PBS缓冲液的配制方法

PBS缓冲液配方

不管是免疫组化，还是细胞培养中，常用到PBS缓冲液，下面是我们实验室的配方，供大家参考。

我们实验室的配方：

A液：0.1mol/L磷酸二氢钾：

磷酸二氢钾（KH2PO4，MW136.09）1.361g，加双蒸水至100ml。

B液：0.1mol/L磷酸氢二钠：

酸酸氢二钠（Na2HPO4.2H2O，MW177.99）1.78g，加双蒸水至100ml。

或者酸酸氢二钠（Na2HPO4.12H2O，MW358.14）3.58g，加双蒸水至100ml。

pH －－ A液 （ml） －－ B液（ml）

5.60 －－ 9.50 －－ 0.25

5.91 －－ 9.00 －－ 1.00

6.24 －－ 8.00 －－ 2.00

6.47 －－ 7.00 －－ 3.00

6.64 －－ 6.00 －－ 4.00

6.81 －－ 5.00 －－ 5.00

6.98 －－ 4.00 －－ 6.00

7.17 －－ 3.00 －－ 7.00

7.38 －－ 2.00 －－ 8.00

7.73 －－ 1.00 －－ 9.00

8.04 －－ 0.50 －－ 9.50

一般免疫组化用PBS都只包含Na2HPO4•12H2O（磷酸氢二钠）

NaH2PO4•2H2O（磷酸二氢钠）Nacl

用于细胞培养的PBS需含有氯化钾

称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可0.01M

PBS缓冲液

称取NaCl 8g，KCl 0.2g，Na2HPO4•12H2O 3.63g, KH2PO4 0.24g，溶于900ml

双蒸水中，用盐酸调pH值至7.4，加水定容至1L，常温保存备用。

PBS是最普遍不过的实验室缓冲液，但其配方各异。以下是我的总结：

母液的配制： 0.2M Na2HPO4：称取 71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于 1000ml 水

0.2M NaH2PO4：称取 31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水

各种浓度PB(pH=7.4)的配制：

先配 0.2M PB (pH=7.4，100ml)：取19ml 0.2mol/L

的 NaH2PO4， 81ml 0.2mol/L 的 Na2HPO4, 即可。

然后 只需将0.2M PB (pH=7.4)按相应比例适当稀释 即可，如：

0.1M PB（PH=7.4） ：取 500ml 0.2M PB，加水稀释至 1000ml 即可。

0.01M PB （PH=7.4）：取50ml 0.2M PB，加水稀释至 1000ml 即可。

0.02M PB （PH=7.4）：取100ml 0.2 M PB，加水稀释至 1000ml 即可。

若需要 NaCL 的话，加入 NaCL 至0.9%（g/100ml）即可。

另：其它各种另 PH值的 0.2M PB（100ml)配方 ：

pH 0.2M NaH2PO4（ml） 0.2M Na2HPO4（ml）

5.7 93.5 6.5

5.8 92 8

5.9 90 10

6.0 87.7 12.3

6.1 85 15

6.2 81.5 18.5

6.3 77.5 22.5

6.4 73.5 26.5

6.5 68.5 31.5

6.6 62.5 37.5

6.7 56.5 43.5

6.8 51 49

6.9 45 55

7.0 38 62

7.1 33 67

7.2 28 72

7.3 23 77

7.4 19ml 81ml

7.5 16 84

7.6 13 87

7.7 10.5 0.5

7.8 8.5 91.5

7.9 7 93

8.0 5.3 94.7

磷酸盐缓冲液（Phosphate Buffer, PB），磷酸氢二钠和磷酸二氢钠缓冲液配方

磷酸盐缓冲液（Phosphate Buffer, PB）

试剂： NaH2PO4·2H2O Na2HPO4·12H2O

配制方法：配制时，常先配制0.2mol/L的 NaH2PO4和0.2mol/L的Na2HPO4，两者按一定比例混合即成0.2mol/L的磷酸盐缓冲液（PB），根据需要可配制不同浓度的PB和PBS。

（1）0.2mol/L的 Na2HPO4；称取Na2HPO4.12H2O 31.2g(或 NaH2PO4·H2O 27.6g)加重蒸水至1000ml溶解。

（2）0.2mol/L的 Na2HPO4：称取NaHPO4.·12H2O 71.632g（或 Na2HPO4·7H2O 53.6g或 Na2HPO4·2H2O 35.6g）加重蒸水至1000ml溶解。

