Journal of Anhui Science and Technology University
农用硫酸链霉素对烟草 青枯病拮抗菌发酵液活性影响
黄保宏1，沈守国2，杨好好1
1
安徽科技学院农学院，安徽凤阳233100,.霍山职业学校，安徽霍山237299)
摘要：目的：测定农用抗生素对烟草青枯病拮抗菌发酵液活性影响，为农药复配提供依据。方法:采用平 板对峙法和盆栽法，分别测定农用硫酸链霉素与青枯病拮抗菌AKJK-2013-02混合液对烟草青枯病的防 效。结果：V农用硫酸链霉素：V拮抗菌发酵液按5 〇 0'
〇 1、3
〇 2、2 〇 3、1 〇 4、0 〇 5穴种比例混合条件下，对烟早青
枯病菌的抑制效果不同。平板对峙和盆栽法中农用硫酸链霉素与拮抗菌混合液均对烟草青枯病菌有抑制 作用，以体积比为3 〇 2时，其抑菌效果最好，且有一定增效作用。结论：筛选的农药复配可较好地抑制烟 草青枯病的发生。
关键词：烟草青枯病拮抗菌;发酵液；抗菌素；抑菌活性中图分类号:S435.72
文献标志码:A
文章编号：1673-8772 (2019) 05-0040-04 DO* 10. 19608/j. cnki. 1673-8772. 2017. 0716
开放科学(资源服务)标识码(OSID):
Effect of Antibiotics on Activity of Antibacterial Fermentation of Tobacco
HUANGBaohong，SHENShouguo2，YANG Tingting
(1. College of Agriculture，Anhui Science and Technology University, Fengyang 233100? China；
2. Vocational School of Huoshan，Huoshan 237299, China)
Abstract：Objective： To determine the effect of agricultural antibiotics on the antibacterial fermentation liquid activity of tobacco green blight. Methods： The effect of antibacterial AKJK-2013-02 mixtureagainst agricultural streptomycin sulfate and green blight was determined by the plate confrontation method. Results ： The experiment showed that ： under the conditions of 5:0，4〇 1，3〇 2，2:3，1:4, 0 〇 5 mixture of agricultural streptomycin sulfate and antagonistic antibacterial fermentation liquid，different proportions of agricultural streptomycin sulfate and antagonistic anti-bacterial AKJK-2013-02 mixture had different inhibitory effects on green dried bacteria. The effect of actinomycin andactinomycin and actinomycete mixture on the antibacterial activity of actinomycetes was determined by the plate confrontation method. The results showed that the actinomycin and actinomycete mixture had inhibitory effect on tobacco green bacteria. When the ratio of the two was 3 ： 2，the antibacterial effect
收稿日期= 2019-07-01
基金项目：安徽科技学院校级质量工程项目（X2017042);安徽科技学院大学生创新科研课题(S201910879041);安徽科技学院植物保护
重点学科项目（AKZDXK2015C04) *
作者简介:黄保宏(1966-)，男，安徽滁州人，博士，教授，主要从事植物保护研究。
第33卷第5期黄保宏，等:农用硫酸链霉素对烟草青枯病拮抗菌发酵液活性影响41
was most obvious. Conclusion ： The pot experiments showed that tobacco antibiotics had a goodsynergisticeffect on the antagonistic antimicrobial effect of tobacco blight disease, and could obviously inhibit the occurrence of blight disease.
