白藜芦醇对缺血再灌注小鼠神经干细胞增殖作用的研究

・４８４・　中华神经外科疾病研究杂志（Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ　Ｄｉｓ　Ｒｅｓ）２０１０：９（６　文章编号：１６７１—２８９７（２０１０）０９—４８４—０４　・脑血管病・　白藜芦醇对缺血再灌注小鼠神经干细胞增　殖作用的研究　张永强　程岗　章薇　曹卫东　高大宽　章露华　章翔　（第四军医大学西京医院神经外　科，陕西西安７１００３２）　摘要目的研究白藜芦醇对小鼠缺血再灌注后海马区神经干细胞增殖的影响，探讨其促进缺　１５只雄性ＢＡＬＢ／ｃ小鼠随机分为缺血再灌注组、白藜芦醇　血再灌注后神经功能恢复的机制。方法组及假手术组，采用大脑中动脉线栓法制作局灶性脑缺血模型，Ｂｒｄｕ标记增殖的干细胞，免疫组化法　测定增殖细胞数。结果　白藜芦醇组与缺血再灌注组相比Ｂｒｄｕ阳性细胞数存在差异。结论　白藜　芦醇可以促进小鼠缺血再灌注后海马区神经干细胞的增殖，可能在其促进缺血后神经功能恢复中发　挥作用。　关键词　白藜芦醇；神经干细胞；　Ｂｒｄｕ；脑缺血　中国图书资料分类号　Ｒ　７４３文献标识码Ａ　ｎ　ｏｂｒａｉｎ　ｉ￣ｍ．ｙ　７１（Ｅ８２，　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｉ　０Ｉｌ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｆｎ哪Ｉｏ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ａ　ｎ如　Ｉｎ０ｄｄ　ｏｆｉｓｄｍａｉａ－￣ＺＨＡＮＧ　Ｙｏｎｇｑｉａ￣，ＣＨＥＮＧ　，ＺＨＡＮＧ　Ｗｅｉ，ＣＡＯ　Ｗｅｉｄｏｎｇ，ＧＡＯ　Ｄａｌａｌａｎ，ＺＨＡＮＧｂａｈｕａ，ＺＨＡＮＧＸｉａ．ｇ　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆＮｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ，　Ｃｈｉｎａ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｆ　ｏＣｌｉ￣ａｌ　Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｆｏｕｒｔｈ施ｚ赶ｄ　Ｍｅｄ／ｃａ／Ｕｎ／ｅｒｒｓ／ｔｙ，　Ａｈｓｔｒａｄ　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｅｆｅｃｔ　０ｆ　ｒｅｓｖｅｒａｎ￣ｌ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎｅｕｒｌａ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ａ　ｎ∞Ｉｌｓｅ　ｒｒｏｄｄ　ｏｆ　ｉｓｃｈｅｎ￣ａ－ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ　ｂｒａｉｎ　ｉｎｊｕｒｙ　ａｎｄ　ｔｏ　ｉｎｖｅｓｉｔｇａｔｅ　ｈｔｅ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｉｔｓ　ｐｒｏｔｃｔｅｉｏｎ　ｆｎｅｏｌｌｒｏｎｓ　ｆｒｏｍｉｎｊｕｒｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｆｉｆｔｅｅｎ　ｍａｌｅ　ＢＡＩ＿Ｂ／ｃ　ｎｆｉｅ　ｗｅｒｅ　ｒｃａｎｄｏｍｌｙ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　ｔｈｒｅｅ　ｇｒｏｕｐｓ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ｉｓｃｈｅｒｒｉｆａ－ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ　ｇｒｏｕｐ，ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ－　ｔｒｅａｔｄ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｓｈａｍ　ｏｐｅｒａｔｅｉｎ　ｇｒｏｏｕｐ．