尖叶富贵竹茎段组织培养技术研究

第２６卷　第３期　内蒙古民族大学学报（自然科学版）　Ｖｏ１．２６　Ｎｏ．３　２０１１年５月　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｉｎｎｅｒ　Ｍｏｎｇｏｌｉａ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｆｏｒ　Ｎａｔｉｏｎａｌｉｔｉｅｓ　Ｍａｖ　２０１１　尖叶富贵竹茎段组织培养技术研究　牛红云　，薛贵彬　，彭　木。，陈丽丽　，王文跃　，邵志敏　（１．黑龙江农垦职业学院，黑龙江哈尔滨１５００２５；２．金安环境公司，黑龙江哈尔滨１５０００１；　３内蒙古民族大学生命科学学院，内蒙古通辽０２８０００；４．内蒙古民族大学农学院，内蒙古通辽０２８０００）　［摘要］在无菌条件下以尖叶富贵竹茎段为外植体，对不同消毒时间和基本培养基、分化培养基与生根培养　基的ＰＧＲ进行了筛选．结果表明，采用０．１％升汞消毒５－６ｍｉｎ时效果最好；基本培养基为１／２ＭＳ培养基；诱导　分化的最佳培养基为１／２ＭＳ＋６一ＢＡ０．３ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０．１ｍｇ／Ｌ；生根培养基为１／２ＭＳ＋０．４ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ．　［关键词］尖叶富贵竹；茎段；组织培养　［中图分类号］Ｑ３　（文献标识码］Ａ　［文章编号］１６７１—０１８５（２０１Ｉ）０３－０２８１－０５　Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ｔｉｓｓｕｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｓｔｅｍ　ｏｆ　Ｄｒａｃａｅｎａ　Ｓａｎｄｅｒｉａｎａ　Ｖｉｒｖｅｎｓ　ＮＩＵ　Ｈｏｎｇ—ｙｕｎ　，ＸＵＥ　Ｇｕｉ—ｈｉｎｇ￣，ＰＥＮＧ　Ｍｕ　，ＣＨＥＮＧ　Ｌｉ—ｌｉ４，ＷＡＮＧ　Ｙｕｅ—ｗｅｎ４，ＳＨＡＯ　Ｚｈｉ－ｍｉｎ　（１．Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ　Ｎｏｎｇｋｅｎ　Ｖｏｃａｔｉｏｎａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｈａｅｒｂｉｎ　１５００２５，Ｃｈｉｎａ；２．Ｊｉｎａｎ　Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ　Ｃｏ．Ｌｔｄ，Ｈａｅｒｂｉｎ　１５０００１，Ｃｈｉｎａ；３．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｎｅｒ　Ｍｏｎｇｏｌｉａ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｆｏｒ　Ｎａｔｉｏｎａｌｉｔｉｅｓ，Ｔｏｎｇｌｉａｏ　０２８０００，　Ｃｈｉｎａ；４．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｉｎｎｅｒ　Ｍｏｎｇｏｌｉａ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｆｏｒ　Ｎａｔｉｏｎａｌｉｔｉｅｓ，Ｔｏｎｇｌｉａｏ　０２８０００，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｓｔｕｄｉｅｓ　０ｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｓｔｅｒｉｌｉｚｅ　ｔｉｍｅ　ｏｆ　ｅｘｐｌａｎｔ，ｔｈｅ　ｐｒｅｆｅｒａｂｌｅ　ｂａｓａｌ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐｒｅｆｅｒａｂｌｅ　ＰＧＲ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｒｏｏｔｉｎｇ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｅｘｐｌａｎｔ　ｓｔｅｒｉｌｉｚｅｄ　ｉｎ　０．１％ａｑｕｅｏｕｓ　ｍｅｒｃｕｒｉｃ　ｃｈｌｏｒｉｄｅ　ｆｏｒ　５—６ｍｉｎ　ｈａｓ　ｂｅｓｔ　ｅｆｌｅｅｔ：ｔｈｅ　ｐｒｅｆｅｒａｂｌｅ　ｂａｓａｌ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ｉＳ　１／２ＭＳ；ｔｈｅ　ｐｒｅｆｅｒａｂｌｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｉｓ：１／２ＭＳ＋６－ＢＡ３ｍｇ／Ｌ－４－ＮＡＡＯ．２ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０．１ｍｇ／Ｌ；ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐｒｅｆｅｒａｂｌｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ｏｆ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｉｓ：ｌ／２ＭＳ＋０．４ｍＩｇ／Ｌ　ＮＡＡ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｄｒａｃａｅｎａ　Ｓａｎｄｅｒｉａｎａ　Ｖｉｒｖｅｎｓ：ｔｈｅ　ｓｔｅｍ；Ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　富贵竹Ｄｒａｃａｅｎａ　Ｓａｎｄｅｒｉａｎａ　Ｖｉｒｖｅｎｓ）“　又名绿叶先仙龙血树，为百合科、龙血树属观叶花卉，原产于非洲西部，上个　世纪八十年代后，我国各地开始广泛栽培，是室内摆设的主要荫生植物之一．深受人们的喜爱．目前常见的还有三个变种，　一叫金边富贵竹，该品种茎杆较弱，需光照较多叶色才艳丽；二是银边富贵竹，茎杆较弱；三是尖叶富贵竹，叶尖细，节间　密，生长慢　．为了更好地满足市场的需求，本实验对尖叶富贵竹进行了组织培养的研究，以期通过组培快繁技术加速其繁　殖，为工厂化大生产奠定基础．　１试验与方法　１．１材料　水插尖叶富贵竹．　１．２方法　由于植物快繁时茎芽增殖有多种途径　，本实验采用增强腋芽生枝能力的途径进行组织培养快速繁殖．　１．２．１在ＭＳ培养基上进行最适消毒时间筛选　剪取幼嫩富贵竹的茎节，用流水冲洗３０ｍｉｎ以上，用７５％的酒精处理３０ｓ，置于Ｏ．１％升汞中消毒，时间分别设定２、３、４、　作者简介：牛红云，黑龙江农垦职业学院讲师，博士　２８２　内蒙古民族大学学报　２０１１年　５、７ｍｉｎ，然后用无菌水冲洗４～５遍，进行培养观察．　培养条件：ｐＨ５．８，培养室温度２５—２８％，每天光照１０ｈ，光强１５００１ｘ（以下同）．　１．２．２　基本培养基的筛选　将消毒处理过的外植体分别接种到ＭＳ、１／２　ＭＳ培养基中（其他成分相同），统计材料的褐化率，筛选适宜的培养基．培　养基的蔗糖用量３０　Ｌ，琼￣７ｇ／Ｌ，水解乳蛋白０．５ｇ／Ｌ，ｐＨ５．８．　褐化率（％）＝（褐化外植体数／接种的外植体数）ｘ　１００％．　１．２．３最适植物生长调节剂（ＰＧＲ）浓度配比的筛选　１．２．３．１丛生芽的诱导本试验以１／２ＭＳ培养基为基本培养基，并采用正交设计的实验方法，探索影响因子６一ＢＡ、ＮＡＡ、　ＫＴ对丛生芽诱导的最佳浓度配比，采用三因素三水平Ｌ９（３４）的实验设计，因素水平见表１．将消过毒的外植体分别接种到　共９个处理的培养基中，统计每个处理的分化率和增殖效率，利用直观统计分析方法筛选出最佳ＰＧＲ配比．　分化率＝（分化数，接种数）×１００％；　增殖率＝（２０天芽总数／接种数）×１００％．　表１丛生芽诱导ＰＧＲ各因素水平　Ｔａｂｌｅ　１　Ｔｈｅ　ｌｅｖｅｌｓ　０ｆ　ＰＧＲ　ｏｎ　ｂｕｄｓ　１．２．３．２生根诱导当富贵竹的芽长至１ｃｍ左右，将小苗从芽丛上分离下来，接种到附加不同浓度的ＩＢＡ（０．Ｉ￣０．４ｍｇ／Ｌ）、　ＮＡＡ（０．１￣０．４ｍｇ／Ｌ）培养基上，筛选出最合适的生根培养基．　２结果与分析　２．１最佳消毒时间　经过０．１％升汞不同消毒时间处理的富贵竹茎节培养一周后，调查污染率和褐化率，结果见表２．　表２升汞不同消毒时间对外植体的影响　Ｔａｂｌｅ　２　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｓｔｅｒｉｌｉｚｅｄ　ｔｉｍｅ　ｔｏ　ｅｘｐｌａｎｔ　由表２可以看出：Ｏ．１％升汞消毒５ｍｉｎ时，培养材料的污染率和褐化率均较低，随着消毒时间的增加，污染率明显降低，　但褐化率有所增加，因此可以得出０．１％升汞最佳消毒时间为５－６ｍｉｎ．　２．２基本培养基的筛选结果　将外植体分别接种到ＭＳ、１／２　ＭＳ、１／４　ＭＳ培养基中，每隔３ｄ统计外植体的褐化率，１５ｄ统计萌动率．从表３可以看出，ｌ，　２　ＭＳ和１／４　ＭＳ培养基外植体褐化率明显低于ＭＳ培养基，１／２ＭＳ的萌动率高于其它两种培养基，所以１／２　ＭＳ培养基效果　好．　第３期　牛红云等：尖叶富贵竹茎段组织培养技术研究　２８３　２．