支气管败血波氏杆菌的鉴定及药敏试验

动物医学进展。２００８，２９（５）：１０—１３　Ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ｉｎ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　支气管败血波氏杆菌的鉴定及药敏试验　袁翠霞　，袁翠连。，罗阿东　，徐景峨　，唐　源　，文　明¨，周碧君　，汪德生　（１．贵州大学动物科学学院，贵州贵阳５５００２５；２．贵州省思南县大河坝乡畜牧站，贵州思南５６５１０２）　摘要：从猪萎缩性鼻炎（ＡＲ）临床症状猪群分离出３４株疑似支气管败血波氏杆菌（Ｂｂ），对分离茵进　行形态结构、染色特性、培养性状和生化特性等方面的测定，结果这些分离茵均符合Ｂｂ的生物学特征；对Ｂｂ　Ｆ１ａＡ基因进行ＰＣＲ扩增，所有分离茵均能扩增出特异性ＤＮＡ条带，与传统方法的鉴定结果完全一致，且　最小检出量为０．６４　Ｐｇ；而猪鼻腔和肺组织中常见的多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希茵、铜绿假　单胞菌、变形杆菌及枯草芽孢杆菌均未出现任何ＤＮＡ条带。药敏试验显示，这些分离物对多黏霉素Ｂ、丙氟　哌酸、氟哌酸、卡那霉素和庆大霉素均表现高度敏感。　关键词：猪萎缩性鼻炎；支气管败血波氏杆菌；分离鉴定；ＰＣＲ；药敏试验　中图分类号：￥８５２．６　文献标识码：Ａ　、　文章编号：１００７－５０３８（２００８）０５—００１０—０４　猪萎缩性鼻炎（Ａｔｒｏｐｈｉｃ　ｒｈｉｎｉｔｉｓ　ｏｆ　ｓｗｉｎｅ，ＡＲ）　个养殖场猪群；多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、　又称猪传染性萎缩性鼻炎（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ　ａｔｒｏｐｈｉｃ　ｒｈｉ—　大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、变形杆菌和枯草芽孢杆　　ｎｉｔｉｓ　ｏｆ　ｓｗｉｎｅ，ＩＡＲ），是由支气管败血波氏杆菌　菌，为贵州大学动物科学学院实验室冻干保存菌株。（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ　ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ，Ｂｂ）或产毒素多杀性巴　氏杆菌（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ　ｍｕｌｔｏｃｉｄａ，Ｐｒｏ）引起的一种慢　１．１．２　主要试剂细菌培养基、生化反应试验管、药　敏纸片购自杭州微生物试剂有限公司；ＰＣＲ试剂、　性接触性呼吸道传染病叫。本病以鼻塞、打喷嚏、流　２００　ｂｐ　Ｍａｒｋｅｒ、ＥＢ为上海生工生物工程技术服务有　鼻血、咳嗽、呼吸不畅、颜面变形或鼻梁歪斜为主要　特征。哺乳仔猪感染本病后，除主要特征外，还可以　限公司产品。　１．２　方法　引起全身钙、磷代谢障碍，致使仔猪发育迟缓，饲料　死亡，从而给养殖业带来严重的经济损失［２　］。　ＡＲ于１８３０年由德国学者Ｆｒａｎｇｕｅ首次报道。　１．２．１　形态结构与染色特性测定　取３４株疑似　单个菌落染色镜检，观察细菌分离物的形态结构；采　利用率降低，有时伴发急、慢性支气管炎，导致仔猪　Ｂｂ分离物接种１０　ｇ／Ｌ葡萄糖麦康凯培养基，挑取　用压滴法、硝酸银嘲和节思日月［　染色法分别观察细　菌的运动性、鞭毛和荚膜。　