一、填空题 （每空0。5分，共40分)
1、我国一直以来高度重视实验室生物安全工作,国家陆续颁布了一系列法律、法规和标准,包括______________________________________________、_________________ __________________________等。各种菌(毒）株所需实验室的生物安全级别参见卫生部__________________________________有关规定。
2、尽管生物安全实验室内存在各种潜在感染的风险，但是随着人们认识的深入及实验室设备设施条件的改善，防范感染事件发生的能力不断得到提高。通过开展______________________________、确定________________________和___________ ___________、制定____________________和__________________等措施,将会减少或避免实验室感染事件的发生。
3、 二级实验室适用于进行我国危害程度分类为_____________和_____________________的病原微生物检测实验活动。
4、二级实验室在一级实验室的基础上，增加了_______________、_____________________等安全设备。
5、依据现行国家标准,三级实验室由_____________、_____________和_____________三部分组成.整个平面布局为_____________→_____________→_____________→_____________→_____________。
6、液体进行压力蒸汽灭菌时，液体体积不得超过__________________________。应该__________________________，保证蒸汽能够进入. 7、BSL-2实验室操作规范:
（1） 人员进入二级实验室,需经过__________________________，并经_____________________同意,方可进入；
(2) 进入实验室后,应做好_____________、___________等记录;
(3） 实验室工作人员根据工作内容，在实验室生物风险评估的基础上,选择并穿戴好___________________；通常情况下，应穿上鞋套,穿防护服或反穿式隔离服，戴好帽子、口罩、手套，必要时根据操作内容可戴上防护眼镜;戴帽子时，不应___________________； (4） 二级实验室内,各种可能产生___________的操作,应在生物安全柜内或其他物理保护装置中进行；
(5） 将实验所需物品放入生物安全柜，按照实验步骤进行操作;如果是两个人进行操作，相互
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应配合，但不能影响_____________________________; （6) 实验产生的废物，应该放在生物安全柜内的废物盒里;
（7） 实验结束后，首先撤出主要实验材料,随后再撤出剩余实验用品，实验废物应放在废物处理桶中并在二级实验室内进行灭菌;
(8） 撤离结束后,对安全柜内所用的物品进行消毒处理，实验废物放在废物桶中，还要对生物安全柜进行消毒处理；
（9） 实验产生的废物放在____________________中进行灭菌；
(10） 整个实验结束后，在实验室出口处脱去个人防护装备，脱去手套,脱去防护服，脱下防护眼镜、口罩，摘掉帽子,最后脱去鞋套;并仔细_______________；
(11） 在离开二级实验室之前，需要做好________________________________。
8、感染性物质的公路运输,需要申请单位____________________直接送往目的地。注意应__________________________，防止运输过程中感染性物质泄漏，以便紧急处理。
9、消毒和灭菌方法分为物理和化学两种方法.常用的物理灭菌方法有_______________ _、________________ __、______________________________等;化学法主要以化学消毒剂为主，根据消毒剂对微生物的杀灭种类和效果，可分为高效、中效和低效消毒剂，高效消毒剂包括含氯消毒剂(如次氯酸钠）、__________、____________________、戊二醛，中效消毒剂包括________、________，低效消毒剂有氯己定。
使用消毒剂时,注意__________________________,注意配制的期限;必要时需要定期更换、交替使用，避免微生物出现_______________ _。
10、国家根据病原微生物的传染性、感染后对个体或者群体的危害程度,将病原微生物分为四类： 第一类病原微生物，是指能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物,以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物.
第二类病原微生物，是指能够引起人类或者动物_______________,比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物。
第三类病原微生物,是指能够引起人类或者动物疾病，但一般情况下对人、动物或者环境不构成_______________,传播风险_________，实验室感染后很少引起_______________,并且具备有效治疗和预防措施的微生物.
第四类病原微生物，是指在通常情况下不会引起人类或者动物疾病的微生物。 _______________、_______________病原微生物统称为高致病性病原微生物. 11、请填写以下微生物的危害程度分类及各种实验活动所需生物安全实验室级别.
