一种对烟草青枯病菌具有抑制作用的植物活性物质的提取方法[发明专利]

*CN103262862A*

(10)申请公布号(10)申请公布号 CN 103262862 A(43)申请公布日 2013.08.28

(12)发明专利申请

(21)申请号 201310205446.3(22)申请日 2013.05.29

(71)申请人湖南农业大学

地址410128 湖南省长沙市芙蓉区东湖湖南

农业大学(72)发明人廖晓兰 张亚 苏品 黄璜

刘双清 夏日照 仇佳伟 尹伟(74)专利代理机构长沙正奇专利事务所有限责

任公司 43113

代理人何为 袁颖华(51)Int.Cl.

A01N 65/08(2009.01)A01P 3/00(2006.01)

权利要求书1页 说明书3页 附图1页权利要求书1页 说明书3页 附图1页

(54)发明名称

一种对烟草青枯病菌具有抑制作用的植物活性物质的提取方法(57)摘要

本发明属于生物农药技术领域，具体提供一种对烟草青枯病菌具有抑制作用的植物活性物质的提取方法，该方法以苋菜叶为原料，将其晒干后粉碎，采用分析纯乙酸乙酯对苋菜叶粉末进行浸提，收集的提取液置入旋转浓缩蒸发仪浓缩至膏快捷、操作方便，状，获得抑菌物质。本方法简单、易推广和应用。

CN 103262862 ACN 103262862 A

权 利 要 求 书

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1.一种对烟草青枯病菌具有抑制作用的植物活性物质的提取方法，其特征在于，该方法步骤如下：

A、以苋菜叶粉末为原料，采用分析纯乙酸乙酯对苋菜叶粉末进行浸提，苋菜叶粉末一次性加入，乙酸乙酯分3次加入，每次按1g苋菜叶粉末加10-20mL乙酸乙酯的比例加入后，于摇床上在20-25℃下以90-120r/min振摇24-36h，过滤，收集滤液，合并3次滤液；

B、将所得滤液置入旋转浓缩蒸发仪，浓缩至膏状。

2.如权利要求1所述的一种对烟草青枯病菌具有抑制作用的植物活性物质的提取方法，其特征在于，所述苋菜叶粉末是取苋菜叶洗净后晒干至含水量为0.5-3.5%，以8000-12000r/min的转速粉碎3-6min至100-120目细粉。

3.如权利要求1所述的一种对烟草青枯病菌具有抑制作用的植物活性物质的提取方法，其特征在于，所述步骤B中的浓缩条件为：压力为0.09-0.1MPa、水浴温度为40-43℃、冷凝温度为8-10℃及转速为80-120r/min。

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CN 103262862 A

说 明 书

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一种对烟草青枯病菌具有抑制作用的植物活性物质的提取

方法

技术领域

本发明属于生物农药技术领域，具体涉及一种对烟草青枯病菌具有抑制作用的植

物活性物质的提取方法，更具体地说，是苋菜叶抑菌活性物质的提取方法。

[0001]

背景技术

在农业生产上，防治植物有害生物的化学农药应用十分广泛，如：杀虫剂、杀菌剂、除草剂等。化学农药在保证粮食增产方面起着重要的作用。尽管化学农药具有速效、加工容易、防治有害生物效果明显等优势，但由于其存在污染环境、破坏生态平衡、农药残留、病菌产生抗药性等一系列问题，探索新的防治方法十分必要。[0003] 目前，采用生物防治不仅安全、高效、低毒、无污染，而且可解决化学农药费用高，抗药性等问题，具有广阔的发展前景。植物是生物活性化合物的天然宝库，可产生的次生代谢产物超过40万种，其中的大多数为萜类、碱类、黄酮、酚类等杀虫或杀菌的活性物质。从植物中探寻新的活性物质或新的作用靶标，已成为当前研究的热点。[0004] 苋菜是苋科苋属的一年生草本植物，其营养十分丰富。最新的研究结果表明：苋菜不仅可作为蔬菜、粮食、饲料等，而且具有抗氧化、抗癌、保护肝脏等医疗作用。近年来，随着苋菜研究的不断深入，发现苋菜提取物对腐生菌，如：沙门菌（Salmonella spp.）、大肠杆菌（Escherichia coli）、金黄色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus）、李斯特菌（Listeria monocytogenes）等具有抑制作用。而且其种子提取物中存在抗菌肽，对荔枝酸腐病菌（Geotrichum candidum）、茄病镰刀菌（Fusrium solani）、产黄青霉（Penicillium chryso-genum）、亮白曲霉（Aspergillus candidus）等也具有抑制作用。目前，有关苋菜抑菌物质对植物病原物的研究报道较少，已有人利用鲜苋菜叶汁液对烟草青枯病菌进行了生物测定，发现具有抑制作用，而且盆栽效果较好。但从苋菜叶中提取抑菌物质的方法未见报道，本发明人基于这一点，进行了苋菜叶抑菌物质的提取方法研究，旨在为开发新的植物源农药提供理论依据。

[0002]

发明内容

[0005] 本发明所要解决的技术问题是：针对上述现有技术的不足，提供一种对烟草青枯病菌具有抑制作用的植物活性物质的提取方法。[0006] 为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：一种对烟草青枯病菌具有抑制作用的植物活性物质的提取方法，该方法步骤如下：[0007] A、用分析纯乙酸乙酯对苋菜叶粉末进行浸提，苋菜叶粉末一次性加入，乙酸乙酯分3次加入，每次按1g苋菜叶粉末加10-20mL乙酸乙酯的比例加入后，于摇床上在20-25℃下以90-120r/min振摇24-36h，过滤，收集滤液，合并3次滤液；

[0008]

