(12)发明专利申请
(10)申请公布号 CN 109010290 A(43)申请公布日 2018.12.18
(21)申请号 201810993494.6(22)申请日 2018.08.29
(71)申请人 江苏艾迪药业有限公司
地址 225000 江苏省扬州市邗江区新甘泉
西路69号
A61P 25/28(2006.01)A61P 37/02(2006.01)A61P 7/02(2006.01)A61P 9/00(2006.01)F26B 5/06(2006.01)
(72)发明人 笪荣 周有飞 张望 颜扬 方阳 (74)专利代理机构 扬州润中专利代理事务所
(普通合伙) 32315
代理人 谢东(51)Int.Cl.
A61K 9/19(2006.01)A61K 38/57(2006.01)A61K 47/26(2006.01)A61K 47/02(2006.01)A61P 1/18(2006.01)
权利要求书2页 说明书10页
CN 109010290 A(54)发明名称
一种乌司他丁冻干粉制剂的制备方法(57)摘要
本发明公开了药物制剂领域的一种乌司他丁冻干粉制剂的制备方法。该乌司他丁冻干粉制剂的配方为，每1000支：乌司他丁2500万单位～10000万单位、甘露醇0～20g、氯化钠0～2g、磷酸氢二钠0～2g和磷酸二氢钠0～2g；本发明提供的乌司他丁冻干粉制剂的制备方法有以下特点：室温配制，解决了工业化生产温度低较难控制的问题，节约了能耗；同时，在室温下先配制磷酸盐缓冲溶液，再加入活性成分乌司他丁，缓冲溶液对活性成分乌司他丁有保护作用。按照本发明提供配方与制备方法制成的乌司他丁冻干粉制剂在便于工业化生产，降低耗能的同时提高活性成分乌司他丁药液的稳定性。
CN 109010290 A
权 利 要 求 书
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1.一种乌司他丁冻干粉制剂的制备方法，所述乌司他丁冻干粉制剂的配方为，每1000支：乌司他丁2500万单位～10000万单位、甘露醇0～20g、氯化钠0～2g、磷酸氢二钠0～2g和磷酸二氢钠0～2g；
其特征在于，所述乌司他丁冻干粉制剂的制备方法包括以下步骤：(1)按照配方用量称取磷酸氢二钠、磷酸二氢钠于配液桶中，用温度为室温注射用水搅拌至溶解，此溶液为辅料溶液；用温度为室温注射用水溶解上述配方量的乌司他丁，并与上述辅料溶液混合均匀，再加入甘露醇、氯化钠，得到药液A，下述步骤(2)-(5)中涉及的所有药液均保持在室温；
(2)用0.5摩尔/升盐酸或0.5摩尔/升氢氧化钠溶液调节上述药液A的pH值至6.2～7.0，得到药液B；
(3)用温度为室温注射用水将上述药液B补足体积至1500mL，混匀，得到药液C；(4)采用0.22μm滤膜对药液C进行两次过滤除菌，得到冻干前药液D；(5)分装冻干前药液D，半加塞，于冻干机中冷冻干燥。
2.根据权利要求1所述的乌司他丁冻干粉制剂的制备方法，其特征在于，步骤(5)中的冷冻干燥包括以下步骤：
1)第一阶段预冻：冻干前药液D温度为室温；预冻开始，搁板冷却，设定温度为-26℃～-30℃，保持4小时；2)第二阶段预冻：当搁板冷却至最后1小时，开始冷阱冷却，保持1小时，确保冷阱温度在-40℃以下；
3)一次干燥：冷阱温度-40℃以下；搁板设定温度-8～-4℃；一次干燥的时间约6小时；4)二次干燥：冷阱温度-40℃以下；搁板加热设定温度29～33℃；当制品温度接近或达到29℃，关闭真空控制，恢复在高真空度下干燥1小时；检查真空度无变化，结束冻干过程，充氮全压塞，出箱。