Key words：The inhibitory action of tobacco bacterial wilt； Fermented liquid； Antibiotics； Antibacterial activity
烟草青枯病由青枯雷尔氏菌(心^onia soZanacearwm)引起的一种危害重大、毁灭性强、分布极广的 土传性细菌病害[1]，在浙江、福建、河南
、辽
宁等大部分烟草种植区均有发生，已对烟草生产造成严重威胁
。
烟草青枯病菌主要通过伤口侵染烟株，罹病烟株典型症状是发病部位一侧叶片枯萎但仍是绿色，其茎部常 见褪绿条斑，且发病根部一侧根须变黑腐烂，另一侧根须大部分正常[2]，故呈“青枯”状;发病中后期叶片全 部萎蔫黄化，根部完全变黑，用力挤压发病株茎切口，会有黄白色菌脓出现，病株茎和叶脉导管变黑[3]。而 且带菌土壤和田间病残体是烟草青枯病菌主要越冬场所[4]。因此，在烟苗栽种时应避免对烟株造成伤口并及时处理田间土壤和病残体，避免传染病害
，
。
利用拮菌防治病害已成为近年細究的热点[5]，其具有对人畜无副作用、环境兼容性好、材料来源 广泛等特点行趋势之一
。国。其
内外学者对烟草青枯病防治提出了很多有效的防治措施，生物防治成为烟草绿色防控流 中，利用拮抗菌防治青枯病越来越受到重视
。
目前，有关运用农用抗生素与拮抗菌联合防治研究较为少见，本试验中将农臓酸链霉素与青枯病拮
抗菌发酵液等两种抗生素按不同体积比例混合，以探究农用抗生素对烟草青枯病拮抗菌发酵液联合抑菌 作用，筛选适合安徽省优质烟区的抗生素资源，为烟草青枯病的生物防控提供依据，开发出防治烟草青枯 病的新思路
。
I
材料与方法
NA培养基:牛肉粉3. 0 g，蛋白胨10. 0 g，氯化钠5. 0 g，琼脂15. 0 g，pH值7. 3，H2O 1 000 mL，
IK供试培养基
121 °C灭菌。
I. 2试验器材
YKZ智能人工气候箱(浙江托普仪器有限公司）；XQY-LS- 60- SII立式蒸汽灭菌箱（上海博讯实
业有限公司医疗设备厂）；101A-3d洁净工作台(上海比郎仪器有限公司）；SW-OJ-2F旋转蒸发仪(宁 波江南器厂制造）；C5012台式恒温培养振荡器(上海市安亭电子仪器厂厂SW-QJ-2F分析天平（宁 波江南器厂制造）。
I. 3供试菌株与农用抗生素
供试烟草青枯病菌、拮抗菌AKJK-2013-02均由安徽科技学院植物保护学实验室提供;72%农用
硫酸链霉素(成都惠普生物工程有限公司）。
I. 4烟草青枯病拮抗菌拮抗物质粗提液的制备
在28 C条件下，将5mL拮抗菌AKJK-2013-02接种到装有NA液体培养基的摇瓶中培养3 d，常
温下以8 500 r/min离心0. 5 h培养，提取其上清液，棚广口瓶中置于冰箱，在4 C条件下保存备用。
孔径5 *m微孔滤膜过滤后放在500 mL的棕色
IK农用硫酸链霉素对烟草青枯病拮抗菌发酵液抑菌活性的测定
米用平板对峙法[5]测定，于2017年5月3日设置6个处理（V农用硫链霉素\"V拮抗菌发酵液=5 : 0、4 : 1、 3 〇 2、〇 31 〇 4、〇 5)，将这6个处理分别合摇匀后，倒入融化的5mLNA培养基中，待培养基麵后 进行平板拮抗试验，以不加农用硫酸链霉素和烟草青枯病拮抗菌发酵液为对照(CK)，3次重复/处理。用 直径5 mm打孔器将待测烟草青枯病菌菌落打成小圆饼，反放在直径9 cm培养皿中央并倒置在28 C恒 温箱内培养，于第3、5、7天分别观察青枯病菌菌落的生长形态，并测量菌圈直径，计算抑菌率。
42安徽科技学院学报2019 年
I 6盆栽试验测定农用硫酸链霉素与拮抗菌AKJK-2013-02混合液的抑菌活性
2017年5
月
17
日，将按V农用硫酸链霉素：V拮抗菌发酵=
5 〇 0
# 〇 1# 〇 2# 〇 3、1 〇 4# 〇 5等比例摇勻配
制成混合液进行盆栽试验，以不加农用硫酸链霉素和烟草青枯病拮抗菌发酵液的为对照（CK)。3次重 复/处理，3株烟苗/重复，用无菌土培育烟苗直至3叶期进行花盆移栽M。移栽后采用灌根接种的方法， 将上述6个处理的混合液灌入染病烟株根际，放置于温室28〜株发病情况，计算发病率和病情指数，并计算相对防效[7]。
植物发病率=
(
35°C
条件下培养。观察第10、15、20天烟
染病株数/调查总株数）X
100%
,
100 %
植物病情指数=['(各级病株数X相应级数)/调查总株数X最高级别]X! +对照区病情指数增长率）X1.7数据处理
使用Excel 2007和
SPSS19. 0
100 %
,
相对防效=[处理前病情指数X (1 h对照区病情指数增长率)-处理后病情指数]/处理前病情指数X
。
软件对试验麵进行统计分析。
2
2.1
结果与分析
农用硫酸链霉素对烟草青枯病拮抗菌抑菌活性影响
表1