B、将所得滤液置入旋转浓缩蒸发仪，在0.09-0.1MPa气压、水浴温度为40-43℃和冷凝温度为8-10℃条件下，80-120r/min浓缩至膏状。

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CN 103262862 A[0009]

说 明 书

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上述苋菜叶粉末是取苋菜叶洗净后晒干至含水量为0.5-3.5%，以8000-12000r/

min的转速粉碎3-6min至100-120目细粉。[0010] 与现有技术相比，本发明具有的优点为：[0011] 1、提取方法简单、快捷、操作方便，易推广和应用。[0012] 2、分离方法所需的材料易购买，分离速度快，不污染环境，对人畜安全环保，节省成本，节约资源。附图说明

[0013] 图1是苋菜叶乙酸乙酯提取物的48h抑菌效果图；[0014] 其中：1代表乙酸乙酯提取物；2代表乙酸乙酯。

具体实施方式

[0015] 下面结合具体试验和实施例对本发明的技术方案作进一步说明。[0016] 本发明所使用的原料苋菜叶可以通过种植或购买，生产技术成熟；原料供应充足，获得途径多样。

[0017] 实施例中用到的病原菌种烟草青枯病菌（Pseudomonas solanacearum）由湖南农业大学植物病理学实验室提供。该菌种的活化：采用接种环刮取3环烟草青枯病菌菌种接入牛肉膏蛋白胨斜面培养基，28℃下培养24-48h。实施例1[0018] 取苋菜叶洗净后晒干，用高速粉碎机以12000r/min的转速粉碎3min至100-120目细粉，获得苋菜叶粉末。取苋菜叶粉末10g装入三角瓶中，用分析纯乙酸乙酯对苋菜叶粉末进行浸提，乙酸乙酯分3次加入，每次加100mL后，置三角瓶于摇床上在20℃下以90r/min振摇36h，过滤，收集滤液，合并3次滤液，将滤液装入旋转浓缩蒸发仪，在0.09MPa气压、水浴温度为40-43℃和冷凝温度为8-10℃条件下，80r/min蒸发浓缩至膏状，得黑色提取物。

[0019] 实施例2

[0020] 取苋菜叶洗净后晒干，用高速粉碎机以8000r/min的转速粉碎6min至100-120目细粉，获得苋菜叶粉末。取苋菜叶粉末10g装入三角瓶中，用分析纯乙酸乙酯对苋菜叶粉末进行浸提，乙酸乙酯分3次加入，每次加200mL后，置三角瓶于摇床上在25℃下以120r/min振摇24h，过滤，收集滤液，合并3次滤液，将滤液置入旋转浓缩蒸发仪，在0.1MPa气压、水浴温度为40-43℃和冷凝温度为8-10℃条件下，120r/min蒸发浓缩至膏状，得黑色提取物。[0021] 实施例3

[0022] 取苋菜叶洗净后晒干，用高速粉碎机以10000r/min的转速粉碎5min至100-120目细粉，获得苋菜叶粉末。取苋菜叶粉末10g装入三角瓶中，用分析纯乙酸乙酯对苋菜叶粉末进行浸提，乙酸乙酯分3次加入，每次加150mL后，置三角瓶于摇床上在22℃下以100r/min振摇32h，过滤，收集滤液，合并3次滤液，将滤液置入旋转浓缩蒸发仪，在0.1MPa气压、水浴温度为40-43℃和冷凝温度为8-10℃条件下，90r/min蒸发浓缩至膏状，得黑色提取物。

[0023] 实施例4

[0024] 取苋菜叶洗净后晒干，用高速粉碎机以11000r/min的转速粉碎4min至100-120

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CN 103262862 A

说 明 书

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目细粉，获得苋菜叶粉末。取苋菜叶粉末10g装入三角瓶中，用分析纯乙酸乙酯对苋菜叶粉末进行浸提，乙酸乙酯分3次加入，每次加120mL后，置三角瓶于摇床上在22℃下以120r/min振摇34h，过滤，收集滤液，合并3次滤液，将滤液置入旋转浓缩蒸发仪，在0.095MPa气压、水浴温度为40-43℃和冷凝温度为8-10℃条件下，100r/min蒸发浓缩至膏状，得黑色提取物。

[0025] 实施例5

[0026] 取苋菜叶洗净后晒干，用高速粉碎机以9000r/min的转速粉碎6min至100-120目细粉，获得苋菜叶粉末。取苋菜叶粉末10g装入三角瓶中，用分析纯乙酸乙酯对苋菜叶粉末进行浸提，乙酸乙酯分3次加入，每次加180mL后，置三角瓶于摇床上在25℃下以110r/min振摇28h，过滤，收集滤液，合并3次滤液，将滤液置入旋转浓缩蒸发仪，在0.1MPa气压、水浴温度为40-43℃和冷凝温度为8-10℃条件下，110r/min蒸发浓缩至膏状，得黑色提取物。[0027] 实施例6抑菌活性检测[0028] 取膏状提取物，按每1g膏状提取物加5-10mL乙酸乙酯的比例进行溶解。采用平皿打孔法，将烟草青枯病菌悬浮液（1×108cfu/mL）60μL均匀涂布于NA平板，然后在平板两侧打孔（φ=5mm），其中一孔注入待测溶解膏状物，另一孔注入对照溶剂（乙酸乙酯溶剂），每孔50μL，28℃培养24-48h，每处理3次重复，观察抑菌情况。[0029] 结果与分析：结合参见图1，乙酸乙酯提取物对烟草青枯病菌具有抑制作用，乙酸乙酯溶剂本身对烟草青枯病菌无抑制作用；经观察，乙酸乙酯提取物对烟草青枯病菌的抑制效果比较稳定，具有开发生物农药的潜力。

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CN 103262862 A

说 明 书 附 图

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图1

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