方法葡萄糖(GLU) 葡萄糖氧化酶终点法 目录 1.检测原理 2.标本采集与处理 2.1受检者的准备 2.2静脉采血 2.3抗凝剂 2.4标本处理 3.试剂 3.1试剂 3.2校准血清
3.3试剂与校准血清的稳定性4.仪器 5.操作 6.计算
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7.操作性能 7.1精密度 7.2准确度 7.3灵敏度 7.4可报告范围 7.5特异性 7.6干扰 8.参考值 9.临床意义 附录A:参数 1.检测原理
在葡萄糖氧化酶的作用下,β-D-葡萄糖氧化生成过氧化氢和葡萄糖酸。过氧化氢在过氧化物酶的存在下与苯酚、4-氨基安替比林氧化缩合成红色醌式染料。此染料在500nm处有最大吸收峰,其吸光度值与葡萄糖含量成正比。
GOD
β-D-葡萄糖+H 2O+O 2-----------H
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2O
2+D-葡萄糖酸 POD H 2O
2+4-氨基安替比林+苯酚----------醌亚胺(红色)+H 2O
2.标本采集与处理 2.1受检者的准备:
病人空腹12h,不饮酒24h后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。注意有无应用影响测试项目的药物。此外,对于体检者,采血的季节都应做相关记录,因为样本中各项目的含量有季节性变动,为了前后比较应在每年同一季节检验。应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
有些药物长期应用,可使患者糖代谢发生障碍,引起血糖增高,因而应当在使用这些药物期间定期监测血糖,避免引起高血糖。常用药物中可致血糖增高的有以下几类。
糖皮质激素:糖皮质激素药物如强的松、氢化可的松、抗炎松等,临床应用广泛。糖皮质激素可通过三条途径影响糖代谢:(1)增强糖元分解;(2)使糖异生途径活动;(3)减少外周组织对葡萄糖的作用,因而血糖升高。如果大剂量或长期使用糖皮质激素治疗,应密切监测血糖,根据情况适当减少剂量或配合降糖药物应用。
甲状腺制剂:甲状腺激素(甲碘胺、甲状腺素、甲状腺球蛋白),可以促进葡萄糖的吸收,加速糖元分解及糖异生,使血糖增高。因而应用甲状腺制剂时应严密观察,特别是糖尿病病人需用甲状腺制剂
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时应慎重给药。
肾上腺素:肾上腺素可动员肝及肌肉的糖元分解,使血糖升高。一般来说,肾上腺素及拟肾上腺素制剂很少会长时间就用,所以对血糖的影响不大。
利尿剂:噻唪类利尿剂长时间应用,可使病人的糖耐量降低而升高血糖,可能是抑制胰岛素分泌或使糖元分解的缘故。噻唪类利尿剂致高血糖大多出现在用药2-3个月后,停药能自行恢复。
避孕药:包括雌激素与黄体酮样衍生物,这些药物均具有降低糖耐量和升高血糖的作用。因此患有糖尿病的育龄妇女,不能服用这些避孕药。
异烟肼:异烟肼是抗结核病的一线药物,治疗结核病时用药期至少在半年以上。长期用异烟肼可影响糖代谢,使糖耐量降低,因此在用药期间应定期检查血糖并采取相应措施。当糖尿病合并肺结核时,异烟肼忌与磺脲类降糖药合用,否则可能产生不可逆糖尿病。其它:如烟酸及其衍生物、吩噻嗪类药物、生长素、促肾上腺皮质激素、双香豆素、去甲基麻黄碱等药物,均有增高血糖浓度的作用,使用时应注意监测血糖,避免引起高血糖或糖尿。
2.2静脉采血:
除非是卧床的病人,一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布,会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟,一般从肘静脉取血,使用止血带的时间不超过1分钟,穿刺成功后立即松开止血带。
2.3抗凝剂: 血浆使用EDTANa
2(1mg/mL)作为抗凝剂。
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2.4标本处理:
血标本室温放置30min~45min后离心分离血清或血浆,在两小时内检测完毕;如两小时内不能检测完毕,将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8℃保存。
3.试剂 3.1试剂:
本科使用湖南永和阳光科技有限责任公司GLU试剂盒,为液体单一试剂,各组分如下:组成 磷酸盐缓冲液
葡萄糖氧化酶(GOD) 过氧化物酶(POD) 变旋酶
4--氨基安替比林 苯酚 稳定剂 3.2:校准血清
使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的40项校准血清。 校准频次:
空白定标:每日需做试剂空白定标。
全点定标:试剂换批号使用时或质控结果超过规定的2SD范围,需要全点定标。
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3.3试剂与校准血清的稳定性:
原包装试剂储存在2-8℃至标签所示失效日期。试剂开瓶后,在仪器中至少可保存30天。 浓度
0.1mmol/L PH=7.5 >15u/mL >1.5U/mL >2.0U/mL 0.25mmol/L 0.75mmol/L
试剂储存在18-22℃稳定28天,试剂应避免污染。试剂颜色为无色至浅粉色,当试剂变色或者在546nm的吸光度高于0.15ABS,按照试剂失效处理。
多项校准血清在2-8℃储存至标签所示失效日期,复溶后-20℃保存,可稳定一个月,只可冻融一次,避免反复冻融。参见校准血清说明书。
试剂盒配备的水标准液在2-8℃储存至标签所示失效日期,开瓶后2-8℃储存避免污染,可稳定2个月。
4.仪器
KONELAB30型号仪器。
性能:波长500nm,仪器测定吸光度的灵敏度应达到0.001ABS以上。
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5.操作
样品为血清或肝素/EDTA抗凝血浆。本法为终点法。参数见后附,附录A。 试剂参数设置、定标操作以及样本检测常规操作,见仪器操作规程。 6.计算 A 测定
C=————×C 0 A 标准
式中:c——测定葡萄糖浓度,g/L;A
测定——标本管吸光度; A
标准——标准管吸光度; C
O——校准血清葡萄糖浓度,g/L;
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7.操作性能 7.1精密度:
批内CV<0.25%,批间CV<1.87%。 7.2准确度:
检测结果的相对不准确度≤±10%。 7.3灵敏度:
葡萄糖浓度为:10mmol/L时,显色吸光度为0.558~0.660。 7.4可报告范围:
血清与试剂用量之比为1:100时,测定上限为27.8mmol/L。 7.5特异性:
测量值在给定值的90%-110%范围内。7.6干扰:
内源性干扰物溶血为1000mg/ml、脂血2000mg/ml、黄疸30mg/ml、抗坏血酸80mg/ml对测试结果无明显影响。
8.参考值
4.16~6.44mmol/L。 临床意义
血糖(英文名称:glucose)测定试剂盒用于定量测定血清中葡萄糖的含量。
葡萄糖是存在于人体血液中最主要的碳水化合物,葡萄糖浓度的测定常用于内分泌功能的检查。血
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糖增高常见于甲状腺机能亢进、糖尿病等;血糖降低常见于胰岛素增多症、胰腺癌等。
附录A:参数
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