Ｉｓｃｈｅｎ￣ａ－ｒｅｐｅｆｆｕｓｉｏｎ　ｍｏｄｅｌｓ　ｗｅｒｅ　ｐｒｅｐ￣ｂｙ　ｎｆｉｄ￣ｅ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ａｒｔｅｒｙ　ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ．　Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｎｏｌｌ￣ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ｗｅｒｅ　ｍａｒｋｅｄ　ｂｙ　Ｂｒｄｕ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｎｕｒｏｂｅｒ　ｏｆ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｄ　ｃｅｅｌｌｓ　ｗａｓ　ｍｅａｓｕｒｅｄ　ｂｙ　ｉｎｍｌｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ｓｔａｉｎｉｎｇ．１￣ｓｕｌｔｓ　３ｈｅｒｅ　ｗａｓ　ｓｔａｔｉｓｔｉｃ　ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　Ｂｒｄｕ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｃｅｌｌｓ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｉｓｃｈｅ￣ａ－ｒｅｐｅｆｆｕｓｉｏｎ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｒｅｓｖｅｒａｔｏｌｒ—ｔｒｅａｔｄ　ｇＴｏｕｐ．Ｃｏｔｅ￣ｌｕｓｉｏｎ　Ｒｅｓｖｅｒａｔｏｌｒ　ｃａｎ　ｐｒｏｍｏｔｅ　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎｅｕｒａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ＫｐＩ）０ｃａ瑚ｐｕｓ　ａｆｔｅｒ　ｉｓｃｈｅｒ￣ｉｆａ－ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ　ｂｒａｉｎ　ｉｎｊｕｒｙ，ｗｈｉｃｈ　ｗａｙ　ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｎｅｕｒａｌ　ｐｒｏｔｃｔｅｉｏｎ　ｏｆ　ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ　ａｆｔｅｒ　ｉｓｃｈｅｎ＇／ｃ　ｂｒａｉｎ　ｍｙ．　Ｋｅｙ、】Ｉ】Ｄｒ凼Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ；Ｎｅｕｒａｌ　ｓｔｅｍ　ｅｃｌｌｓ；Ｂｒｄｕ；Ｉｓｃｈｅｔｒｉｆｃ　ｂｒａｉｎ　ｉｊｎｕｒｙ　白藜芦醇（３，５，４一三羟基均二苯乙烯）最早于　１９４０年在白藜芦根茎中发现并于１９６３年从中国传　统中药虎杖根茎中被提取　。最初白藜芦醇主要　９和氧化物增殖活性剂受体．仅的表达，诱导脑缺血血　管的新生，发挥脑缺血后的神经保护功能　引。本研　究旨在通过观察白藜芦醇预处理对小鼠脑缺血再灌　作为植物抗毒素来研究，近年来大量研究表明白藜芦　醇具有广泛的生物学效应，具有延缓肿瘤进程　、防　治心血管疾病　及脑缺血损伤　等作用。我们的　研究表明白藜芦醇预灌注能够调节基质金属蛋白酶．　基金项目：国家自然科学基金资助项目（３０３７０５１２、３０６７２６６３）　作者简介：张永强，博士研究生，电话：（０２９）８４７７５３３０，Ｅ—ｍａｉｌ：　ｚｈａｎｇｙｑ１９８３＠ｇｍａｉｌ．ｃｏｒｎ　注后内源性神经干细胞增殖状况的影响，为白藜芦醇　脑缺血保护机制的研究提供新的思路。　材料与方法　一、实验动物　ｌ５只健康雄性ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，体质量（２２±２）ｇ，　普通级，购于第四军医大学实验动物中心。　