(西南大学食品科学学院，重庆4 0 0 7 1 6 )
摘要：通过对NaNO2—Al(N03)3—NaOH体系分光光度法测定总 黄酮含量的研究，发现用6 0%的乙醇进行溶解定容效果是最好的，同时试验证 明该方法不适用于对葛根素含量丰富物质的总黄酮的测定。关键字：总黄酮；分 光光度法；芦丁中
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文章编Study 号：
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黄酮类化合物是广泛存在于自然界的、泛指两个苯环通过三个碳原子相互联结而 成的一系列化合物，包括黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇、查尔酮、异黄 酮类等化合物［1］。黄酮类化合物是植物的重要次生代谢产物，也是一些保健 品和中药材的有效成分之一。黄酮类化合物的定量方法常用的有HPLC法和分 光光度法［2—4］。在实际生产和科研过程中，考虑到方法的简便、快捷以及 可行性，对总黄酮的测定，多采用NaNO2—Al(N03)3—NaOH体 系分光光度法。由于天然植物的组成非常复杂，且各种黄酮类物质性质也存在差 图分类号：TS2 文献标识码：A
r y;rutin
别，这就使分光光度法在实际测定过程中产生一些问题，影响结果的准确性。本 文通过对标准物质和总黄酮初提物样品总黄酮含量的测定，对分光光度法中存在 的几个问题进行详细研究，发 收稿日期：2006 — 09 — 01
现其均能引起较大测定误差，由此总结出一些在分光光度法中需要注意的问题并 提出了改进方法，以期为将来的研究者提供参考。1方法和原理1.1试验原理 黄酮类化合物的紫外光谱图上主要有两个吸收带：环肉桂酰系统引起的吸收带I ( 3 0 0 — 5 5 0 nm)和环苯酰系统引起的吸收带n( 2 4 0 — 2 8 0 n m)。若加人铝盐，则铝离子与黄酮化合物形成稳定的配合物，带n会明显向长 波方向移动(红移)[5];在NaNo2的强碱性溶液中，其在510nm处 吸光度值最大，从而为分光光度法测定提供了可靠的依据。1.2试验方法 作者简
2 3 0 3.
2—),女，重庆人，硕士研究生，研究方向为食品安
介：陈静(19 8 全与质量控制。
0
0-005 0.01 0,015 0.02 0.025 0.03
食品科技
吸取一定量的已定容样品乙醇溶液于2 5mL容量瓶，加0 .3mL NO2 5%的Na 摇匀放置 6mi n，再加入0 .3mL10%Al(N03) 6mi n，最后加入
4mL1mol/L的NaOH再以一定浓度的乙醇定容到
2 5mL，放置15mi n，以芦丁为标准品，在510nm处测定其吸光值 [6 — 7]。
3摇匀放置
在查阅参考文献时发现各文献使用的样品黄酮提取溶剂 ------------ 乙醇的浓度不一 致，为了确定各浓度乙醇是否会对测定结果产生影响及各浓度乙醇提取的效果， 本试验对各浓度样品乙醇溶液进行了观察和测定。同时在实际操作过程中，发现
样品中的黄酮类型对吸光值产生很大影响，故对其也进行了详细的试验。2试验
仪器和材料
葛根总黄酮初提物芦丁：国药集团化学试剂有限公司；其它常用试剂：分析纯；
JA 2 0 0 3电子天平、FA 2 0 0 4电子天平：上海精天电子仪器有限公司； 10 1-3-
5电热恒温鼓风干燥箱：上海跃进医疗器械厂；RE52CS—1 旋转蒸发仪、B — 2 6 0 恒温水浴锅、SHZ — m型循环水真空泵：上海亚荣生 化仪器厂；UV— 2 4 5 0紫 外可见分光光度计：日本岛津。3试验与结果 3.1溶解定容用乙醇浓度的选择
3.1.1 溶解定容用乙醇浓度对吸光值的影响
根据
所查资料，常用的乙醇浓度为3 0%和6 0%，故测定这两种浓度乙醇对样品溶 解
性和吸光值的影响。 称取一定量的葛根总黄酮初提物分别以3 0%和6 0%乙醇定容到100 .0m L和5 0.0mL，再取1mL样液如1.2所述方法进行测定，再分别用3 0%和6 0%的乙醇定
容在100°C烘至恒质量的芦丁标准物质至25.0m L ，再分别取标准液0.0、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0m L、5.0mL，如1.2所述方
法进行测定，测定结果和标准曲线函数见表 1。
表1不同浓度乙醇溶解样液的吸光值
0%2 0%230%3 6 0%16 样品号30%13 Abs0.139
14 6 0. 1 7 5 0.1 7 0.1450. Y( ug/mL) 含量(g/1
0.47
g)标准偏差
0.014 0.449
6 2 0 8 11 9.5
1 8 0 3 2 0 5 5 3 0. 0 15
16.04
8 0 4 6.3 3 4 0 6 1
0.12 9 9 9 9 8
分析检测
品其稳定性都较好，
5 6 2 8 5 2 6 10.
