DEAE-琼脂糖凝胶FF使用说明

指-O-CH2CH2-N(C2H5)2H标弱阴离子，可交换离子Cl6%交联琼脂糖110mgHSA/mL介质0.11~0.16mmol/mL介质球形45~165μm-

蛋白质吸附容量总离子交换容量形状粒径流速*工作温度耐热耐压pH稳定性pH工作范围化学稳定性300~600cm/h；最大流速750cm/h4~40℃pH7水中120℃30min0.3MPa1~14(短时间,在位清洗);2~12(长时间)2~9在以下液体中稳定：所有常用的水相缓冲液；1mol/L氢氧化钠；8mol/L尿素；6mol/L盐酸胍；70%乙醇http://www.solarbio.com*检测条件：层析柱10mm×300mm三、适用范围*柱床高15cm，25℃，流动相为0.1mol/LNaCl。本产品具有高化学稳定性、高流速、高载量、好的机械性能、可在位清洗、多次重复使用等特点，非特异性吸附低，回收率高，适用于工业规模生产，适用于在pH工作范围内可形成负离子的生物大分子的分离纯化，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的离子交换制备。四、注意事项产品应密封贮存在4℃~25℃（保存溶液为20%乙醇），通风、干燥、清洁的地方。不能冷冻。用过的柱子贮存在4℃（20%乙醇）。本产品避免与氧化剂接触；避免在pH值<4时长时间暴露(一周，20℃)。保质期：5年。五、操作步骤1、装柱(1)让所有的材料和试剂达到室温。配制初始缓冲液（平衡液）和洗脱缓冲液。(2)根据柱子大小取所需量的凝胶，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始缓冲液（按凝胶：缓冲液=3：1的比例）配成匀浆。(3)将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位（液面略高于滤膜），务必使底端无气泡。(4)用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。(5)打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定。用2~3倍柱体积的缓冲液平衡柱子。2、平衡让平衡缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。平衡液是低浓度的缓冲溶液，如Tris、PBS等。http://www.solarbio.com3、上样(1)样品用平衡液配制，浑浊的样品要离心和过滤后上样。盐浓度太大的样品处理后再配。(2)一般情况是让目标产品结合在柱子上，用平衡液洗去杂质，再选择一种洗脱液洗下目标产品。(3)介质对样品组分吸附的程度取决于样品的带电性质、流动相的离子强度和pH值。盐浓度小，介质对样品组分吸附较牢。用DEAE介质时，推荐的pH值是大于目标产品等电点1个单位。4、洗脱DEAE介质可用增大盐浓度或减小pH值进行洗脱，常用增大盐浓度的办法洗脱。5、再生一般用高盐浓度的缓冲液（含1~2mol/LNaCl）洗或减小pH洗10倍以上柱体积，接着用结合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。6、在位清洗(1)对于以离子键结合上去的蛋白，可以用2MNaCl去除。(2)对沉淀蛋白、对以疏水性结合的蛋白或脂类，可用1MNaOH去除。(3)对强疏水性结合的蛋白、脂类等，用4~10倍柱体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗，但要注意有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加，否则容易产生气泡。清洗完毕后，用至少3倍缓冲液平衡柱子。7、注意在装柱、使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干，气泡进入。在使用过程中，不能使用强酸，如使用酸洗，应使用浓度低于0.1M的冰醋酸。8、去热源用0.5M的氢氧化钠清洗柱子5~6小时或用0.1M的氢氧化钠24小时。或用以下方法步骤去http://www.solarbio.com除：(1)2倍柱体积的70%乙醇；(2)2倍柱体积50mMTris-HClpH7.5；(3)1倍柱体积4M尿素；(4)3倍柱体积的Tris缓冲液+0.1MNaCl；以上缓冲液都在无热源的双蒸水中配制。9、消毒用0.5~1MNaOH室温下洗8~10倍柱体积，初始缓冲液平衡柱子。10、灭菌置介质于高压灭菌锅中120℃下30分钟。