１．２．２培养性状与生化特性测定　取上述细菌分　近几十年来，随着集约化养猪业的不断发展以及猪　的引种和频繁调运，本病已经广泛分布于世界各养　猪业发达地区［５］。２００３年一２００６年，贵州省６个养　离菌分别接种１０　ｇ／Ｌ葡萄糖改良麦康凯琼脂平板、　猪场先后出现了疑似ＡＲ的病例，为查明病因，采集　鲜血琼脂平板、胰蛋白胨大豆琼脂平板及普通营养　这些感染猪群鼻腔棉拭子１５６份进行分离，获得了　琼脂平板等，同时接种各种生化反应管，置３７℃温　３４株疑似Ｂｂ分离菌。本试验对分离菌进行了形态　箱培养２４　ｈ～４８　ｈ，观察结果。　结构　染色特性、培养性状和生化特性等方面的生物　１．２．３　ＰＣＲ鉴定　学测定，同时针对Ｂｂ　ＦｌａＡ基因合成一对特异引物　１．２．３．１　引物设计参照Ｈｏｚｂｏｒ　Ｄ等［。　报道，针对　进行ＰＣＲ鉴定及药敏试验，现将结果报告如下。　Ｂｂ　ＦｌａＡ基因上游序列选择合成１对引物，即Ｆｌａｌ：　１材料与方法　１．１材料　５，ＪＴＣ　ＣＧＣＣＴＧＣＣＣｍ　、一３　和Ｆｌａ２：５＇－ＡＧＧＣＴＣ－　ＣＣＡＡＧＡＧＡＧＡＡＡ　１Ｖｒ．３　，其理论扩增幅度为　１。１．１　菌株来源　３４株疑似Ｂｂ分离菌（编号为　２３７　ｂｐ，由上海生工生物工程技术有限公司合成。　Ｂ１、Ｂ２、……、Ｂ３４），分离自表现ＡＲ临床症状的６　１．２．３．２　ＰＣＲ扩增　将分离菌分别接种到胰蛋白　收稿日期：２００８—０１—２４　基金项目：贵州省“　－－・五”农业科技攻关重大项目［黔科合ＮＺ字（２００５）３００２］；贵州大学人才科研基金项目（２００５）　作者简介：袁翠￣（１９７５－－），女（苗族），贵州思南人，硕士研究生，主要从事动物微生物与免疫学研究。＊通讯作者　维普资讯 http://www.cqvip.com 袁翠霞等：支气管败血波氏杆菌的鉴定及药敏试验　１１　胨大豆琼脂平板上，３７℃培养２４　ｈ，挑取单个菌落，　放入２　ｍＬ离心管，以每５０　Ｌ双蒸水一个菌落计，　混匀后１００℃煮沸１０　ｒａｉｎ，冰块中冷却１０　ｒａｉｎ，４℃　１０　０００　ｒ／ｍｉｎ离心１０　ｒａｉｎ，取上清液作为模板。　菌分离物均能耐受５　ｇ／Ｌ胆盐抑制剂，发育为无色　或茶黄色菌落；在鲜血琼脂平板上，所有菌均呈Ｂ溶　血；在胰蛋白胨大豆琼脂平板上，所有菌呈无色、大　小不等的菌落；在普通营养琼脂平板上，所有菌于　　ＰＣＲ反应体系为３０　Ｌ；双蒸水２１．５／，Ｌ、１０×ｂｕｆｆ－　２４　ｈ后可见针尖样小菌落，４８　ｈ即获得茂盛生长。　ｅｒ缓冲液（含１５　ｍｍｏｌ／Ｌ　ＭｇＣ１２）３　Ｌ、Ｔａｑ　ＤＮＡ　所有分离物不能分解碳水化合物，即葡萄糖、乳糖、聚合酶１／，Ｌ、ｄＮＴＰ　０．５　Ｌ、引物Ｆｌａｌ和Ｆｌａ２各　（１０　ｍｏ／Ｌ）Ｉ．５　Ｌ、模板Ｉ　Ｌ。ＰＣＲ反应条件为：　９５℃５　ｍｉｎ；９４℃３０　Ｓ，５６℃３０　Ｓ，７２℃４Ｏ　Ｓ，３５个　麦芽糖、甘露醇、蔗糖、木糖、果糖试验均为阴性，而　过氧化氢，尿素酶、硫化氢，石蕊牛乳等试验均为阳　性，能利用柠檬酸盐，还原硝酸盐，吲哚及ＭＲ反应　循环；最后７２℃１０　ｒａｉｎ。取ＰＣＲ产物５　Ｌ，于　阴性。　２Ｏ　ｇ／Ｌ琼脂糖凝胶电泳，ＥＢ染色，凝胶成像系统观　根据细菌分离菌的形态结构、染色特性、培养性　察。　状和生化鉴定等结果，３４株分离菌均符合Ｂｂ的生　１．２．３．３　ＰＣＲ特异性与敏感性试验　按上述方法　物学特征。　分别提取多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃　２．