农用硫酸链霉素与拮抗菌混合液对烟草青枯病菌生长的影响
Table 1 Effects of antimicrobial mixture on bacterial growth of tobacco bacterial wilt
#理（农臓酸链霉素+
V捨抗菌发酵液）
5 〇 04 〇 13 〇 22 〇 31 〇 40 o 5CK
3d
平均菌圈直径/mm
5. 66. 06.57. 08 09. 09. 6
抑菌率/%83. 581.3(3.969.665.240.6
—
5 d
平均菌圈直径/mm
7.08.09.010.011.013.013.3
抑菌率/%82.(82.280.4(8.3(6.153.3—
7 d
平均菌圈直径/mm
12.211.09.010.01214.515.2
抑菌率/%80.381.584.(83.1(9.(63.1—
由表1可知，农用硫酸链霉素与拮抗菌发酵液混合液均对烟草青枯病病菌丝生长有一定抑制作用。 当V2K
农用硫酸链霉素〇 V措抗菌发酵液=3 〇 2
时在第7天对青枯病囷丝生长抑制效果最明显。且随农用硫酸链霉素
含量的度降獅制率降低，在1 〇 4# 〇 5比例下差异水平显著。
盆栽试验测定农用硫酸链霉素与拮抗菌AKJK-2Y13-Y2联合抑菌活性
表3
农用硫酸链霉素与拮抗菌混合液对烟草青枯病的盆栽防治效果
Table 3 Effect of agricultural streptomycin sulphate and antagonist mixture on pot control of tobacco blight disease处理（V农用用酸霉素+
V捨抗菌发酵液\"
5 〇 04 〇 13 〇 22 〇 31 〇 40 o 5CK
发病率/%21.625.2325.0325.5326.5527. 3230.26
10 d
病情指数/%
16. 3617.5117. 3917. 6817.9118.1320. 27
发病率/%24. 0825.2625.1126.1227. 012(.6(31.01
15 d
病情指数/%
18.8217.5217.4417.8518.0318.2121.50
发病率/%24.3525.3425.1426.4227. 2528.0323.24
20 d
病情指数/%
17.6117.581 .417. 8618.8418.4323.18
由表3可知，接种烟草青枯病的罹病烟株，在农臓酸链霉素与拮抗菌发酵液混合液的共同作用下烟 株发病率、病情指数均低于只加入拮抗菌发酵液的处理组(V綱
用
臓
〇 V拮抗菌发酵液=0 〇 5)。在烟株灌根
处理20 d后，配比为3 〇 2时烟株发病率最低为25. 03%，病情指数为17. 49%。
第33卷第5期黄保宏，等:农用硫酸链霉素对烟草青枯病拮抗菌发酵液活性影响43
3
结论与讨论
通过农臓酸链霉素与拮抗菌发酵液不同量配比下青枯病菌生长状况的研究发现:本研究各项比例
混合液均对青枯病菌有抑制作用，且抑制效果较明显。在培养基中培养7d后发现:当农用硫酸链霉素与 拮抗菌发酵液混合比例为3 〇 2时，抑菌率达到84. 7%，抑菌效果显著。
盆栽试验表明农用硫酸链霉素与拮抗菌发酵液混合液对于发病烟株有较好防效，烟株病情指数和发 病率都明显低于对照(CK)。因此，抗菌素对烟草青枯病拮抗菌发酵液活性有较积极影响，能增加拮抗菌 对青枯病的防效作用。
除抗菌素与生防菌结合共同防控研究外，今后还需加强农用抗生素与化学药剂、生物肥料，生防菌等 进行优化复配试验，为拮抗菌充分利用提高科学依据。
参考文献：
向忠明，叶建如，顾钢.南方五省烟草青枯病菌系组成与分布[J].延边大学农学学报,2001(3) +70-173.霍沁建，张深，王若焱.烟草青枯病研究进展[J].中国农学通报,2007,23(8) +64-368.
[3]
2010,31(1) +3-15.
[4] 李清飞,李红丽，王岩，等.烟草青枯病病原菌的分离及其拮抗菌的筛选[J].河南农业科学,2006(1) +1-53,79.[5] 原丽,石明旺，杨运华.枯草芽孢杆菌分离鉴定及其对番茄灰霉病菌的抑菌效果[J].河南科技学院学报（自然科学
张秀玉,孔凡玉，王静，等.枯草芽孢杆菌SH7抑菌蛋白的分离纯化及对烟草青枯病菌的抑制作用[J].中国烟草科学,
版），2012,40(2)+1 — 33.
[6] 黄保宏陈方旭，周旋等.烟草青枯病拮抗菌室内抑菌活性研究[J].华北农学报201631 (Z1) +53 - 457.
[7] 刘春元，刘建华,徐小玉，等.几种杀菌剂对玉米苗枯病菌毒力测定及防效试验[J].河南科技学院学报（自然科学版），
2005(1)42-46.
(责任编辑:顾文亮)
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