（3）0.2mol/L pH7.4的PB的配制：取19ml 0.2mol/L的 NaH2PO4和81ml 0.2mol/L的 Na2HPO4·12H2O,充分混合即为0.2mol/L的PB（pH约为7.4～7.5）。若pH偏高或偏低，可通过改变二者的比例来加以调整，室温保存即可。

0.2mol/L磷酸盐缓冲液（pH5.7～8.0）

pH 0.2mol/L NaH2PO4(ml) 0.2mol/L Na2HPO4(ml)

5.7 93.5 6.5

5.8 92.0 8.0

5.9 90.0 10.0

6.0 87.7 12.3

6.1 85.0 15.0

6.2 81.5 18.5

6.3 77.5 6.4 73.5 6.5 68.5 6.6 62.5 6.7 56.5 6.8 51.0 6.9 45.0 7.0 39.0 7.1 33.0 7.2 28.0 22.5

26.5

31.5

37.5

43.5

49.0

55.0

61.0

67.0

72.0

7.3 23.0 67.0

7.4 19.0 81.0

7.5 16.0 84.0

7.6 13.0 87.0

7.7 10.5 89.5

7.8 8.5 91.5

7.9 7.0 93.0

8.0 5.3 94.7

关于磷酸缓冲溶液的知识，我在网上搜索了好多帖子，但是还是不能确定正确的答案。现在把他们链接过来，希望有高手们参与讨论，我会把最终的正确解答整理出来，提供给大家。

PBS可以为三种溶液的英文缩写，分别是

1.磷酸盐缓冲溶液（phosphate buffered solution）、

2.磷酸盐缓冲盐水（phosphate buffered saline）及

3.磷酸盐缓冲钠（phosphate buffered sodium），

其配制方法不同，pH值不同，发挥的生物学作用亦不完全相同。

如无特殊说明，生物学上常用的PBS是中性磷酸盐缓冲溶液（phosphate buffered solution）。

无钙镁离子磷酸缓冲盐水（PBS）

（0.15Mol/L PH 7.2）

NaCl 8.0g

KCl 0.2g

Na2HPO4 1.15g

（如为Na2HPO4·12H2O，则为2.89g）

KH2PO4 0.2g

将上述试剂依次溶于1 000ml去离子水中，完全溶解后，115℃高压灭菌10min~15min，存在4℃冰箱中备用。此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗涤细胞培养物。

我们用的都是第二种

问题1：磷酸盐缓冲盐水（phosphate buffered sodium），为什么用第三种或第一种呢:这么多年以来我都以为PBS就是磷酸盐缓冲溶液，其他两种说法的英语名称常见到，不过我一直都以为他们是差不多的东西。不同的汉语翻译倒是第一次听说。

我们公司用的PBS有很多种，抗体组用的中和PBS配方就比较简单，没有K+离子， 只起到缓冲PH的作用；Na2HPO4+ KH2PO4 按照不同比例混匀，可以得到不同PH的缓冲液，用于不同目的，这个在分子生物学中用得很多； 用于活细胞或者细菌处理的，为了保持渗透压，会加入其他的溶液，最常见的就是NaCl 和 KCl调节离子浓度。以上是个人的理解，欢迎批评。:问题2：既然抗体组的PBS是起到缓冲PH的作用，那加入80G的NACL作用是什么？需要平衡渗透压吗？还有加入K离子的是不是因为细胞上NA-K泵的原因啊，血清里面又没有细胞，何来NA-K泵一说啊？

我觉得之所以这么配，其实就是对血清中缓冲环境的一种模拟罢了，血清里面又没有细胞，何来NA-K泵一说啊？我没说血清撒。。。。。。 我们用的又没加K，我是说加了K的的

问题3：不加NACL会怎么样啊？多省钱啊

在中和磷酸盐缓冲液中，NaCl的主要作用应当是保持一定的离子浓度，以维持抗体的活性。在离子浓度过高或过低的情况下，蛋白质都会变性，抗体当然不例外。

ps:哺乳类需用生理盐水浓度是0.9%。称取0.9克氯化钠，溶解在少量蒸馏水中，稀释到100毫升。

鸟类需用的生理盐水浓度是0.75%。称取0.75克氯化钠，溶解后用蒸馏水稀释到10

0毫升。

两栖类需用的生理盐水浓度是0.65%。称取0.65克氯化钠，溶解后用蒸馏水稀释到100毫升。[/size][/font]