３　ＰＣＲ鉴定　希菌、铜绿假单胞菌、奇异变形杆菌和枯草芽孢杆菌　经Ｆｌａｌ／Ｆｌａ２引物进行ＰＣＲ反应，３４株分离菌　的ＤＮＡ模板进行ＰＣＲ反应，检测ＰＣＲ特异性；Ｂｂ　均扩增出一条约为２４０　ｂｐ的特异ＤＮＡ条带（图ｌ　菌株菌液ＤＮＡ为模板经１０倍连续稀释后，取各浓　和图２），与引物设计的预期片段大小一致。　度进行ＰＣＲ扩增，检测ＰＣＲ的敏感度，同时按照常　２．４　ＰＣＲ特异性与敏感性试验结果　规方法进行细菌计数。　分别提取Ｂｂ、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球　１．２．４药物敏感性试验按常规纸片法测定Ｂｂ分　菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、变形杆菌和大肠　离菌对１２种抗生素的敏感性。　埃希菌等猪鼻腔和肺组织中常见细菌的ＤＮＡ样本　２结果　进行ＰＣＲ，结果只有Ｂｂ扩增出一条大小约为　２．１形态结构与染色特性　２４０　ｂｐ的特异ＤＮＡ条带，其他菌均未扩增出任何　经抹片、染色镜检，３４株细菌分离物均为Ｇ一的　ＤＮＡ条带（图３）。　短小杆菌，多呈单或成双排列，少数成短链状，不形　将Ｂｂ分离株不同稀释度即１０＿。、１０一、１０＿“、　成芽胞；压滴法可观察到细菌具有运动性，经硝酸银　１０　和１Ｏ　菌液进行ＰＣＲ扩增，结果稀释度为　染色后，可见细菌有周鞭毛；节思明染色后发现细菌　１０叫的菌液在ＰＣＲ扩增后可出现明显的ＤＮＡ条带　分离物有荚膜。　（图４）。根据含菌量测定结果和文献资料　。　推算，　２．２培养性状和生化鉴定　ｌ０　菌液的ＤＮＡ含量为０．６４　Ｐｇ，即该ＰＣＲ的最小　在１０　ｇ／Ｌ葡萄糖改良麦康凯琼脂平板，３４株细　检出量为０．６４　Ｐｇ。　ｌ　２　３　４　５　６　７　８　Ｍ９　１０ｌｌＮｌ２１３１４１５１６１７　１８１９２０２１２２Ｎ２３２４２５Ｍ２６２７２８２９３０３１３２３３３４　１　０００　ｂｐ　８００　ｂｐ　６００　ｂｐ　４００　ｂｐ　１～１７．ＢｌａＢ１７｛Ｍ．２００　ｂｐ标准；Ｎ．空白对照　１８￣３４．Ｂ１８￣Ｂ３４；Ｎ．空白对照；Ｍ．２００　ｂｐ标准　卜１　７．Ｂ卜Ｂ１　７；Ｍ．２００　ｂｐ　Ｍａｒｋｅｒ　Ｎ．Ｂｌａｎｋ　ｃｏｎｔｒｏｌ　１８—３４．ＢＩ８－Ｂ３４；Ｎ．１３１ａｎｋ　ｃｏｎｔｒｏｌ：Ｍ．２００　ｂｐ　Ｍａｒｋｅｒ　图１分离菌株ＢＩ￣ＢＩ７的ＰＣＲ检测结果　图２分离菌株Ｂｌ８～Ｂ３４的ＰＣＲ检测结果　Ｆｉｇ．１　Ｔｈｅ　ＰＣＲ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　Ｂ１－Ｂ１　７　ｉｓｏｌａｔｅｓ　Ｆｉｇ．２　Ｔｈｅ　ＰＣＲ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　Ｂ１８一Ｂ３４　ｉｓｏｌａｔｅｓ　维普资讯 http://www.cqvip.com

１２　动物医学进展２００８年第２９卷第５期（总第１７７期）　１　２　３　４　５　Ｎ　Ｍ　１　２　３　４　５　Ｍ　６　Ｎ　７　１　０００　ｂｐ　８００　ｂｐ　６００ｂｐ　５ｏ０ｕ００Ｄｐｂｐ　６００ｂｐ　４００　ｂｐ　２４０　ｂｐ　２４０　ｂｐ　２００　ｂｐ　４００　ｂｐ　２００ｂｐ　Ｍ．２００　ｂｐ标准；Ｎ．空白对照｝１．多杀性巴氏杆菌；　２．金黄色葡萄球菌；３．枯草芽孢杆菌；４．铜绿假单胞菌；　５．大肠埃希菌｛６．Ｂｂ菌株；７．变形杆菌　Ｍ．２００　ｂｐ　Ｍａｒｈｅｒ￣Ｎ．Ｂｌａｎｋ　ｃｏｎｔｒｏｌ；１．Ｐ．ｍｕｌｔｏｃｉｄａ；　２．Ｓ．ａｕｒｅｕｓ；３．Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ；４．Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ；５．Ｅ．ｃｏｌｉ；　６．Ｂ．　Ｄ　５Ｐ　ｃ口；７．Ｐ．ｒｒｄｒａｂｉｌｌｉｓ　Ｍ．２００　ｂｐ标准｝Ｎ．空白对照；１．１０一　；２．１０一。；　３．１０一　；４．１０一　；５．１０一　Ｍ．２００　ｂｐ　Ｍａｒｈｅｒ；Ｎ．Ｂｌａｎｋ　ｃｏｎｔｒｏｌ￣１．１０一　；２．１０一。　３．１０—４；４．１０一。｝５．１０—６　图３　ＰＣＲ特异性检测结果　Ｆｉｇ．３　Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ　ｏｆ　ＰＣＲ　ｒｅｓｕｌｔｓ　图４　ＰＣＲ敏感性检测结果　Ｆｉｇ．４　Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ＰＣＲ　ｒｅｓｕｌｔｓ　２．３药敏试验　３４株Ｂｂ分离物对１２种抗菌素的敏感性见表１。　表１　３４株细菌分离物的药敏试验结果　Ｔａｂｌｅ　１　Ｔｈｅ　ｄｒｕｇ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ　ｔｅｓｔ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　３４　ｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｉｓｏｌａｔｅｓ　从表１可见，３４株Ｂｂ分离株对多黏素Ｂ、丙氟　洁霉素和链霉素表现不同程度耐药性。　哌酸、氟哌酸、卡那霉素和庆大霉素表现高度敏感，　３讨论　而对先锋霉素、利福平、青霉素、四环素、红霉素、氯　从表现ＡＲ临床症状猪群中采取１５６份鼻腔棉　维普资讯 http://www.cqvip.com 袁翠霞等：支气管败血波氏杆菌的鉴定及药敏试验　１３　拭子进行细菌学的分离鉴定，结果分离出３４株Ｂｂ，　再辅以药物防治，同时加强饲养管理。　分离率为２１．８　。　参考文献：　根据Ｂｂ　ＦｌａＡ基因上游序列选择合成一对特异　［１］林保忠，胡怀亮，赵应安．猪病踌治与临床图解［Ｍ］．四川成　性引物（Ｆｌａｌ／Ｆｌａ２），对３４株分离株进行ＰＣＲ鉴定，　都：四川科学技术出版社，１９９０：１６７．　结果３４株均扩增出一条大小约为２４０　ｂｐ的特异　［２］王殿瀛，王述诰，李文多，等．兽医传染病学［Ｍ］．长春：吉林　科学出版社，１９８５：２０１．　ＤＮＡ条带，与传统的生理生化鉴定结果完全一致。　［３］Ｔａｙｌｏｒ　Ｄ　Ｊ．Ｐｉｇ　ｄｉｓｅａｓｅ［Ｍ］．５ｔｈ　ｅｄ．Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ：Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ　且最小检出量为０．６４　Ｐｇ；对猪鼻腔和肺组织中常见　Ｐｒｅｓｓ，１９８９：１２８－１４３．　的多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、　［４］刘杰，杨建德，刘文周，等．猪萎缩性鼻炎研究进展［Ｊ］．中国　铜绿假单胞菌、变形杆菌和枯草芽胞杆菌均呈阴性　兽医杂志，２００３，３９（１１）：３０－３２．　反应；说明该ＰＣＲ方法具有较高的特异性和敏感　［５］王天奇，白喜婷，龙塔，等．猪萎缩鼻炎研究进展［Ｊ］．动物　医学进展，２００４，２５（４）：６７—６９．　性，与传统的细菌学鉴定方法比较，具有特异、敏感、　［６］　马绪荣．药品微生物学检验手册［Ｍ］．