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实验活动所需生物安全实验室级别 种类 中文名 危害程度分类 病毒培养或大量活菌操作 未经培养的感染材料的操作或样本检测 BSL-3 灭活材料的操作 无感染性材料的操作 BSL-1 埃博拉病毒 第一类 BSL—4 BSL—2 SARS冠状病毒 艾滋病毒(I型和II型) 口蹄疫病毒 病毒 高致病性禽流感病毒 新城疫病毒 人乳头瘤病毒 甲型肝炎病毒 乙型肝炎病毒 丙型肝炎病毒 丁型肝炎病毒 戊型肝炎病毒 结核分枝杆菌 鲍曼不动杆菌 嗜水气单胞菌 空肠弯曲菌 肺炎衣原体 流感嗜血杆菌 肺炎克雷伯菌 嗜肺军团菌 细菌 单核细胞增生李斯特菌 鸟分枝杆菌 龟分枝杆菌 肺炎支原体 铜绿假单胞菌 鼠伤寒沙门菌 金黄色葡萄球菌 肺炎链球菌 创伤弧菌 小肠结肠炎耶尔森菌 BSL—2 BSL—3 BSL—2 BSL-3 BSL-3 BSL—2 12、 试剂技术部样品制备实验室最高只能进行可能含有_____________________ ______________________微生物的________________________________（此操作需要BSL—3实验室的SARS冠状病毒除外）.
13、出现下列情况之一，实验人员进入实验室工作区需经项目负责人、部门负责人审批：（1）
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_______________________________；（2） ________________________;（3)
____________________________________________________；(4）正在使用免疫抑制剂或免疫耐受；（5）妊娠期。
14、外部门或外单位人员进入试剂技术部样品制备实验室学习、工作等，该人员需接受相关的________________________，应经过__________________(附件1）（其中规定申请进入的人员须已阅读试剂技术部样品制备实验室____________ __________________和试剂技术部样品制备实验室__________________）,并遵守试剂技术部样品制备实验室管理制度。
15、实验人员在第一更衣室进行个人防护，进入实验室前和实验操作完毕后需填写________________________________________（附件2)(具体包括：________、________、________________、________________及________________），其中________________一项需详细记录。
二、问答题(共60分）
1、 二级实验室的基本结构？ （8分)
2、 BSL—1、2、3三类实验室的区别？（6分） 3、生物安全柜的作用和防护原理？ （5分) 答：
4、 实验室意外事件处理原则？实验室地面被污染如何处理?（6分） 5、生物安全柜的操作流程和注意事项？(11分）
6、 进入试剂技术部样品制备实验室，需要穿戴哪些个人防护装备？穿戴和解除装备的流程分别是怎样的？（10分）
7、 皮肤被刺伤如何处理？(5分） 8、实验完毕后的清场和操作？（4分) 9、离心管破裂应如何处理?(5分） 答案:
一、填空题 （每空0。5分，共40分）
1、我国一直以来高度重视实验室生物安全工作，国家陆续颁布了一系列法律、法规和标准,包括《病原微生物实验室生物安全管理条例》、国家标准GB19489《实验室 生物安全通用要求》等。各种菌（毒）株所需实验室的生物安全级别参见卫生部《人间传染的病原微生物名录》有关规定.
2、尽管生物安全实验室内存在各种潜在感染的风险，但是随着人们认识的深入及实验室设备
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设施条件的改善，防范感染事件发生的能力不断得到提高。通过开展实验室生物安全风险评估、确定实验室生物安全级别和个人防护装备、制定相应的标准操作规程和应急预案等措施，将会减少或避免实验室感染事件的发生.
3、 二级实验室适用于进行我国危害程度分类为第三类和少量第二类的病原微生物检测实验活动。
4、二级实验室在一级实验室的基础上，增加了生物安全柜、压力蒸汽灭菌器等安全设备. 5、依据现行国家标准，三级实验室由清洁区、半污染区和污染区三部分组成。整个平面布局为清洁区→缓冲区I→半污染区→缓冲区II→污染区。
6、液体进行压力蒸汽灭菌时，液体体积不得超过容器体积的2/3。应该把盖子旋松，保证蒸汽能够进入。
7、BSL-2实验室操作规范:
（1） 人员进入二级实验室，需经过相关生物安全培训,并经实验室负责人同意，方可进入; （2) 进入实验室后,应做好进入时间、姓名等记录;
（3） 实验室工作人员根据工作内容,在实验室生物风险评估的基础上，选择并穿戴好个人防护装备；通常情况下,应穿上鞋套,穿防护服或反穿式隔离服，戴好帽子、口罩、手套,必要时根据操作内容可戴上防护眼镜；戴帽子时,不应把头发漏在外面；
（4） 二级实验室内，各种可能产生气溶胶的操作,应在生物安全柜内或其他物理保护装置中进行;
（5） 将实验所需物品放入生物安全柜，按照实验步骤进行操作；如果是两个人进行操作,相互应配合，但不能影响生物安全柜内气流；
(6) 实验产生的废物，应该放在生物安全柜内的废物盒里;
（7) 实验结束后,首先撤出主要实验材料，随后再撤出剩余实验用品，实验废物应放在废物处理桶中并在二级实验室内进行灭菌；
（8) 撤离结束后,对安全柜内所用的物品进行消毒处理,实验废物放在废物桶中，还要对生物安全柜进行消毒处理;
（9） 实验产生的废物放在灭菌器中进行灭菌；
(10） 整个实验结束后，在实验室出口处脱去个人防护装备，脱去手套,脱去防护服,脱下防护眼镜、口罩,摘掉帽子，最后脱去鞋套;并仔细清洗手部;
（11) 在离开二级实验室之前，需要做好相关实验室使用的记录.