3.根据权利要求1所述的乌司他丁冻干粉制剂的制备方法，其特征在于，步骤(5)中的冷冻干燥包括以下步骤：
1)第一阶段预冻：冻干前药液D温度为室温；预冻开始，搁板冷却，设定温度为-26℃～-30℃，保持4小时；2)第二阶段预冻：当搁板冷却至最后1小时，开始冷阱冷却，保持1小时，确保冷阱温度在-39℃以下；
3)一次干燥：冷阱温度-39℃以下；搁板设定温度-10～-6℃；一次干燥的时间约6小时；4)二次干燥：冷阱温度-39℃以下；搁板加热设定温度28～32℃；当制品温度接近或达到28℃，关闭真空控制，恢复在高真空度下干燥1小时；检查真空度无变化，结束冻干过程，充氮全压塞，出箱。
4.根据权利要求1所述的乌司他丁冻干粉制剂的制备方法，其特征在于，步骤(5)中的冷冻干燥包括以下步骤：
1)第一阶段预冻：冻干前药液D温度为室温；预冻开始，搁板冷却，设定温度为-26℃～-30℃，保持4小时；2)第二阶段预冻：当搁板冷却至最后1小时，开始冷阱冷却，保持1小时，确保冷阱温度在-38℃以下；
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3)一次干燥：冷阱温度-38℃以下；搁板设定温度-10～-8℃；一次干燥的时间约6小时；4)二次干燥：冷阱温度-38℃以下；搁板加热设定温度27～31℃；当制品温度接近或达到27℃，关闭真空控制，恢复在高真空度下干燥1小时；检查真空度无变化，结束冻干过程，充氮全压塞，出箱。
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说 明 书
一种乌司他丁冻干粉制剂的制备方法
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技术领域
[0001]本发明涉及药物制剂领域，特别涉及一种乌司他丁冻干粉制剂的制备方法。背景技术[0002]乌司他丁(Ulinastatin)是从人体尿液中分离纯化的一种糖蛋白，其也被称为人尿胰蛋白酶抑制剂(HumanUrinaryTrypsinInhibitor)。乌司他丁具有：减少促炎性细胞因子的生成和释放；调节凝血功能，抑制纤溶亢进，保护血小板；稳定溶酶体膜，抑制多种水解酶活性；免疫调节作用等药理活性。因此，乌司他丁在临床抗炎、脏器保护、脑损伤神经保护、改善微循环等方面具有重要作用。临床上乌司他丁常用于急性胰腺炎、急性循环障碍、急性器官功能衰竭的治疗；大中型手术期的器官保护；以及危重症中全身性炎症反应、多器官功能障碍综合症的预防等。[0003]目前，市售乌司他丁制剂多为粉针剂，粉针剂在使用前需要进行配置复溶。粉针剂的复溶性能与其孔隙率有关，粉针剂的孔隙率指其堆积体积中，粉末颗粒之间的孔隙体积所占的比例。常规情况下，孔隙率越大，粉针剂的复溶性能越优良。现有技术中的冻干粉针剂的复溶性能并不令人满意，而乌司他丁用于急性器官功能衰竭等急救用药时，用药时间至关重要，而冻干粉针剂的复溶速度是影响其用药时间的重要因素，为了解决这一问题，现有技术公开了一种发明，授权公告号为CN105596302B，授权公告日为20170412，名称为一种乌司他丁冻干粉制剂及其制备方法，所述乌司他丁冻干粉制剂的配方为，每1000支：乌司他丁2500万单位～10000万单位、甘露醇1～30g、氯化钠0～10g、磷酸氢二钠0.17～5g和磷酸二氢钠0.32～5g，所述制备方法包括以下步骤