二、主要试剂与仪器　通讯作者：章翔，教授、主任医师，博士生导师，电话：（０２９）　８４７７１３２３，Ｅ—ｍａｉｌ：ｘｚｈａｎｇ＠ｆｍｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ　中华神经外科疾病研究杂志（Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ　Ｄｉｓ　Ｒｅｓ）２０１０；９（６　白藜芦醇，Ｓｉｇｍａ公司；８－０手术缝合线，上海医　疗器械厂；齿科用硅胶树脂及硬化剂，德国Ｈｅｒａｅｕｓ　Ｋｕｌｚｅｒ公司；显微手术器械，美国Ｋｅｎｔ　Ｓｃｉｅｎｔｉｉｆｃ公　ＰＢＳ浸洗３次，每次５　ｍｉｎ；滴加ＤＡＢ工作液，３７￣Ｃ孵　育观察显色；苏木精复染，盐酸酒精分化；自来水冲洗　５～１０　ｍｉｎ；酒精梯度脱水，二甲苯中透明，中性树胶　封片，显微镜下镜检。　司；双极电凝，上海医疗器械厂；ＴＧＬ２　１６Ｃ型高速离　心机，上海安亭科技有限公司；ＳＯＲＶＡＬＬ　Ｓｕｐｅｒ　Ｔ２１　高速低温离心机，Ｋｅｎｄｒｏ公司；计算机辅助图像分析　系统，日本Ｏｌｙｍｐｕｓ公司；５一溴脱氧尿嘧啶核苷（５一　ｂｒｏｍｏｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅ，Ｂｒｄｕ），Ｓｉｍａ公司；小鼠Ｂｒｇｄｕ抗　５．统计学处理：用ＳＰＳＳ统计学软件进行统计学　处理，所有数据用ｘ±Ｓ表示。组间比较采用方差分　析，Ｐ＜０．０５认为具有统计学意义。　结　果　体，第四军医大学神经生物学实验室馈赠。　三、方法　１．动物分组及模型制备：小鼠随机分为缺血再　灌注组、白藜芦醇组及假手术组。将白藜芦醇溶于已　一、神经行为学评分　缺血再灌注后的小鼠在１　ｄ，７　ｄ及１４　ｄ分别进　配置好的１％羟甲基纤维素生理盐水中，　行神经行为学评分，白藜芦醇处理组与单纯缺血对照　组相比神经功能有明显改善（Ｐ＜０．０５，图ｌ，假手术　组神经功能正常，未在图表内显示）。　５０　ｍｇ／（ｋｇ・ｄ）灌胃强饲，单纯缺血组以生理盐水灌　胃，共７　ｄ。参照高大宽等　方法建立小鼠大脑中动　脉栓塞模型（ｍｉｄｄｌｅ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ａｒｔｅｒｙ　ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ，　ＭＡＣＯ），具体步骤如下：用２％戊巴比妥钠腹腔注射　（５０　ｍｇ／ｋｇ）麻醉小鼠后，置于手术台上，正中切开颈　部皮肤，经颈外动脉将已制备好的硅胶包裹的８－０尼　龙纤维线段头端送至左侧大脑中动脉起始部，阻塞血　２　供，２　ｈ后抽出线段，恢复血供。动物清醒后，参照　Ｍｅｎｚｉｅｓ等　评分标准，０分：无神经功能缺损；１分：　不能完全伸展左侧前爪；２分：向左侧转圈；３分：行走　８　∞　鲁　羔　时向左侧倾倒；４分：不能自发行走，有意识障碍。各　组评分为０分者淘汰。　２．Ｂｒｄｕ标记：小鼠术后１～１４　ｄ，以细胞增殖Ｓ　期标记物Ｂｒｄｕ按照５０　ｍｒ／ｋｇ腹腔注射，每天２　次¨　。小鼠于造模成功后１４　ｄ过量麻醉下取脑后　固定鼠脑，石蜡包埋。　图１　各组小鼠神经行为学评分　Ｆｉｇ１　Ｎｅｕｒｏｌ‘’ｇｉｃａｌ　ｂｅｈａｖｉｏｒ　ｓｏｏｒｅｓ　ｏｆｍｉｃｅｉｎ　ｅａｃｈ　ｇｒｏｕｐ（｝：Ｐ＜Ｏ．０５）　ＲＧ：Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ—ｔｒｅａｔｅｄ　ｇｒｏｕｐ；ＩＧ：ｌｓｃｈｅｍｉａ—ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ　ｇｒｏｕｐ　３．ＨＥ染色：石蜡标本按１０　ｍ切片，二甲苯脱　蜡，酒精梯度脱水；清水冲洗后苏木精染色约３　ｍｉｎ，　盐酸酒精分化，返蓝，伊红染色；自来水冲洗；酒精梯　度脱水，二甲苯中透明，中性树胶封片。　４．免疫组织化学ｓＰ法染色：步骤参考Ｌｉｕ等的　方法改进…　，石蜡切片经二甲苯脱蜡，酒精梯度脱　水；０．０１　ｍｏｌ／Ｌ　ＰＢＳ浸洗３次，每次５　ｍｉｎ；３％Ｈ２Ｏ２　室温孵育１５　ｍｉｎ；ＰＢＳ浸洗３次，每次５　ｍｉｎ；加入　二、ＨＥ染色结果　小鼠在缺血再灌注后１４　ｄ灌注取材，ＨＥ染色显　示白藜芦醇处理组缺血面积明显减少，缺血区的炎症　细胞较对照组减少，并且缺血区域有较好的结构重建　（图２）。　０．０１　ｍｏｌ／Ｌ枸橼酸盐缓冲液高压蒸汽修复１００　Ｓ；自　然冷却后ＰＢＳ浸洗３次，每次３　ｍｉｎ；２　ｍｏｉ／Ｌ　ＨＣＬ　３７℃孵育３０　ｍｉｎ；硼酸缓冲液浸洗２次，每次５　ｍｉｎ；　０．