胡椒粉中胡椒碱两种测定方法的比较

福建分析测试Ｆｕｊｉａｎ　Ａｎａｌｙｓｉｓ＆Ｔｅｓｔｉｎｇ　胡椒粉中胡椒碱两种测定方法的比较　杨兴龙　一，丁红梅　，洪若瑜　，施炎炎　（１．苏州大学独墅湖校区材料与化学化工学部。苏州江苏２１５１２３；　２．南通市产品质量监督检验所。南通江苏２２６０００）　摘要：本文采用了无水乙醇回流法及无水乙醇超声提取法两种处理方法后分别利用液相色谱仪、紫外分光光度法　两种检测方法检测胡椒粉中的胡椒碱含量，通过比较确定了超声提取加液相色谱法是一种适宜实验室推广的方便、　高效、准确的检测方法。　关键词：胡椒粉；胡椒碱；提取方法　中图分类号：０６５７．文献标识码：Ａ文章编号：１００９—８１４３（２０１３）０４—０００２８—０３　Ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００９—８１４３．２０１３．０４．０６　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｗｏ　ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ　ｐｉｐｅｒｉｎｅ　ｉｎ　ｐｅｐｐｅｒ　Ｙａｎｇ　Ｘｉｎｇ－ｌｏｎｇｒ￣，Ｄｉｎｇ　Ｈｏｎｇ－ｍｅｉ２，Ｈｏｎｇ　Ｒｕｏ－ｙｕ１．，Ｓｈｉ　Ｙａｎ－ｙａｎ　（１．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　ａｎｄ　Ｍａｔｅｒｉａｌｓ　Ｓｃｉｅｎｃｅ＆Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｆ　ｏＯｒｇａｎｉｃ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｏｆ　Ｊｉａｎｇｓｕ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｓｏｏｃｈｏｗ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＳＩＰ，Ｓｕｚｈｏｕ　２１５　１２３，Ｃｈｉｎａ；　２．Ｎａｎｔｏｎｇ　Ｐｒｏｄｕｃｔ　Ｑｕａｌｉｔｙ　Ｓｕｐｅｒｖｉｓｉｏｎ　ａｎｄ　Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｎａｎｔｏｎｇ，ＪｉａｎｇＳｕ　２２６０００，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｐａｐｅｒ，ｔｈｅ　ｅｔｈａｎｏｌ　ｒｅｆｌｕｘ　ｍｅｔｈｏｄ　ａｎｄ　ｅｔｈａｎｏｌ　ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｗｅｒｅ　ｈａｎｄｌｅｄ，ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ｏｆ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ＵＶ　ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ　ｔｏ　ｄｅｔｅｃｔ　ｔｈｅ　ｐｅｐｐｅｒ　ａｌｋａｌｉ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｉｎ　ｐｅｐｐｅｒ．Ｂｙ　ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｔｈｅ　ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｗａｓ　ａ　ｓｕｉｔａｂｌｅ　ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｔｏ　ｐｒｏｍｏｔｅ　ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ，ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ａｎｄ　ａｃｃｕｒａｔｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄｓ．　Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｐｅｐｐｅｒ；Ｐｉｐｅｒｉｎｅ；Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　胡椒为胡椒科胡椒属多年生攀援状藤本植物，　是一种重要的热带香辛作物，素有“香料之王”的美　誉【１ｌ。胡椒碱为胡椒中的主要活性物质，在胡椒果中，　胡椒碱的含量为１．７％～７．４％Ｅ２１。近年来的研究表明，　的意义。　本文采用了无水乙醇回流法及无水乙醇超声　提取法两种处理方法后分别利用液相色谱仪、紫外　分光光度法两种检测方法检测胡椒粉中的胡椒碱　胡椒碱不仅能够增加人体对维生素Ｂ及Ｂ一胡萝　卜素的吸收，也能够增加机体热活性［３１。同时胡椒碱　在镇痛、镇静、抗炎、抗惊厥、杀虫、抗癌等多方面　也具有一定的功效Ｉ４］。另外，胡椒碱也是胡椒中的主　要辛辣成分。由于人们对胡椒辛辣味的喜好以及胡　椒碱所具有的生物活性，研究胡椒碱的鉴定和定性　含量，通过比较确定了超声提取加液相色谱法是一　种适宜实验室推广的方便、高效、准确的检测方法。　１　实验部分　１．１　仪器　定量分析对于胡椒及其制品的真假鉴别具有重要　收稿日期：２０１３—４—８　基金项目：国家质量技术监督检验检疫总局科技项目（项目编号２０１１ＱＫ１３５）；江苏科技厅科技项目（项目编号ＢＥ２０１１７０５）；南　通市科技局科技项目（ＣＰ２２０１２００１）　作者简介：杨兴龙（１９８１一），男，江苏南通人，工程师，从事色谱仪器检测工作。Ｅ—ｍａｉｌ：ｄｈｍ７８０１＠１２６．ｃｏｎ　通讯作者：洪若瑜（１９６６一），男，工学博士，博导，闽江学者省级特聘教授，化学工程专业。Ｅ－ｍａｉｈ　ｒｈｏｎｇ＠ｓｕｄａ．ｅｄｕ．ｃｎ　２０１３，２２（４）　杨兴龙等：胡椒粉中胡椒碱两种测定方法的比较　２９　Ａｇｉｌｅｎｔ　１２００高效液相色谱仪（配有二极管阵列　检测器）；　超声波清洗仪ＦＳ一１０１２ＦＰＭ（常州市富怡达超　声波设备有限公司）；　紫外分光光度计ｕＶ一２３００（日本岛津）。　１．２试剂　无水乙醇（分析纯），甲醇（色谱纯），超纯水（密　理博超纯水仪制的），胡椒碱标准品（纯度９９．５％，购　自上海安普公司）。　胡椒碱标准溶液：准确称取（１０±Ｏ．１）ｍｇ胡椒　碱物质于棕色烧杯中，用无水乙醇溶解转移至　ｌＯｍＬ棕色烧瓶，用无水乙醇定容至刻度，配成　ｌＯ００ｍｇ／Ｌ。　１．３处理方法　１．３．１回流法提取　称取胡椒粉试样０．５ｇ（精确至Ｏ．Ｏ００１ｇ），置于棕　色烧瓶中，加入５０ｍＬ乙醇装入回流冷凝管（用铝箔　纸包裹），加热至沸，保持回流３ｈ，冷却至室温后，将　溶液滤人ｌＯＯｍＬ棕色烧瓶中，用乙醇少量多次冲洗　抽提瓶和过滤器，洗液一并滤人容量瓶中，并加乙　醇至刻度。上机待测。　１＿３．２超声提取　称取胡椒粉试样０．５ｇ（精确至Ｏ．Ｏ００１ｇ），置于棕　色烧瓶中，加入５０ｍＬ乙醇超声提取３０ｍｉｎ后将溶　液滤人１００ｍＬ棕色烧瓶中，再用３０ｍＬ乙醇提取滤　渣１５ｍｉｎ后滤液并入棕色瓶中，用乙醇定容至刻　度。上机待测。　１．４检测方法　１．４．１高效液相色谱法　色谱柱：Ａｇｉｌｅｎｔ　ＴＣ—Ｃ１８，５　ｍ，１５０ｍｍ×　４．６ｍｍ；　流动相：甲醇：水＝７５：２５。　流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ；进样量：２０　Ｌ；柱温：３０￣Ｃ，　检测波长：３４３ｎｍ。　将样品待测液和标准曲线溶液（０．５、１．０、１．５、　２．０　ｇ／ｍＬ），分别注入仪器测定。　１．４．２紫外分光光度法　在３４２　ｎｍ波长下，用ｌｃｍ比色皿，将样品待测　液和标准曲线溶液（１、２、３、４、５　ｇ／ｍＬ），分别放入　仪器测定吸光度，绘制曲线得出样品含量。　２结果与讨论　２．１处理方法的比较　因为胡椒碱见光易分解，回流法所用容器必须　是棕色或者用铝箔包裹，回流法用ＨＰＬＣ测得同一　胡椒粉中胡椒碱的含量为３．