1.准备工作:选择合适的细胞培养基,含有适量的血清或蛋白质补充剂;选择合适的细胞冻存液,常用的包括DMSO、乳酸和甘油等。
2.细胞处理:收集并洗涤细胞,如果需要,将细胞离心并去除培养基。
3.添加冻存液:向细胞中添加预先配制好的冻存液,用吸管轻轻混合并确保细胞均匀分散在冻存液中。
4.装管:将混合好的细胞和冻存液转移到预先标记好的冻存管中,使用冷冻架或装置安置管子,缓慢将管子降温至-80℃。
5.液氮冻存:将冻存管置于液氮罐中,缓慢降温。通常,操作人员将管子在-80℃保存 1-2 天,然后将其慢慢转移到-196℃的液氮中,这样可以更好地保护细胞。
6.解冻细胞:将所需数量的冻存管从液氮中取出,立即在水浴中迅速解冻细胞,并将其转移到新的培养基中。
注意事项:
1. 在细胞冻存或解冻过程中,必须严格遵循标准操作程序,确保安全可靠。
2. 冻存液中添加的化学物质可能会对细胞产生不良影响,因此必须在合适的浓度下使用,并严格按照说明书操作。
3. 不同类型的细胞可能需要不同的冻存液和冻存条件,因此请在使用前先了解细胞的特性和要求。
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