：(1)按照配方用量称取甘露醇、氯化钠、磷酸氢二钠和磷酸二氢钠于配液桶中，用温度为2～4℃注射用水搅拌至溶解；加入医用活性炭搅拌混匀后，使用0.45μm滤膜过滤脱碳，并保持温度为2～4℃，此溶液为辅料溶液；用2～4℃的注射用水溶解上述配方量的乌司他丁，并与上述2～4℃辅料溶液混合均匀，得到药液A，下述步骤(2)-(5)中涉及的所有药液均保持在2～4℃；(2)用盐酸或氢氧化钠溶液调节上述药液A的pH值至5.5～6.0，得到药液B；(3)用2～4℃注射用水将上述药液B补足体积至1500mL，混匀，得到药液C；(4)采用0.22μm滤膜对药液C进行两次过滤除菌，得到冻干前药液D；(5)分装冻干前药液D，半加塞，于冻干机中冷冻干燥。[0004]现有技术中通过在冷冻干燥的预冻过程中采用“快-慢-快”的三步预冻方式，一方面加快了乌司他丁冻干粉的干燥速率，减少其活性降低的可能性；另一方面，提高了乌司他丁冻干粉制剂的复溶性能。虽然通过现有技术制备的乌司他丁冻干粉的复溶性能优异，但是依旧存在如下问题：1、现有技术中的该药物组合物能够在2～4℃的低温环境配制下保持相对稳定，但是工业化生产过程中冷冻水一般控制在7-11℃左右，再降低温度，需消耗大量能耗，所以实际大生产中很难将该产品配制环境、设备、注射用水控制在2～4℃的低温环境下；2、现有技术中的甘露醇、氯化钠、磷酸氢二钠和磷酸二氢钠是同时加入配液桶中配制的，而后加入乌司他丁，混合液不能对乌司他丁起到充分的保护，影响活性成分乌司他丁药液的稳定性；3、现有技术中采用2摩尔/升盐酸或2摩尔/升氢氧化钠溶液调节步骤⑴所得药
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液A的pH值，瞬间加入大浓度pH调节剂会影响活性成分乌司他丁药液的稳定性；4、现有技术在配制过程中使用活性炭，可能导致微量活性炭进入药品从而进入人体血液的风险。发明内容
[0005]本发明的目的是提供一种便于工业化生产，提高活性成分乌司他丁药液稳定性的乌司他丁冻干粉制剂的制备方法。[0006]为了实现上述发明目的，本发明乌司他丁冻干粉制剂的制备方法采用的如下技术方案：
[0007]一种乌司他丁冻干粉制剂的制备方法，所述乌司他丁冻干粉制剂的配方为，每1000支：乌司他丁2500万单位～10000万单位、甘露醇0～20g、氯化钠0～2g、磷酸氢二钠0～2g和磷酸二氢钠0～2g；
[0008]所述乌司他丁冻干粉制剂的制备方法包括以下步骤：[0009](1)按照配方用量称取磷酸氢二钠、磷酸二氢钠于配液桶中，用温度为室温注射用水搅拌至溶解，此溶液为辅料溶液；用温度为室温注射用水溶解上述配方量的乌司他丁，并与上述辅料溶液混合均匀，再加入甘露醇、氯化钠，得到药液A，下述步骤(2)-(5)中涉及的所有药液均保持在室温；[0010](2)用0.5摩尔/升盐酸或0.5摩尔/升氢氧化钠溶液调节上述药液A的pH值至6.2～7.0，得到药液B；[0011](3)用温度为室温注射用水将上述药液B补足体积至1500mL，混匀，得到药液C；[0012](4)采用0.22μm滤膜对药液C进行两次过滤除菌，得到冻干前药液D；[0013](5)分装冻干前药液D，半加塞，于冻干机中冷冻干燥。
[0014]本发明所述制备方法中步骤(5)中的冷冻干燥包括以下步骤：[0015]1)第一阶段预冻：冻干前药液D温度为室温；预冻开始，搁板冷却，设定温度为-26℃～-30℃，保持4小时；[0016]2)第二阶段预冻：当搁板冷却至最后1小时，开始冷阱冷却，保持1小时，确保冷阱温度在-40℃以下；[0017]3)一次干燥：冷阱温度-40℃以下；搁板设定温度-8～-4℃；一次干燥的时间约6小时；