１１％，回流法加标回收　率为８３．２％。回流法用紫外分光光度法测得同一胡　椒粉中胡椒碱的含量为３．８１％，回流法加标回收率　为８１．７％。　无水乙醇作为溶剂，超声提取３０　ｍｉｎ，ＨＰＬＣ测　定胡椒粉中胡椒碱的含量在４．６５％，加标回收率为　９５．７％。超声提取法用紫外分光光度法测得同一胡　椒粉中胡椒碱的含量为４．９９％，加标回收率为　９１．５％。　根据以上数据得出回流法具有提取时间长、耗　能大、杂质多、回收率低等缺点；超声波辅助有机溶　剂萃取法是一种从原料中萃取目标组分的现代分　离方法，它能够避免高温、高压对有效成分的破坏，　与传统的溶剂提取法相比，该方法萃取时间短、萃　取效率高、回收率高等优点。　根据处理方法的比对结果，我们在检测方法比　较时采用的处理方法为超声提取法。　２．２检测方法的线性关系　液相色谱法线性方程：Ｙ＝３．１１６Ｘ＋０．００６８；ｒ＝－Ｏ．　９９９７；　线性范围：０．１　１５０　ｇ／ｍＬ。　紫外分光光度法线性方程：Ｙ＝５．１１６Ｘ＋Ｏ．０１１８；　ｒ＝Ｏ．９９９１；　线性范围：１～５０　ｇ／ｍＬ。　２．３检测方法的准确度和精密度　液相色谱法（超声提取）用１　ｇ／ｍＬ、２　ｇ／ｍＬ加　标，回收率为９５．７％、９８．２％；相对标准偏差（ｎ＝６）为　１．９１％、１．８４％。　紫外分光光度法（超声提取）用１　ｇ／ｍＬ、　２　ｇ／ｍＬ加标，回收率为９１．５％、９２．８％；相对标准偏　差（ｎ＝６）为２．３８％、２．８４％。　２．４检测方法的检出限　液相色谱法线性检测限：１０ｍｇ＆ｇ　紫外分光光度法检测限：ｌ　Ｏ０ｍｇ／ｋｇ　２．５检测方法的比较结果　２．５．１标准品、样品色谱图及光谱图　３０　福建分析测试标准论坛　图１标准品色谱图　图２标准品光谱图　图３样品色谱图　２．５．２检测方法比较　通过回流和超声两种处理方法的比较发现超　紫外分光光度法是利用胡椒碱结构上的苯环　声提取时间短、萃取效率高、回收率高等优点。两种　以及共轭双键，因而具有独特的吸收光谱。胡椒碱　的乙醇溶液在紫外光谱区３４２　ｎｍ处有一个最大的　吸收峰。利用该峰建立了紫外分光光度计测定胡椒　碱含量的方法。该法测定的胡椒碱１～５０　ｇ／ｍＬ范　围内服从比耳定律。　检测方法高效液相色谱法和紫外分光光度法相比，　液相色谱线性范围广，测定值受干扰物影响小，回　收率高，适用大批量样品检测。　参考文献　【１］黄循精，黄艳．世界胡椒产销情况分析『Ｊ１＿中国热带农业，　２０１０，４（３５）：４７—４８．　液相色谱（ＨＰＬＣ）法是测定胡椒碱最成熟的方　法之一，它以其分离度高、准确、快速等优点在检测　生物活性物质领域得到广泛的应用，且其线性范围　也较紫外分光光度法广，可以达到０．１　１５０　ｇ／ｍＬ。　［２］Ａｎｏｎｙｍｏｕｓ，ｔｈｅ　ｗｅａｌｔｈ　ｏｆ　Ｉｎｄｉａ：ｒａｗ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ『Ｊ］．Ｃｏｕｎｃｉｌ　ｏｆ　ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　ａｎｄ　ｉｎｄｕｓｔｒｉ￣ｒｅｓｅａｒｃｈ。１９９８（８）：９９一ｌ１５．　［３】Ｋｕｍｏｒｏ　Ａ　Ｃ，Ｈａｒｃｈａｒａｎ　Ｓｉｎｇｈ　ａｎｄ　Ｍａｓｉｔａｈ　Ｈａｓａｎ．Ｓｏｌｕｂｉｌ－　ｉｔｖ　ｏｆ　Ｐｉｐｅｆｉｎｅ　ｉｎ　Ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｎｅａｒ　Ｃｒｉｔｉｃａｌ　Ｃａｒｂｏｎ　由于其他的生物碱例如胡椒林碱、胡椒亭碱以　及其他一些在此波长下也有吸收值的物质会对测　定的结果造成干扰．　因此紫外分光光度法测定的　胡椒碱含量通常会比高效液相色谱法偏高。　Ｄｉｏｘｉｄｅ【Ｊ１．Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，２００９，　１７（６）：１０１４—１０２０．　ｆ４】韦琨，窦德强，装玉萍，等．胡椒的化学成分、药理作用及　与卡瓦胡椒的对比［Ｊ］．中国中药杂志，２００２，２７（５）：　３２８－３３】．　３　总述