３　诱导丛生芽培养基中生长调节物质（ＰＧＲ）最佳浓度配比的筛选结果　将幼嫩带节的茎段接种到诱导芽分化培养基中，诱导分化出芽丛．在芽诱导中采用１／２ＭＳ基本培养基，激素选用　６－ＢＡ、ＮＡＡ、ＫＴ，采用三因素三水平的正交设计Ｌ９（３４），在培养２Ｏ天后对芽的分化率、增值率进行了调查，并对丛生芽平均　分化率进行方差分析和显著性检验（见表４、５）．　表４　ＰＧＲ浓度及配比对富贵竹芽分化的诱导效果　Ｔａｂｌｅ　４　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｈｏｒｍｏｎｅ　ｃｏｎｃｅｒｔｒａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｂｕｄｓ　表５正交实验方差分析　Ｔａｂｌｅ　５　Ｖａｒｉａｎｃｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　诱导丛生芽最佳ＰＧＲ为：６－ＢＡ３ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡＯ．２　ｍ￣／Ｌ＋ＫＴ０．１　ｍｇＬ．各种因素对诱导芽分化影响的主次顺序６一ＢＡ＞　ＫＴ＞ＮＡＡ．通过方差分析检验可知，以上三种因素对诱导丛生芽影响均显著．在茎尖和叶芽诱导分化试验中，６－ＢＡ与ＫＴ　促进细胞分裂，促进芽的分化与增殖，并且６一ＢＡ的作用稳定，ＫＴ活性较弱，单独使用效果不理想，６－ＢＡ、ＫＴ和ＮＡＡ搭　配使用效果要好．　２８４　２．４不同激素浓度对生根的诱导效果　内蒙古民族大学学报　２０１１缸　将诱导产生的健壮芽苗分别转接到生根培养基１－６　Ｊ２，进行生根培养，培养１５天后进行调查，结果见表６．生长素ＩＢＡ　不如ＮＡＡ的生根诱导效果好，芽苗在５号、６号培养基上生根率只有２８．２％和２１．３％，并且生长缓慢，根细弱呈绒毛状．芽苗　在３号培养基上分根效果最明显，高于其它组，分根率达９８．６％，并于一周后形成根系。比较根的生长情况，诱导生根的最佳　植物生长调节剂的组合为３：１／２ＭＳ＋０．４ｍｇ／ＬＮＡＡ．　表６不同生根培养基对生根的影响　Ｔａｂｌｅ　６　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｍｅｄｉｕｍ　ｏｎ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｒａｔｅ　３．５移栽　当小苗长至３－４片叶时进行移栽，移栽前试管苗先在实验室内打开瓶盖进行炼苗４～５ｄ，再用自来水冲净根部残留的培　养基，然后移入由泥炭土：河沙：腐叶土（１：１：２）组成的培养土中，荫蔽度为９０％保持高湿度，适当遮光培养，１０ｄ左右长出新　叶，成活率达到９０％以上．　３　讨论与结论　３．１讨论　本研究中０．Ｉ％ＨｇＣｌ：最佳消毒时间为５－６ｒａｉｎ，而林加耕“　对金边富贵竹的消毒时间为１０～１２ｒａｉｎ，这可能是由于外植体　生长的环境条件不同所导致．在基本培养基选择过程中发现Ｉ／２ＭＳ培养基能有效降低外植体的褐化率，并且在此培养基中　最先表现出萌动的迹象，而１／４ＭＳ培养的外植体虽然褐化率很低，但在培养的过程中萌动慢，并且萌动率低，这可能与营养　物质少，不能满足外植体需要有关．本试验中采用１／２ＭＳ培养基与田郎、谭海燕等所用的ＭＳ培养基　不同．目前基因工程在　植物育种中发挥着重要的作用，而利用基因工程手段来改良作物，首先需要建立一个高效的再生体系．在植物组织培养的　过程中，激素的配比对器官的发生有重大的影响．适宜浓度激素配比，促进富贵竹不定芽的产生，可以满足富贵竹转基因的　需要．　３．２　结论　富贵竹组织培养最佳消毒时间为用０．１％ＨｇＣ１：消毒时，消毒时间５－６ｍｉｎ，时间过长外植体的褐化程度加深；最佳基本　培养基为Ｉ／２ＭＳ，诱导丛生芽培养基中ＰＣＲ最佳浓度配比为Ｉ／２ＭＳ＋６一ＢＡ３ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０．１ｍｄＬ．生根培养基中加　入ＮＡＡ（０．４ｒａｇ／Ｌ）．待根长到４—５ｃｍ即可炼苗、移栽．　参考文献　［１］薛聪贤．景观植物实用图鉴　２辑．观叶植物２５６种［Ｍ］．广州，广东科技出版社，１９９９，２６—３２　（２］陆有通．富贵竹及其扦插栽培．广西热带农业（Ｊ］＿２００１，７８（１）：１８—１９．　［３］李浚明．植物组织培养教程（Ｍ］．北京：中国农业大学出版社，１９９６，３３１—３３７．　（４）林加耕，张树河．银边富贵竹组织培养及植株再生【Ｊ］．广西园艺，２００６，１７（６）：５—６．　［５］田郎，谭海燕．金边富贵竹的茎段培养及试管繁殖（Ｊ］．园艺学报，１９９９，２６（２）：１３３—１３４．　（责任编辑　徐寿军）