[0018]4)二次干燥：冷阱温度-40℃以下；搁板加热设定温度29～33℃；当制品温度接近或达到29℃，关闭真空控制，恢复在高真空度下干燥1小时；检查真空度无变化，结束冻干过程，充氮全压塞，出箱。
[0019]本发明所述制备方法中步骤(5)中的冷冻干燥包括以下步骤：[0020]1)第一阶段预冻：冻干前药液D温度为室温；预冻开始，搁板冷却，设定温度为-26℃～-30℃，保持4小时；[0021]2)第二阶段预冻：当搁板冷却至最后1小时，开始冷阱冷却，保持1小时，确保冷阱温度在-39℃以下；[0022]3)一次干燥：冷阱温度-39℃以下；搁板设定温度-10～-6℃；一次干燥的时间约6小时；
[0023]4)二次干燥：冷阱温度-39℃以下；搁板加热设定温度28～32℃；当制品温度接近
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或达到28℃，关闭真空控制，恢复在高真空度下干燥1小时；检查真空度无变化，结束冻干过程，充氮全压塞，出箱。
[0024]本发明所述制备方法中步骤(5)中的冷冻干燥包括以下步骤：[0025]1)第一阶段预冻：冻干前药液D温度为室温；预冻开始，搁板冷却，设定温度为-26℃～-30℃，保持4小时；[0026]2)第二阶段预冻：当搁板冷却至最后1小时，开始冷阱冷却，保持1小时，确保冷阱温度在-38℃以下；[0027]3)一次干燥：冷阱温度-38℃以下；搁板设定温度-10～-8℃；一次干燥的时间约6小时；
[0028]4)二次干燥：冷阱温度-38℃以下；搁板加热设定温度27～31℃；当制品温度接近或达到27℃，关闭真空控制，恢复在高真空度下干燥1小时；检查真空度无变化，结束冻干过程，充氮全压塞，出箱。[0029]与现有技术相比，本发明的有益效果在于：[0030]1、本发明将配制工艺进行了优化，在室温条件下，配制过程先配制磷酸盐缓冲溶液，同时解冻乌司他丁溶液，再快速将乌司他丁加入磷酸盐缓冲溶液，起到了对活性成分乌司他丁的保护作用，实现了室温配制，同时解决了工业化生产温度低较难控制的问题，节约了能耗；[0031]2、本发明先利用室温注射用水配制磷酸盐缓冲溶液，再利用室温注射用水溶解乌司他丁，然后与配制好的磷酸盐缓冲溶液混合；通过室温配制，解决了现有技术中很难将该产品配制环境、设备、注射用水控制在2～4℃的低温环境下的问题，无需降温，减少能耗，便于工业化生产；[0032]3、本发明先配制磷酸盐缓冲溶液，同时解冻乌司他丁溶液，再快速将乌司他丁加入磷酸盐缓冲溶液中混合均匀，而后再加入甘露醇、氯化钠，得到药液A；单独配制磷酸盐缓冲溶液作为辅料溶液，起到了对活性成分乌司他丁的保护作用，提高了乌司他丁药液的稳定性；
[0033]4、本发明与现有技术相比，通过取消活性炭在配制过程的使用，增加对辅料内毒素控制，降低活性炭进入药品从而进入人体血液的风险；[0034]5、本发明配制使用0.5摩尔/升盐酸或0.5摩尔/升氢氧化钠溶液调节pH值情况，较现有技术相比，降低盐酸和氢氧化钠溶液浓度，减少了瞬间加入大浓度pH调节剂可能导致破坏乌司他丁活性成分的风险，同时将pH调至6.2～7.0，更接近中性，从而提高活性成分乌司他丁药液的稳定性。
具体实施方式