０１　ｍｏｌ／Ｌ　ＰＢＳ浸洗３次，每次５　ｍｉｎ；滴加含Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ　１００的山羊血清封闭液室温孵育１　ｈ；ｌ：５００稀释　浓缩型小鼠抗Ｂｒｄｕ抗体，取１滴覆盖标本，阴性对照　以ＰＢＳ替代一抗，４℃过夜；ＰＢＳ浸洗３次，每次５　ｍｉｎ；加生物素标记的二抗工作液，３７℃孵育５０　ｍｉｎ；　图２缺血区ＨＥ染色结果（×４０）　Ｆｉｇ　２　ＨＥ　ｓｔａｉｎｉｎｇ　ｏｆ　ｉｓｃｈｅｍｉｃ　ｂｒａｉｎ　ｔｉｓｓｕｅ　ｉｎ　ｅａｃｈ　ｇｒｏｕｐ（ｘ　４０）　Ａ：Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ—ｔｒｅａｔｅｄ　ｇｒｏｕｐ；Ｂ：Ｉｓｃｈｅｍｉａ—ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ　ｇｒｏｕｐ．　中华神经外科疾病研究杂志（Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ　Ｄｉｓ　Ｒｅｓ）２０１０；９（６　三、免疫组织化学染色结果　小鼠在缺血再灌注后１４　ｄ，海马区可见Ｂｒｄｕ染　色阳性的增殖细胞，并且与缺血再灌注组相比白藜芦　醇预饲组Ｂｒｄｕ阳性细胞数目明显增多说明了白藜芦　醇可以促进海马区神经干细胞的增殖（图３）。　图３海马区　ＩＩＪ免疫组织化学染色结果　Ｆｉｇ　３　Ｂｒｄｕ　ｓｔａｉｎｉｎｇ　ｏｆ　ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ　ｏｆ　ｍｏｕｓｅ　ｉｎ　ｅａｃｈ　ｇｒｏｕｐ　Ａ：Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ—ｔｒｅａｔｅｄ　ｇｒｏｕｐ（×２００）；Ｂ：Ｉｓｃｈｅｍｉａ—ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ　ｇｒｏｕｐ（×２００）；Ｃ：Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ—ｔｒｅａｔｅｄ　ｇｒｏｕｐ（×４００）；Ｄ：Ｉｓｃｈｅｍｉａ－ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ　ｇｒｏｕｐ　（×４００）．　讨　论　能够促进心肌缺血后心脏干细胞的分化，改善心脏缺　血后的功能　ｊ。本实验研究表明，白藜芦醇预灌注　缺血性脑卒中后脑组织缺血、缺氧以及氧自由基　产生、钙离子超载等ｌｌ　，可引起神经细胞以及胶质细　可以减少脑缺血面积，促进小鼠缺血再灌注恢复期神　经功能的恢复，我们还观察到白藜芦醇预灌注可以明　显的诱导缺血后海马区原始细胞的增殖，因此推断其　机制可能是白藜芦醇通过改善脑缺血后局部的微环　胞变性、坏死，进而导致不同程度的神经功能缺损。　研究发现脑缺血后可以引发多种炎症细胞和炎性物　质参与的炎症反应，尤其在再灌注阶段，多种免疫和　炎症细胞的活化，释放出大量的细胞因子和趋化因子　等，导致缺血灶周围内环境的进一步恶化　，阻碍了　神经功能的熏建和恢复。研究表明在炎症的影响下，　腑缺血后迁移到梗死区的神经前体细胞存活和生长　受到严重抑制　。综合上述原囚，并且目前缺血性　脑卒中缺乏有效的治疗手段，缺血性脑卒中后生存者　约有９０％存在不同程度的神经功能缺损。　白藜芦醇于９Ｏ年代被发现存在于红酒中，并且　具有明显的心血管保护作用　”，使其越来越受到关　注。研究发现白藜芦醇具有神经保护作用　，在一　项关于氧糖剥夺模型的观察中，作者提出白藜芦醇预　处理与缺血预处理在神经保护的作用上具有相似　性　。另外，研究证实在脑缺血中自藜芦醇可以通　过诱导氧化磷酸化的基因表达和增强线粒体的稳定　性起到神经保护作用¨　。白藜芦醇还可以通过蛋　境、抑制炎症反应，促进和诱导内源性神经干细胞的　增殖和分化，从而促进缺血区域结构的重建和神经功　能恢复。并且研究表明白藜芦醇可以调节缺血再灌　注恢复期各种促血管生成因子的表达，促进缺血区域　的血管再生和血流恢复　，为神经干细胞的迁移和　分化提供基础。　本研究提示白藜芦醇预饲可以促进缺血后海马　区内源性神经干细胞的增殖和分化，改善神经功能　预后，为白藜芦醇治疗缺血性脑卒中的试验研究和临　床应用提供了理论依据。　