计算标准品拷贝数(优选.)

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计算标准品拷贝数

因为硕士的课题是qRT-PCR，所以至今总有人问我如何计算拷贝数的问题，

特此，转载这篇博文，以备不时之需

做 qRT-PCR 的时候经常需要计算 DNA 拷贝数(Copy Number)，比较烦，用下面的方法这就方便多了。其实计算方法是相通的，只不过一个是带有分步推理过程，一个是直接计算而已！

一、分步推理如何计算核酸拷贝数

1A260吸光度值=dsDNA 50ug/ml=ssDNA 33ug/ml=ssRNA 40ug/ml

核酸浓度＝(OD260)×稀释倍数×(33 或 40 或 50)=ng/ul

MW 代表克/摩尔，单位 dolton：1dolton 即表示 1g/mol

1 摩尔=6.02×1023摩尔分子(拷贝数)

平均分子量(MW)：dsDNA=碱基数×660 道尔顿/碱基

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ssDNA=碱基数×330 道尔顿/碱基

ssRNA=碱基数×340 道尔顿/碱基

得到拷贝数计算公式：6.02×1023拷贝数/摩尔×(浓度)/(MW g/mol)= copies/ml.

即(6.02×1023)×(g/ml)/(DNA length×660)=copies/ml.

或(6.02×1023)×(ng/ul×10-9)/(DNA length×660)=copies/ul.

例：3000 碱基质粒，浓度 100 ng/ul

MW=3000bp×660dalton/bp=1.98×106daltons，即

1mol=1.98×106g(100ng×10-9)g/1.98×106＝摩尔数

copy 数＝摩尔数×6.02×1023＝3×1010copies/ul.

如何计算拷贝数？

计算方法：(6.02×1023拷贝数/摩尔)×(浓度 g/ml)/(MW g/mol)=copies/ml

[平均分子量(MW g/mol)：dsDNA=(碱基数)×(660 道尔顿/碱基)；ssDNA=(碱基数)×(330 道尔顿/碱基)；ssRNA=(碱基数)×(340 道尔顿/碱基)]

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