[0035]下面结合具体实施方式，进一步阐明本发明，应理解这些实施方式仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。[0036]实施例1：
[0037]一种乌司他丁冻干粉制剂的制备方法，乌司他丁冻干粉制剂的配方为，每1000支：乌司他丁2500万单位，甘露醇5g，氯化钠0.5g，磷酸二氢钠0.5g，磷酸氢二钠0.5g；
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所述乌司他丁冻干粉制剂的制备方法包括以下步骤：
[0039](1)按照配方用量称取磷酸氢二钠、磷酸二氢钠于配液桶中，用温度为室温注射用水搅拌至溶解，此溶液为辅料溶液；用温度为室温注射用水溶解上述配方量的乌司他丁，并与上述辅料溶液混合均匀，再加入甘露醇、氯化钠，得到药液A，下述步骤(2)-(5)中涉及的所有药液均保持在室温；[0040](2)用0.5摩尔/升盐酸或0.5摩尔/升氢氧化钠溶液调节步骤⑴所得药液A的pH值至6.5，得到药液B；[0041](3)用注射用水将步骤(2)所得药液B补足体积至1500mL，混匀，得到药液C；[0042](4)0.22μm滤膜对步骤(3)所得药液C进行两次过滤除菌，得到冻干前药液D；[0043](5)分装步骤(4)所得药液D，半加塞；于冻干机中冷冻干燥。[0044]步骤(5)中的冷冻干燥包括以下步骤：[0045]1)第一阶段预冻：冻干前药液D温度为室温；预冻开始，搁板冷却，设定温度为-26℃，保持4小时；
[0046]2)第二阶段预冻：当搁板冷却至最后1小时，开始冷阱冷却，保持1小时，确保冷阱温度在-40℃以下；[0047]3)一次干燥：冷阱温度-40℃以下；搁板设定温度-8℃；一次干燥的时间约6小时；[0048]4)二次干燥：冷阱温度-40℃以下；搁板加热设定温度29℃；当制品温度接近或达到29℃，关闭真空控制，恢复在高真空度下干燥1小时；检查真空度无变化，结束冻干过程，充氮全压塞，出箱。[0049]实施例2：
[0050]一种乌司他丁冻干粉制剂的制备方法，乌司他丁冻干粉制剂的配方为，每1000支：乌司他丁5000万单位，甘露醇10g，氯化钠1g，磷酸二氢钠1g，磷酸氢二钠1g；[0051]所述乌司他丁冻干粉制剂的制备方法包括以下步骤：[0052](1)按照配方用量称取磷酸氢二钠、磷酸二氢钠于配液桶中，用温度为室温注射用水搅拌至溶解，此溶液为辅料溶液；用温度为室温注射用水溶解上述配方量的乌司他丁，并与上述辅料溶液混合均匀，再加入甘露醇、氯化钠，得到药液A，下述步骤(2)-(5)中涉及的所有药液均保持在室温；[0053](2)用0.5摩尔/升盐酸或0.5摩尔/升氢氧化钠溶液调节步骤(1)所得药液A的pH值至6.4，得到药液B；[0054](3)用注射用水将步骤(2)所得药液B补足体积至1500mL，混匀，得到药液C；[0055](4)0.22μm滤膜对药液C进行两次过滤除菌，得到冻干前药液D；[0056](5)分装药液D，半加塞，于冻干机中冷冻干燥。[0057]步骤(5)中的冷冻干燥包括以下步骤：[0058]1)第一阶段预冻：冻干前药液D温度为室温；预冻开始，搁板冷却，设定温度为-26℃，保持4小时；
[0059]2)第二阶段预冻：当搁板冷却至最后1小时，开始冷阱冷却，保持1小时，确保冷阱温度在-39℃以下；[0060]3)一次干燥：冷阱温度-39℃以下；搁板设定温度-10℃；一次干燥的时间约6小时；[0061]4)二次干燥：冷阱温度-39℃以下；搁板加热设定温度28℃；当制品温度接近或达
