ELISA法两种试剂检测狂犬病毒抗体(IgG)结果比较

维普资讯 http://www.cqvip.com ５３８　实用预防医学２００７年４月　第１４卷第２期Ｐｒａｃｔｉｃａｌ　Ｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ａｐｒ．２００７，Ｖｏｌ　１４，Ｎｏ．２　文章编号：１００６—３１１０（２００７）０２—０５３８—０１　ＥＬＩＳＡ法两种试剂检测狂犬病毒抗体（ＩｇＧ）结果比较　罗述斌　，徐青松　，陈文胜　，张中图分类号：Ｒ３７３．９　文献标识码：Ｂ　义　，李谮　，魏文进　人间狂犬病主要是由于人被狂犬或其他带毒的动物咬伤　或抓伤而感染。一旦被犬类咬伤后，迅速接种疫苗可快速刺激　机体产生免疫反应。为寻找特异性强，灵敏度高而又经济的检　测方法，给疫苗接种者提供一个成功与否而　准确的结论，我们　２．２未注射狂犬病疫苗组人群狂犬病毒抗体，阴性检出率科　卫和天润分别为９６．７％和９７．３％，两组检出率无差异（ｕ＝　０．３４，Ｐ＞０．０５）。见表１。　表１　免疫组与非免疫组人群狂犬病毒抗体检测结果　对２００６年６月以来门诊部接受狂犬病疫苗全程接种者进行采　血，用两种ＥＬＩＳＡ试剂检测狂犬病毒抗体，比较其灵敏度，现将　结果报告如下。　２．３进口苟与国产苗免疫后抗体检测情况　进口疫苗和国产　１　材料与方法　疫苗全程免疫１０　ｄ后分别采用科卫和天润产试剂进行对比试　验。两苗用两家产试剂检测，结果经统计学处理（直接概率法）　差别非常显著（Ｐ＝０．０１２）￣（　＝２０，Ｐ＜０．０１），见表２。　表２　进口苗与国产苗全程免疫后抗体阳转情况比较　１．１材料血清标本采集：动物咬伤后全程接种狂犬病毒疫　苗，１０　ｄ后采血５　ｍｌ，４　０００转离心，分离血清并分成两份，每份　１　ｍｌ装置一２０℃保存。同时采集了非免疫人群血清同法待检。　疫苗：辽宁成大速达人用狂犬病纯化无佐剂疫苗（ＶＥＲＯ细胞）　和“塞诺菲・巴斯德”生产无佐剂冻干疫苗，均在有效期内使用。　检测试剂：由北京科卫临床诊断试剂有限公司生产（下称科　卫），批号为２００６０８０１，和宁波天润生物制品有限公司（下称天　润），批号２００６０８０１（国号准字￥２００６００８），均在有效期内使用。　酶标仪：深圳产ＲＴ一２１００Ｃ型。　１．２方法　检测原理：ａ．包被：用０．０５　Ｍ　ｐＨ０．９碳酸盐包被　３　讨论　本次采用科卫和天润两公司生产的试剂作对比，对１８３份　非免疫人群血清标本进行狂犬病毒抗体的检测，其特异性较高　缓冲液，将抗体稀释至蛋白质含量为０．０５　Ｍ　ｐＨ０．９碳酸盐包　被缓冲液，将抗体稀释至蛋白质含量为１～１０　ｕｇ／ｍｌ，在每个聚　苯乙烯板的反应孔中加０．１　ｍｌ　４℃过夜。次日，弃去孔内溶液　用洗涤缓冲液洗３次，每次３　ｒａｉｎ。ｂ．加样：加血清０．１　ｍｌ于上　述已包被的反映孔中，置３７℃孵育１　ｈ，然后洗涤。（同时做空　（分别为９６．７％和９７．３％）。疫苗全程免疫１０　ｄ后，狂犬病毒　抗体的检测北京科卫较杭州天润高（分别为９４．６％和７６．２％，Ｐ　＞０．０５），是否可以说北京科卫的灵敏度较杭州天润高，有待今　后进一步研究比较。与陈阳等报道　狂犬病疫苗免疫第３０　ｄ　时，用不同的ＥＬＩＳＡ试剂盒检测免疫血清阳性率变化从　６１．５４％～９６．１５％一致。疫苗免疫组和非免疫组人群血清经　两试剂检测为狂犬病毒抗体阳性标本，尤其是非免疫组阳性血　白孔，阴、阳性对照孔）。Ｃ．加酶标抗体：于各反应孔中，加入新　鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释液）０．１　ｍｌ，３７℃孵育０．５　～１　ｈ，洗涤。ｄ．加底物液显色：于各孔反应孔中加入临时配置　清标本，是否为狂犬病毒抗体待采用小鼠中和试验（ＭＮＴ）和快　速荧光灶抑制试验（ＲＦＦＩＴ）进一步确认，以对该试剂盒的灵敏　度和特异性作进一步评价。据Ｍｅｓｌｉｎ　ＦＸ报道，疫苗第一针免　疫１４　ｄ时，检测抗体阳转率达到１００％（ＲＦＦＩＴ法）…，目前，经　检定合格的纯化无佐剂疫苗质量稳定，免疫原性良好，免疫接　种１４　ｄ后１００％可检出血清抗体　ｊ，而本文观察的１４７例暴露　者狂犬病疫苗全程免疫１０　ｄ后ＥＬＩＳＡ法检测狂犬病毒抗体，　的ＴＭＢ底物溶液０．１　ｍｌ，３７℃１０～３０　ｒａｉｎ。ｅ．终止反应：于各　孔反应孔中加入２　Ｍ硫酸０．０５　ｍｌ终止上机。　１．３结果判定４５０　ｎｍ处用空白孔调零后测定各孔ＯＤ值，　样品ＯＤ值≥临界值（ｃｕｔ—ｏｆｆ）者为阳性，样品ＯＤ值＜临界值　（ｃｕｔ—ｏｆｆ）者为阴性。　２　结果　阳性检出率为７６．２％，有２３．８％的接种者检测为阴性结果，而　不能简单的作出免疫接种失败的结论。是采血时间过早还是　２．１疫苗免疫组狂犬病毒抗体，ＩｇＧ阳性检出率科卫和天润分　别为９４．６％和７６．２０％，两组阳性检出率经统计学后处理差别　有统计学意义（　＝１９．８６，Ｐ＜０．０５）。　作者单位：１湖南省疾病预防控制中心（湖南　长沙京民海生物科技有限公司　检测试剂灵敏度不够，有待进一步研究。　［参考文献］　［１］Ｍｅｓｌｉｎ　ＦＸ．Ｋａｐｌａｎ　Ｍ　ｋｏｐｏｗｓｋｉ　Ｈ　Ｆｏｕｖｔｈ　ｅｄｉｔｉｏｎ　Ｗｏｒｌｄ　Ｈｅａｌｔｈ　Ｏｒｇａ—　ｎｉｚａｔｉｏｎ［Ｚ］．ＷＨＯ　Ｇｅｎｅｖａ，１９９６．　［２］陈阳，陈亮，何似，等．ＩＦＡＴ及ＥＬＩＳＡ检测狂犬疫苗接种者早期血　清抗体结果分析［Ｊ］．中国人畜共患病杂志，２００５，２１（９）：７７９—７８２　（收稿日期：２００６—１２—１４）　４１０００５）；　２北　作者简介：罗述斌，男，主管医师，主要从事疾病控制工作。