8、感染性物质的公路运输，需要申请单位两人专人专车直接送往目的地.注意应带上个人防护 5 / 11
用品，防止运输过程中感染性物质泄漏，以便紧急处理.
9、消毒和灭菌方法分为物理和化学两种方法.常用的物理灭菌方法有紫外线消毒、压力蒸汽灭菌、高效过滤器（HEPA)过滤除菌等；化学法主要以化学消毒剂为主,根据消毒剂对微生物的杀灭种类和效果,可分为高效、中效和低效消毒剂，高效消毒剂包括含氯消毒剂（如次氯酸钠）、甲醛、过氧乙酸、戊二醛，中效消毒剂包括乙醇、碘氟,低效消毒剂有氯己定.
使用消毒剂时，注意在有效期内使用，注意配制的期限;必要时需要定期更换、交替使用，避免微生物出现抗药性。
10、国家根据病原微生物的传染性、感染后对个体或者群体的危害程度,将病原微生物分为四类: 第一类病原微生物，是指能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物.
第二类病原微生物,是指能够引起人类或者动物严重疾病,比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物。
第三类病原微生物，是指能够引起人类或者动物疾病，但一般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限,实验室感染后很少引起严重疾病,并且具备有效治疗和预防措施的微生物。
第四类病原微生物，是指在通常情况下不会引起人类或者动物疾病的微生物。 第一类、第二类病原微生物统称为高致病性病原微生物。
11、请填写以下微生物的危害程度分类及各种实验活动所需生物安全实验室级别.
实验活动所需生物安全实验室级别 种类 中文名 危害程度分类 病毒培养或大量活菌操作 BSL—4 未经培养的感染材料的操作或样本检测 BSL-3 灭活材料的操作 BSL-2 无感染性材料的操作 BSL—1 埃博拉病毒 第一类 SARS冠状病毒 艾滋病毒（I型和II型) 病毒 口蹄疫病毒 高致病性禽流感病毒 新城疫病毒 人乳头瘤病毒 甲型肝炎病毒 乙型肝炎病毒 丙型肝炎病毒 丁型肝炎病毒 第三类 BSL—2 第二类 BSL—3 BSL—3 BSL—2 BSL—1 BSL-2 BSL—1 BSL-2 BSL-1 BSL—1 6 / 11
戊型肝炎病毒 结核分枝杆菌 鲍曼不动杆菌 嗜水气单胞菌 空肠弯曲菌 肺炎衣原体 流感嗜血杆菌 肺炎克雷伯菌 嗜肺军团菌 细菌 单核细胞增生李斯特菌 鸟分枝杆菌 龟分枝杆菌 肺炎支原体 铜绿假单胞菌 鼠伤寒沙门菌 金黄色葡萄球菌 肺炎链球菌 创伤弧菌 小肠结肠炎耶尔森菌 第三类 BSL—2 BSL—2 BSL-1 第二类 BSL-3 BSL-2 BSL—1 12、 试剂技术部样品制备实验室最高只能进行可能含有我国微生物危害程度第二类的微生物的未经培养的样本的检测(此操作需要BSL—3实验室的SARS冠状病毒除外）。
13、出现下列情况之一，实验人员进入实验室工作区需经项目负责人、部门负责人审批:（1）身体出现开放性损伤；（2）患发热性疾病;(3)呼吸道感染或其它导致抵抗力下降的情况;（4)正在使用免疫抑制剂或免疫耐受；（5)妊娠期。
14、外部门或外单位人员进入试剂技术部样品制备实验室学习、工作等，该人员需接受相关的生物安全培训,应经过审批流程(附件1）（其中规定申请进入的人员须已阅读试剂技术部样品制备实验室实验人员个人防护和试剂技术部样品制备实验室操作规范)，并遵守试剂技术部样品制备实验室管理制度.