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到28℃，关闭真空控制，恢复在高真空度下干燥1小时；检查真空度无变化，结束冻干过程，充氮全压塞，出箱。[0062]实施例3：
[0063]一种乌司他丁冻干粉制剂的制备方法，乌司他丁冻干粉制剂的配方为，每1000支：乌司他丁10000万单位，甘露醇20g，氯化钠2g，磷酸二氢钠2g，磷酸氢二钠2g；所述乌司他丁冻干粉制剂的制备方法包括以下步骤：[0064](1)按照配方用量称取磷酸氢二钠、磷酸二氢钠于配液桶中，用温度为室温注射用水搅拌至溶解，此溶液为辅料溶液；用温度为室温注射用水溶解上述配方量的乌司他丁，并与上述辅料溶液混合均匀，再加入甘露醇、氯化钠，得到药液A，下述步骤(2)-(5)中涉及的所有药液均保持在室温；[0065](2)用0.5摩尔/升盐酸或0.5摩尔/升氢氧化钠溶液调节步骤(1)所得药液A的pH值至6.3，得到药液B；[0066](3)用注射用水将步骤(2)所得药液B补足体积至1500mL，混匀，得到药液C；[0067](4)0.22μm滤膜对药液C进行两次过滤除菌，得到冻干前药液D；[0068](5)分装药液D，半加塞，于冻干机中冷冻干燥。[0069]步骤(5)中的冷冻干燥包括以下步骤：[0070]1)第一阶段预冻：冻干前药液D温度为室温；预冻开始，搁板冷却，设定温度为-28℃，保持4小时；
[0071]2)第二阶段预冻：当搁板冷却至最后1小时，开始冷阱冷却，保持1小时，确保冷阱温度在-38℃以下；[0072]3)一次干燥：冷阱温度-38℃以下；搁板设定温度-9℃；一次干燥的时间约6小时；[0073]4)二次干燥：冷阱温度-38℃以下；搁板加热设定温度27℃；当制品温度接近或达到27℃，关闭真空控制，恢复在高真空度下干燥1小时；检查真空度无变化，结束冻干过程，充氮全压塞，出箱。[0074]1、存放稳定性对比试验[0075]乌司他丁冻干粉试样制备：乌司他丁冻干粉试样的配方为，每1000支：乌司他丁10000万单位，甘露醇10g，氯化钠5g，磷酸二氢钠0.51g，磷酸氢二钠0.93g。乌司他丁冻干粉制剂的制备方法为：⑴.按照上述配方用量称取甘露醇、氯化钠、磷酸氢二钠或磷酸二氢钠于配液桶中，用温度为4℃注射用水搅拌至溶解；加入平均粒径为5μm的医用活性炭搅拌混匀后，使用0.45μm滤膜2次过滤脱碳，并保持温度为4℃，此溶液为辅料溶液；用4℃的注射用水溶解乌司他丁，并与上述4℃辅料溶液混合均匀，得到药液A，下述步骤⑵-⑸中涉及的所有药液均保持在4℃；⑵.用2M盐酸或2M氢氧化钠溶液调节步骤⑴所得药液A的pH值至6.0，得到药液B；⑶.用4℃注射用水将步骤⑵所得药液B补足体积至1500mL，混匀，得到药液C；⑷.0.22μm滤膜对药液C进行两次过滤除菌，得到冻干前药液D；⑸.分装药液D，半加塞，于冻干机中冷冻干燥：①.第一阶段预冻：冻干前药液D温度为4℃，搁板温度为4℃进箱；以5℃/min的降温速率将冻干机降温至-25℃，保温2小时；②.第二阶段预冻：以0.6℃/min的降温速率将冻干机降温至-30℃，保温2小时；③.第三阶段预冻：以5℃/min的降温速率将冻干机降温至-38℃，保温1.5小时；④.次干燥：将冷凝温度降至-45℃，抽真空至10Pa以下，以0.8℃/min的速度将冻干机温度升至15℃，保温至冰晶消失，然后继续保温2小时；⑤.次干燥：