北京：科学出版社，　简便、快速等特点，可用于ＡＲ病原（Ｂｂ）的临床鉴　２０００：３７３－３７４．　定。　［７］甘肃农业大学．兽医微生物学试验指导［Ｍ］．北京：农业出版　临床上根据药物敏感性试验，可以给生产实践　社，１９９５：２４—２５．　提供用药依据。本试验中３４株Ｂｂ分离株对多黏霉　［８］Ｈｏｚｂｏｒ　Ｄ，Ｆｏｕｑｕｅ　Ｆ，Ｇｕｉｓｏ　Ｎ．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ　ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　ｃｈａｉｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｒｅｓ　Ｍｉｃｒｏ—　素Ｂ、丙氟哌酸、氟哌酸、卡那霉素和庆大霉素表现　ｂｉｏｌ，１９９９，１５０：３３５—３３６．　高度敏感，对链霉素等表现耐药；而边传周等［１阳报道　［９］　Ｒｕｂｙ　Ｍ　Ｌ．Ｄｉｒｅｃｔ　ＰＣＲ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｆｏｒ　ｔｏｘｉｇｅｎｉｃ　Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ　对庆大霉素表现耐药；韩洪伟等［１妇报道对链霉素表　ｍｕｌｔｏｃｉｄａ［Ｊ］．Ｊ　Ｃｌｉ　Ｍｉｃｒｏ，１９９６，３４（１２）：３０３５—３０３９．　现高度敏感。其差异性表现在细菌对抗生素很容易　［１Ｏ］边传周，白　静．猪传染性萎缩性鼻炎河南株的分离鉴定及　产生不同程度的耐药性，尤其是长时间应用抗生素　防治试验［Ｊ］．中国兽医杂志，２００６，４２（７）：５６—５７．　的猪，因此建议临床上交叉使用药物。为了更好地　［１１］韩洪伟，徐金会．仔猪传染性萎缩性鼻炎的的诊治方法［Ｊ］．　畜牧兽医科学信息，２００７，６：１５．　控制本病，应采用综合防控措施，即疫苗接种为主，　Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｄｒｕｇ　Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ　ｂｒｏｎｃｈ　ｉｓｅｐｔｉｃａ　Ｓｏｌａｔｅｓ　ｆｒｏｍ　Ｃａｓｅｓ　ｏｆ　Ｓｗｉｎｅ　Ａｔｒｏｐｈｉｃ　Ｒｈｉｎｉｔｉｓ　ＹＵＡＮ　Ｃｕｉ—ｘｉａ　，ＹＵＡＮ　Ｃｕｉ—ｌｉａｎ。，ＬＵＯ　Ａ—ｄｏｎｇ　，ＸＵ　Ｊｉｎｇ－ｅ　，　ＴＡＮＧ　Ｙｕａｎ　，ＷＥＮ　Ｍｉｎｇ　，ＺＨＯＵ　Ｂｉ－ｊ　ｕｎ　，ＷＡＮＧ　Ｄｅ－ｓｈｅｎｇ　（１．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｙ　Ａｎｉｍａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ，Ｇｕｉｚｈｏｕ，５５００２５，Ｃｈｉｎａ；　２．Ｄａｈｅｂａ　Ｈｕｓｂａｎｄｒｙ　Ｓｔａｔｉｏｎ，Ｓｉｎａｎ，Ｇｕｉｚｈｏｕ，５６５１０２，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：３４　ｉｓｏｌａｔｅｓ　ｗｅｒｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　１５６　ｎａｓａｌ　ｓｗａｂｓ，ｗｈｉｃｈ　ｗｅｒｅ　ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｐｉｇ　ｈｅｒｄｓ　ｓｈｏｗｉｎｇ　ｃｌｉｎ—　