15、实验人员在第一更衣室进行个人防护,进入实验室前和实验操作完毕后需填写《样品制备实验室出入记录》（附件2）（具体包括:日期、姓名、进入时间、离开时间及工作内容）,其中“工作内容”一项需详细记录。 二、问答题 （共60分）
1、 二级实验室的基本结构？ (4分，第一句0。5分，后面每条0。5分） 答：二级实验室除满足一级实验室的设计要求以外,增加以下内容：
（1） 实验室的门上标有国际通用的生物危害警告标志；
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（2） 实验室的门带锁,能自动关闭，有可视窗；
（3） 一般不需要特殊的通风设备，但可以设置有通风系统;若无,窗户应该能够打开，并安装有纱窗;
（4) 实验室内配备有II级生物安全柜，安装在离门和空调送风口较远的地方； （5) 实验室配备有压力蒸汽灭菌器;
（6） 实验室有可靠的电力供应和应急照明,可设有紫外灯; (7) 在靠近实验室出口的地方设有洗手池.
2、 BSL-1、2、3三类实验室的区别？(3分，每条1分）
答：由于三类实验室操作的微生物危害程度不同,因此三类实验室在布局和防护屏障、设施、设备要求上不同。
一级实验室不需要特殊的防护屏障；
二级实验室在一级实验室的基础上增加了生物安全柜和压力蒸汽灭菌器两个重要的设备； 三级实验室自成隔离区或独立建筑物，有明确的功能分区,具有独立的送、排风系统，气流由清洁区向污染区定向流动等.
3、生物安全柜的作用和防护原理？ （5分） 答：
作用：（2分）
生物安全柜是一个负压过滤排风柜，能迅速把产生的气溶胶过滤除掉，因此在其中操作原代培养物、菌株、毒株、诊断性标本等感染性物质时，可以保护操作者本人、实验室环境以及实验材料，避免暴露于操作过程中可能产生的感染性气溶胶和溅出物。 防护原理：（3分）
（1） 从安全柜排出的空气经过HEPA空气过滤器过滤释放，保护外部环境； （2） 在安全柜内形成的负压和气幕，可以防止气溶胶外泄，保护操作者；
（3） 进入安全柜工作区的空气经过HEPA空气过滤器过滤，在安全柜内形成百级洁净度的环境，保护操作对象。
4、 实验室意外事件处理原则?实验室地面被污染如何处理？（6分，原则2分，处理4分) 答：
实验室如果发生意外事故,原则是：立即停止工作；在加强个人防护条件下进行消毒处理，并对当事人进行医学观察;按照程序向负责人报告发生的事件.
如果感染性材料洒溢到实验室地面上，应立即用布或纸巾覆盖所有可能污染处，然后在上面倒
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上消毒剂,并立即覆盖周围区域，同时，及时脱掉防护装备、离开被污染的实验室，并在实验室门口注明警告标志.消毒有效时间后,防护人员换上新的防护装备进入实验室,将消毒后的感染性材料放在废物桶中，必要时需要对地面进行多次消毒.