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以1℃/min的速度将冻干机温度升至32℃，计时保温3小时；检查真空度无变化，结束冻干过程，充氮全压塞，出箱，制得乌司他丁冻干粉试样。乌司他丁冻干粉试样采用的是现有技术中的制备方法制得。
[0076]考察本发明涉及的实施例1-3所述乌司他丁冻干粉制剂、乌司他丁冻干粉试样以及市售乌司他丁冻干粉针剂在温度为30℃、相对湿度为75％的条件下存放过程中的稳定性，结果如下表1：
[0077]表1乌司他丁冻干粉制剂存放稳定性对比结果
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[0079]
本发明涉及的实施例1-3所述乌司他丁冻干粉制剂在温度为30℃、相对湿度为
75％的条件下，存放6个月乌司他丁活性几乎不变，能够保持无菌；存放12个月，乌司他丁活性残留率>97％，能够保持无菌；存放24个月后，乌司他丁活性残留率>95％，能够保持无菌。本发明涉及的实施例所述乌司他丁冻干粉制剂在温度为30℃、相对湿度为75％的条件下的
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稳定性都比现有技术中的乌司他丁冻干粉试样要高，并且明显高于市售乌司他丁粉针剂。[0080]试验方法：
[0081]取实施例1-3所述乌司他丁冻干粉制剂、乌司他丁冻干粉试样以及市售乌司他丁冻干粉针剂各一支在温度为30℃、相对湿度为75％的条件下放置。在试验期间第0、6、12、18、24个月末分别取样，对是否无菌以及乌司他丁活性残留率进行测定。[0082]无菌检测方法：采用2015版《中华人民共和国药典》中推荐的薄膜过滤法进行无菌检测。[0083]乌司他丁活性残留率测定：
[0084]按照下式计算乌司他丁的活性残留率：活性残留率＝放置x个月后的活性/放置0个月的活性×100％，x为0、6、12、18、24个月。[0085]采用以下方法测定乌司他丁的活性：[0086](1)溶液配制[0087]标准品溶液：精密称取乌司他丁标准品适量，加0.2M三乙醇胺缓冲液配制成浓度为50单位/1mL的乌司他丁标准品溶液。
[0088]上述0.2M乙醇胺缓冲液的配制方法：称取三乙醇胺29.8g，加蒸馏水900ml溶解，用4M盐酸溶液调pH值至7.8，加蒸馏水定容至1000mL，摇匀，即得。[0089]待测品溶液：精密称取本发明涉及地实施例1-6和对比例1-6所述乌司他丁注射液适量，加0.2M三乙醇胺缓冲液配制成浓度为50单位/1mL的乌司他丁待测品溶液。[0090]结晶胰蛋白酶溶液：精密称取结晶胰蛋白酶适量，加预冷氯化钙盐溶液制成浓度为0.1mg/1mL的结晶胰蛋白酶溶液，该溶液现配现用，且于4℃保存。[0091]上述胰蛋白酶的纯度为：7500-10000BAEE单位/1mg蛋白。[0092]上述氯化钙盐溶液的配制方法：称取氯化钙2.94g，加0.001M盐酸溶液1000mL溶解即得。
[0093]苯甲酰-L-精氨酸-对硝基苯胺盐酸盐溶液：称取苯甲酰-L-精氨酸-对硝基苯胺盐酸盐适量，加蒸馏水制成浓度为1mg/mL的溶液，该溶液现配现用，并置暗处保存。[0094](2)测定方法