60.015 20.599 0 17 7 19
9 5 8 9 3 2 37370.0 9
在试验中发现，在称样量在0.1 00g 0.200g之间时就出现30%乙 醇溶解的样品出现混浊且溶液最上层出现悬浮物，虽然后来取出1mL样液加入
3 0%的乙醇样液稳定性相对比60%的乙醇样液差，同时
2 5.0mL的容量瓶进行反应并定量后混浊现象消失，但是从中不难看出，从 这
个不稳定的溶液体系中吸取的1mL样液中的总黄酮量是不稳定的，这必然给 测
定结果的平行性和真实性带来影响，而使用6 0%乙醇溶液进行溶解定容时样
液澄清透明，故本试验认为用6 0%的乙醇溶液来进行溶解定容更为合适。同时 还需要指出的是，本试验测定出来的吸光值是样液经过稀释之后进行测定，通过 公式运算后，最后含量的差值较大，通过统计后发现t**=11.84>t 0.01(4)(双尾概率)=4.6 0 4，达到极显著水平，这必然给含量测 定带来影响，所以建议在溶解和定容样液和标准的整个过程中均使用相同乙醇浓 度，以消除乙醇浓度差异对测定结果的影响。
3.1.260%乙醇为溶剂的芦丁标准曲线测定 称取在
10 0C烘至恒质量的芦丁标准物质0. 0 0 3 3 g以60%的乙醇定容至2 5.0mL，再分
别取标准液0.0、1.0mL、2.0mL、3.0mL、 4.0mL、5.0mL如1.2所述方法进行测定，其中定容使用60%乙 醇，标准曲线见图1。
同时各取1mL浓度为0 .13mg/mL的上述标准物质溶液于5个25.0 mL容量瓶中如1.2所述方法进行测定，测定结果为0 .051、0.05 6、0.052、0.054、0.055，均值为 0 .0 5 3 6,RSD 为 0.0017。
3.2葛根素含量丰富样品的分光光度法测定
在测定葛根酒中总黄酮含量时发现，测定出来的总黄酮明显偏低，于是对其方法 进行了研究。由于葛根酒中主要的功能成分是黄酮中的葛根素［8］，故本试验 以浓度已知的葛根素标准液为样品通过NaNO2—Al(N03)3—NaO H体系分光光度法进行测定，通过测定值与实际值进行对比从而判断该方法对葛 根素含量丰富 表2NaNO2—Al(N0 量吸光吸光吸光 值1值2值3 平均吸光值
Y
3)3—NaO H体系分光光度法测定的葛根素含
浓度实际浓度(mg/mL)
0%30.1730.01
(mg/mL) 782372816.1446
8 119 2X+0.009 5 9x + 0.00
0%乙醇芦丁标准溶液的标号准曲线函数：y=8.878 6 3 2 2 t 0.
^=11.84>t0.01(4)(双尾概率)=4. 0010.0020.0040.002333 — 1.7
0%乙醇芦丁标准溶液的标号准曲线函数：y=9.56
6 0 4 4*10 — 5未检
出
0.22mg/mL
注：浓度计算使用图1的标准曲线。
由表1可知，用3 0%和60%的乙醇来溶解定容样
2 0 0 7 2 3 1
分析检测 食品科技 预富集-氢化物发生原子吸收光谱法 测定水产品中的痕量硒 陈学泽，沈银梅，杨献珍
（中南林业科技大学理学院，株洲4 1 2 0 0 6 ）
摘要：研究了预富集-氢化物发生原子吸收光谱法测定水产品中的痕量硒的新方 法。用吡咯烷二硫代氨基甲酸铵（A PDC）作配位剂，在PH4.0〜6.5 的条件下，用固体硅胶捕集、膜滤纸抽滤分离Se-APDC配合物，然后用 0.1moL/L盐酸从膜滤纸上洗下硅胶，得到能够直接用氢化物原子吸收光 谱法测定的硒悬浊液。该法操作简便，富集速度快。1 0 0mL溶液，特征质量 为1.5 X10-11g/1%。在最佳条件下，用这个方法测定了水产品中的 痕量硒，当n = 6时，标准偏差为0. 0027〜0.0054，变异系数为 0.012-0.028，样品的加标回收率在9 5.2%〜104.6%之 间，结果较为满意。关键词：硒；水产品；预富集；氢化物发生原子吸收光谱法
2 5 4.
7
文章编号 • 1 0 0 5 —9 9 8 9 (2 Dete r m i n a —t i 0 n 0 fs
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收稿日期 : 2 0 0 6 — 0 9 — 2 9
5 4-），教授，湖南永洲人，主要从事分析化学和基 中图分类号：TS 文献标识码：A
作者简介：陈学泽（19 础化学的教学工作。
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样品测定的可行性。
取0 .2 2mg/mL葛根素标准溶液5mL如1.2所述方法进行测定，结果 见表2。 由表2可知，检测结果是未检出，而待测物实际浓度为0 .22mg/mL，根 据该方法原理来看是黄酮类物质与A13 +络合在碱性条件下显色，在5 10n m处有特征吸收峰从而进行测定，但在试验过程中并没有发现有显色反应出现， 而检测结果也确定了这点，从而证明对于葛根素含量丰富的物质的总黄酮的测定 不适合用NaNO2—Al(N03)3—NaOH体系分光光度法进行测定。 4小结
溶解定容用乙醇浓度对试验结果是有一定影响的，同时试验证明用6 0%乙醇来 进行溶解和定容样品的效果是最好的，并且其测定的线性和重复性都较好。
2 3 2
3.NaNO2—Al(N03)3—NaOH体系分光光度法不适用于对葛根 素含量丰富的样品进
行测定。 参考文献：
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