5、生物安全柜的操作流程和注意事项?（10分,每少1条扣1分）
（1） 使用前，检查生物安全柜的正常指标，确保风速、气流量和负压等指标在正常范围内； （2） 工作时，一定要保证生物安全柜玻璃窗的位置移到安全范围内;
（3） 每次使用前，都应该准备好本次实验工作所需的物品,操作前先将物品放入;生物安全柜内只摆放本次工作所需要的物品，尽量少放仪器和物品；
（4） 所有物品应尽量放在工作区两侧或后部靠近工作台后缘的位置，并给进风隔栅留下距离； 物品摆放时根据操作习惯，尽量把物品按照洁净区、操作区和污染区做好分区摆放； 注意物品应分类摆放，不要遮盖安全柜进风隔栅，以免干扰气流的正常流动； （5） 工作记录纸不应放在生物安全柜内； （6） 生物安全柜内不应使用明火装置；
（7） 使用生物安全柜前应先打开风机5—10分钟,待安全柜内空气得到净化并且气流稳定后，再开始操作；
(8） 工作时调整好坐椅的高度，以确保操作者的脸部在工作窗口之上； （9) 将双臂伸入安全柜内短暂停止，待安全柜内气流稳定后再开始操作;
在柜内的所有工作都要在工作台中央或后部进行，操作者在移动双臂进出安全柜时需要小心维持前面窗口处气流的完整性,双臂应该缓慢地进出安全柜； 操作时，手或物品不可挡住进风隔栅；
（10） 操作时产生的废弃物应该放置于生物安全柜内的废物处理容器中；
（11） 操作结束后,应对在生物安全柜内使用过的物品表面进行消毒,然后对生物安全柜内表面进行消毒；
继续开启10-20分钟后,关闭生物安全柜；带有紫外灯的安全柜，可用紫外灯消毒半个小时后关闭生物安全柜。
6、 进入试剂技术部样品制备实验室,穿戴和解除个人防护装备的流程分别是怎样的？（8分 = 3分+5分，每条0.5分） ➢ 穿戴个人防护装备的流程：
在第一更衣室内：（1) 换上工作用鞋，套上一次性普通鞋套;—→ （2) 穿上第一层连体隔离衣,佩戴N95口罩;—→ (3） 穿上第二层连体隔离衣,佩戴乳胶手套（双层），注意用医用胶带固定
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手套；—→ （4） 套上高帮鞋套（可在外面套上一次性普通鞋套防止踩脏)；-→ （5) 由同伴或对镜检查上述衣物是否穿戴整齐,佩戴合格;-→ （6) 佩戴护目镜。 ➢ 解除个人防护装备的流程:
在实验室内：(1） 手部用医用酒精喷洒；—→
在半污染区内:（2） 摘掉护目镜放入泡沫箱中;—→ （3） 脱掉高帮鞋套、脱掉外面第一层连体隔离衣放入脏衣物收集桶；—→ （4) 摘掉外面第一层乳胶手套放入垃圾桶；—→ (5) 手部用医用酒精喷洒;—→
在第二更衣室内:(6) 摘掉N95口罩，放入垃圾桶；-→ (7) 脱掉第二层连体隔离衣放入脏衣物收集桶;—→ （8） 脱掉一次性普通鞋套、摘掉第二层乳胶手套放入垃圾桶;—→ （9） 用洗手液彻底清洗双手；—→ 在第一更衣室内：（10) 换鞋。 7、 皮肤被刺伤如何处理？（5分)
若手套被刺破、皮肤被刮伤应被视为极大危险，首先立即停止工作,在安全柜内脱掉手套并立即用适当的消毒剂进行消毒,然后在出口处的洗手池处进行处理，用清水和肥皂水清洗双手和受伤部位,并同时尽可能挤出损伤处的血液；取出急救箱,对污染的皮肤和伤口用碘酒或医用酒精擦洗多次，对伤口进行适当的包扎，并及时去医院就医进行医学观察. 8、实验完毕后的清场和操作？（4分)
实验完毕后，实验区域清场（废液缸放置于2号实验室水池中，实验设备关闭、物品摆放整齐）；关闭2号实验室的日关灯及实验室内的送、排风系统。
按更衣流程脱去实验服及防护用品；开启实验室半污染区的紫外灯,照射至少60分钟。 填写《样品制备实验室出入记录》。 9、离心管破裂应如何处理？（5分）
使用离心机时，装有感染性或潜在感染性材料的离心管破裂或可疑破裂,应关闭离心机并保持机盖关闭30分钟,使气溶胶沉积。如离心机停止后发生离心管破裂，应立即关闭机盖，保持30分钟。清理时,戴一双厚胶皮手套，必要时在外面再戴一次性手套,用镊子夹取碎片.所有破裂的离心管放入锐器盒（医用饭盒）中,按感染性废弃物进行处理;将84消毒液按说明稀释，对未破碎的有盖离心管表面消毒。离心机内腔污染可用按说明稀释的84消毒液或75％酒精擦拭两遍后再用清水进行擦拭，干燥后使用。
10、 你所在的项目操作的样本类型有哪些？分别可能存在怎样的生物安全风险？相应的预防措施有哪些？（10分)
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（答案具体问题具体分析。）
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