参考文献　白激酶Ａ、蛋白激酶ｃ等多种激酶的活性影响神经元　内能量代谢的稳定，从而发挥其神经保护作用　那Ｊ。　研究还发现，白藜芦醇能够通过其广泛的抗炎抗氧化　活性发挥对多种干细胞的保护作用。白藜芦醇能够　抑制乙醇引起的胚胎干细胞的凋亡　，能够抑制白　细胞介素１、促进骨髓问充质干细胞的分化’　Ｊ，并且　中华神经外科疾病研究杂志（Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ　Ｄｉｓ　Ｒｅｓ）２０１０；９（６　・４８７・　５　Ｗａｎｇ　Ｑ，Ｘｕ　Ｊ，Ｒｏｔｔｉｎｇ｝ｌａｕｓ　ＧＥ，ｅｔ　ａ１．Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ　ｐｒｏｔｅｃｔｓ　ａｇａｉｎｓｔ　ｇｌｏｂａｌ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｉｓｃｈｅｍｉｃ　ｉｎｊｕｒｙ　ｉｎ　ｇｅｒｂｉｌｓ［Ｊ］．Ｂｒａｉｎ　Ｒｅｓ，２００２，９５８　（２）：４３９—４４７．　６　Ｓｉｎｈａ　Ｋ，Ｃｈａｕｄｈａｒｙ　Ｇ，Ｇｕｐｔａ　ＹＫ．Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ　ａｇａｉｎｓｔ　ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｓｔｒｅｓｓ　ｉｎ　ｍｉｄｄｌｅ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ａｒｔｅｒｙ　ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ　ｍｏｄｅｌ　ｏｆ　ｓｔｒｏｋｅ　ｉｎ　ｒａｔｓ［Ｊ］．Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉ，２００２，７１（６）：６５５—６６５．　７　Ｃｈｅｎｇ　Ｇ，Ｚｈａｎｇ　Ｘ，Ｇａｏ　Ｄ，ｅｔ　ａ１．Ｒｅｓｖｅｒａｔｏｒｌ　ｉｎｈｉｂｉｔｓ　ＭＭＰ－９　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｂｙ　ｕｐ—ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ　ＰＰＡＲ　ａｌｐｈａ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ａｎ　ｏｘｙｇｅｎ　ｕｃ０ｓｅ　ｄｅｐｒｉｖａｔｉｏｎ—ｅｘｐｏｓｅｄ　ｎｅｕｒｏｎ　ｍｏｄｅｌ［Ｊ］．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ　Ｌｅｔｔ，２００９，　４５１（２）：１０５—１０８．　８　Ｄｏｎｇ　Ｗ，Ｌｉ　Ｎ，Ｇａｏ　Ｄ，ｅｔ　ａ１．Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ　ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ　ｉｓｃｈｅｍｉｃ　ｂｒａｉｎ　ｄａｍａｇｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｄｅｌａｙｅｄ　ｐｈａｓｅ　ａｆｔｅｒ　ｓｔｅｒｋｅ　ａｎｄ　ｉｎｄｕｃｅｓ　ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ　ＲＮＡ　ａｎｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｘｐｒｅｓｓ　ｆｏｒ　ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ　ｆａｃｔｏｒｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｖａｓｃ　Ｓｕｒｇ，２００８，４８　（３）：７０９—７１４　９　Ｇａｏ　Ｄ，Ｚｈａｎｇ　Ｘ，Ｊｉａｎｇ　Ｘ，ｅｔ　ａ１．Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ　ｒｅｄｕｃｅｓ　ｔｈｅ　ｅｌｅｖａｔｅｄ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　ＭＭＰ－９　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｉｓｃｈｅｍｉａ—ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ　ｉｎ　ｍｉｃｅ［Ｊ］．Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉ，２００６，７８（２２）：２５６４—２５７０．　１０　Ｄａｒｓａｌｉａ　Ｖ，Ｈｅｌｄｍａｎｎ　Ｕ，Ｌｉｎｄｖａｌｌ　Ｏ，ｅｔ　ａ１．　Ｓｔｒｏｋｅ－ｉｎｄｕｃｅｄ　ｎｅｕｒｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｉｎ　ａｇｅｄ　ｂｒａｉｎ［Ｊ］．Ｓｔｒｏｋｅ，２００５，３６（８）：１７９０—１７９５．　１１　Ｌｉｕ　Ｆ，Ｙｏｕ　Ｙ，Ｌｉ　Ｘ，ｅｔ　ａ１．Ｂｒａｉｎ　ｉｎｊｕｒｙ　ｄｏｅｓ　ｎｏｔ　ａｌｔｅｒ　ｔｈｅ　ｉｎｔｉｒｎｓｉｃ　ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｐｏｔｅｎｔｉｌａ　ｏｆ　ａｄｕｌｔ　ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｎｅｕｒｅｓｃｉ，２００９，２９　（１６）：５０７５—５０８７．　１２　Ｈｏｓｓｍａｎｎ　ＫＡ．Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　ｔｈｅｒａｐｙ　ｏｆ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｓｔｒｏｋｅ　［Ｊ］．Ｃｅｌｌ　Ｍｏｌ　Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ，２００６，２６（７—８）：１０５７—１０８３．　１３　Ｌａｋｈａｎ　ＳＥ，Ｋｉｒｃｈｇｅｓｓｎｅｒ　Ａ，Ｈｏｆｅｒ　Ｍ．Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ｉｎ　ｉｓｃｈｅｍｉｅ　ｓｔｒｏｋｅ：ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｔｒａｎｓｌ　Ｍｅｄ，２００９，７：　９７．　１４　Ａｒｖｉｄｓｓｏｎ　Ａ，Ｃｏｌｌｉｎ　Ｔ，Ｋｉｒｉｋ　Ｄ，ｅｔ　ａ１．Ｎｅｕｒｏｎａｌ　ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ　ｆｒｏｍ　ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ　ｐｒｅｃｕｒｓｏｒｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ａｄｕｌｔ　ｂｒａｉｎ　ａｆｔｅｒ　ｓｔｒｏｋｅ［Ｊ］．Ｎａｔ　Ｍｅｄ，　２００２，８（９）：９６３—９７０．　１５　Ｓｉｅｍａｎｎ　ＥＨ，Ｃｒｅａｓｙ　ＬＬ．Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｈｙｔｏａｌｅｘｉｎ　ｒｅｓｖｅｒａｔｏｒｌ　ｉｎ　ｗｉｎｅ　ｆ　Ｊ］．Ａｍ　Ｊ　Ｅｎｏｌ　Ｖｉｔｉｃ，１９９２，４３（１）：４９—５２．　１６高大宽，章翔，蒋晓帆，等．白藜芦醇对小鼠脑缺血再灌注损伤　后ＭＭＰ。９蛋白的影响［Ｊ］．中华冲经外科疾病研究杂志，２００７，６　（２）：１００—１０３．　１７　Ｒａｖａｌ　ＡＰ，Ｄａｖｅ　ＫＲ，Ｐｅｒｅｚ　Ｐｉｎｚｏｎ　ＭＡ．Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ　ｍｉｍｉｃｓ　ｉｓｃｈｅｍｉｃ　ｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｂｒａｉｎ［Ｊ］．Ｊ　Ｃｅｒｅｂ　Ｂｌｏｏｄ　Ｆｌｏｗ　Ｍｅｔａｂ，２００６，２６　（９）：１１４１—１１４７．　１　８　Ｄｏｎｇ　Ｗ，Ｇａｏ　Ｄ，Ｚｈａｎｇ　Ｘ．Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ　ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ　ａｇａｉｎｓｔ　ｂｒａｉｎ　ｉｓｃｈｅｍｉｃ　ｓｔｒｏｋｅ（Ｊ］．Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｈｙｐｏｔｈｅｓｅｓ，　２００７，６９（３）：７００—７０１．　１９　Ｌａｇｏｕｇｅ　Ｍ，Ａｒｇｍａｎｎ　Ｃ，Ｇｅｒｈａｒｔ—Ｈｉｎｅｓ　Ｚ，ｅｔ　ａ１．Ｒｃｓｖｅｒａｔｏｒｌ　ｉｍｐｒｏｖｅｓ　ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｒｏｔｅｃｔｓ　ａｇａｉｎｓｔ　ｍｅｔａｂｏｌｉｃ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｂｙ　ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ　ＳＩＲＴ１　ａｎｄ　ＰＧＣ一１ａｌｐｈａ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ，２００６，１２７（６）：１１０９—　１ｌ２２．　２０　Ｄａｓｇｕｐｔａ　Ｂ，Ｍｉｌｂｒａｎｄｔ　Ｊ．Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ　ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ　ＡＭＰ　ｋｉｎａｓｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　ｎｅｕｒｏｎｓ［Ｊ］．Ｐｒｏｅ　Ｎａｉｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　ＵＳＡ，２００７，１０４（１７）：７２１７—　７２２２．　２１　Ｈｕａｎｇ　ＬＨ，Ｓｂｉａｏ　ＮＨ，Ｈｓｕｕｗ　ＹＤ，ｅｔ　ａ１．Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ　ｏｎ　ｅｔｈａｎｏｌ—ｉｎｄｕｃｅｄ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｉｎ　ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ａｎｄ　ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｉｎ　ｍｏｕｓｅ　ｂｌａｓｔｏｃｙｓｔｓ［Ｊ］．　Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，２００７，２４２（１—３）：１０９—１２２．　２２　Ｌｅｉ　Ｍ，Ｌｉｕ　ＳＱ，Ｌｉｕ　ＹＬ．　Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ　ｐｒｏｔｅｃｔｓ　ｂｏｎｅ　ｍａ￣ｏｗ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌ　ｄｅｒｉｖｅｄ　ｃｈｏｎｄｒｏｅｙｔｅｓ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｏｎ　ｃｈｉｔｏｓａｎ—　ｇｅｌａｔｉｎ　ｓｃａｆｆｏｌｄｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ一１　ｂｅｔａ［Ｊ］．　Ａｃｔａ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ　Ｓｉｎ，２００８，２９（１１）：１３５０—１３５６．　２３　Ｇｕｒｕｓａｍｙ　Ｎ，Ｒａｙ　Ｄ，Ｌｅｋｌｉ　Ｉ，ｅｔ　ａ１．Ｒｅｄ　ｗｉｎｅ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ－　ｍｏｄｉｆｉｅｄ　ｃａｒｄｉａｃ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅ　ｉｎｆａｒｃｔｅｄ　ｍｙｏｃａｒｄｉｕｍ［Ｊ］．Ｊ　Ｃｅｌｌ　Ｍｏｌ　Ｍｅｄ，２０１０，１４（９）：２２３５—２２３９．　（收稿１３期：２０１０—１１—０８；修回日期：２０１０—１１—２６）