ｉｃａｌ　ｓｙｍｐｔｏｍｓ　ｏｆ　ａｔｒｏｐｈｉｃ　ｒｈｉｎｉｔｉｓ　ｉｎ　Ｇｕｉｚｈｏｕ　ｐｒｏｖｉｎｃｅ　ａｎｄ　ｔｈｏｓｅ　ｉｓｏｌａｔｅｓ　ｗｅｒｅ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ａｓ　ＢＤｒ　ｅ　ＰＺＺａ　ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ，（Ｂｂ）ｂｙ　ｔｈｅｉｒ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｓｔａｉｎｉｎｇ　ｒｅａｃｔｉｏｎ，ｃｕｌｔｕｒａｌ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ａｎｄ　ｂｉｏ—　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｒｅａｃｔｉｏｎ．Ｔｈｅ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ＤＮＡ　ｆｒａｇｍｅｎｔ　ｗａｓ　ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｆｒｏｍ　３　４　ｉｓｏｌａｔｅｓ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｏｎｅ　ｐａｉｒ　ｏｆ　Ｄｒｉｍｅｒ　ｏｆ　Ｂｂ　ｆｌａｇｅｌｌｉｎ　ｇｅｎｅ．Ｔｈｅ　ｍｉｎｉｍｕｍ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｗａｓ　０．６４　Ｐｇ．Ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐｒｉｍｅｒｓ　ｈａｄ　ｎｏ　ｃｒｏｓｓ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　Ｐ．ｍｕｌｔｏｃｉｄａ，Ｓ．ａｕｒｅｕｓ，Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ，Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ，Ｐ．ｍｉｒａｂｉｌｌｉｓ　ａｎｄ　Ｅ．ｃｏｌｉ，ｗｈｉｃｈ　ｗｅｒｅ　ｃｏｍｍｏｎｌｖ　ｆｏｕｎｄ　ｉｎ　ｎａｓａｌ　ｃａｖｉｔｙ　ａｎｄ　ｌｕｎｇ　ｔｉｓｓｕｅ　ｏｆ　ｐｉｇ．Ｔｈｅｓｅ　ｉｓｏｌａｔｅｓ　ｗｅｒｅ　ｈｉｇｈ－ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ　ｔｏ　ｐｏｌｙｍｙｘｉｎ　ｂｒｏｔｈ，ｃｉｐｒｏ—　ｆｌｏｘａｃｉｎ，ｎｏｒｆｌｏｘａｃｉｎ，ｋａｎａｍｙｃｉｎ　ａｎｄ　ｇｅｎｔａｍｉｃｉｎ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ａｔｒｏｐｈｉｃ　ｒｈｉｎｉｔｉｓ　ｏｆ　ｓｗｉｎｅ；Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ　ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ；ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｄｅｎｔｉｆｆｃａｔｉｏｎ；ＰＣＲ；ｄｆｕｇ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