液（即1：5稀释浓贮液）进行琼脂糖凝胶电泳。但0.5×的使用液已具备足够的缓冲容量。目前几乎所有的琼脂糖胶电泳都以1：10稀释的贮存液作为使用液。

进行聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小， 故通过缓冲液的电流量通常较大，需要使用1×TBE以提供足够的缓冲容量。 ②碱性电泳缓冲液应现用现配。

③Tris-甘氨酸缓冲液用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。

4．2×SDS凝胶加样缓冲液

100mmol/L Tris·HCl(6.8) 200mmol/L二硫苏糖醇（DTT） 4%SDS（电泳级） 0.2%溴酚蓝 20%甘油

不含DTT的2×SDS凝胶加样缓冲液可保存于室温，应在临用前取1mol/L贮存液现加于上述缓冲液中。

5．凝胶加样缓冲液

缓冲液类型

6×缓冲液

0.25%溴酚蓝

Ⅰ

0.25%二甲苯青FF 40%（W/V）蔗糖水溶液

Ⅱ

0.25%二甲苯青FF 15%聚蔗糖(Ficoll400)

室温 4℃ 贮存温度

0.25%溴酚蓝

Ⅲ

0.25%二甲苯青FF 30%甘油水溶液

Ⅳ

0.25%溴酚蓝 40%(W/V)蔗糖水溶液 碱性加样缓冲液:

300mmol/L NaOH 6mmol/L EDTA

18%聚蔗糖(Ficoll400)

Ⅴ

0.15%溴甲酚绿 0.25%二甲苯青FF

使用以上凝胶加样缓冲液的目的有三：增大样品密度；以确保DNA均匀进入样品孔内；使样品呈现颜色，从而使加样操作更为便利，含有在电块中能以可预知速率向阳极泳动的染料。溴酚蓝在琼脂糖中移动的速率约为二甲苯青FF的2.2倍，而与琼脂糖浓度无关。以0.5×TBF作电泳液时，溴酚蓝在琼脂糖中的泳动速率约与长300bp的双链线状DNA相同，而二甲苯青FF的泳动那么与长4kb的双链线状DNA相同。在琼脂糖浓度为0.5%～1.4%的X围内，这些对应关系受凝胶浓度变化的影响并不显著。

选用哪一种加样染料纯属个人喜恶。但是，对于碱性凝胶应当使用溴甲酚绿作为示踪染料，因为在碱性pH条件下其显色较溴酚更蓝为鲜明。

4℃

4℃ 4℃