[0095]取0.2M三乙醇胺缓冲液1.6mL，预热至25±0.1℃后，加至比色池中；加标准品溶液0.2mL，加结晶胰蛋白酶溶液0.2mL，混匀，25±0.1℃保温5分钟；加预热至25±0.1℃的苯甲酰-L-精氨酸-P-对硝基苯胺盐酸盐溶液1.0mL，立即计时并摇匀；以蒸馏水作为空白对照，依照分光光度法(中国药典2005年版二部附录IV)在405nm波长处测定吸光度，测定时间间隔为1分钟，共测定5分钟，吸光度的变化率应恒定。以反应时间为横坐标，吸光度为纵坐标作图，求出每1分钟的吸光度变化率(ΔAs)。[0096]取0.2M三乙醇胺缓冲液1.6mL，预热至25±0.1℃后，加至比色池中；加0.2M三乙醇胺缓冲液0.2mL，加结晶胰蛋白酶溶液0.2mL，混匀，25±0.1℃保温5分钟；加预热至25±0.1℃的苯甲酰-L-精氨酸-对硝基苯胺盐酸盐溶液1.0mL，立即计时并摇匀；以蒸馏水作为空白对照，依照分光光度法(中国药典2005年版二部附录IV)在405nm波长处测定吸光度，测定时间间隔为1分钟，共测定5分钟，吸光度的变化率应恒定。以反应时间为横坐标，吸光度为纵坐标作图，求出每1分钟的吸光度变化率(ΔA0)。[0097]取0.2M三乙醇胺缓冲液1.6mL，预热至25±0.1℃后，加至比色池中；加待测品溶液
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0.2mL，加结晶胰蛋白酶溶液0.2mL，混匀，25±0.1℃保温5分钟；加预热至25±0.1℃的苯甲酰-L-精氨酸-P-对硝基苯胺盐酸盐溶液1.0mL，立即计时并摇匀；以蒸馏水作为空白对照，依照分光光度法(中国药典2005年版二部附录IV)在405nm波长处测定吸光度，测定时间间隔为1分钟，共测定5分钟，吸光度的变化率应恒定。以反应时间为横坐标，吸光度为纵坐标作图，求出每1分钟的吸光度变化率(ΔAt)。
[0098]按下式计算每1mg供试品中乌司他丁的单位数：[0099]U/mg＝[(ΔA0-ΔAt)/(ΔA0-ΔAs)]·B/W[0100]其中：ΔA0为三乙醇胺缓冲液对照管吸光度的变化；[0101]ΔAt为待测品溶液吸收度的变化率；[0102]ΔAs为标准品溶液吸收度的变化率；
[0103]B为每1mL标准品溶液中含乌司他丁单位数。[0104]W为每1mL供试品溶液中含待测品的mg数。[0105]2、模拟体温下的稳定性对比试验[0106]乌司他丁冻干粉试样制备：方法同上。
[0107]考察本发明涉及的实施例1-3所述乌司他丁冻干粉制剂、乌司他丁冻干粉试样以及市售乌司他丁冻干粉针剂在模拟体温，即36.7℃时的稳定性，结果如下表2：[0108]表2乌司他丁冻干粉制剂在36.7℃下的稳定性对比结果
[0109]
本发明涉及的实施例1-3所述乌司他丁冻干粉制剂在模拟体温下，即36.7℃时，无
论利用5％葡萄糖注射液或0.9％氯化钠注射液作为溶剂，均能在40分钟内保持>94％的乌司他丁活性残留率，比现有技术中的乌司他丁冻干粉试样的乌司他丁活性残留率要高，同时，市售乌司他丁粉针剂，在同样条件下，乌司他丁活性残留率不足70％。人体内血液循环速度约为25秒一个循环，因此，本发明提供的乌司他丁冻干粉制剂能够在一定时间内在人体内保持相对更高的活性。[0111]试验方法：
[0112]取实施例1-3所述乌司他丁冻干粉制剂、乌司他丁冻干粉试样以及市售乌司他丁
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说 明 书
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冻干粉针剂各两支，一支用50毫升5％葡萄糖注射液溶解，一支用50毫升0.9％氯化钠注射液溶解。将上述溶液在36.7℃下放置，分别在0分钟、10分钟、20分钟、40分钟、60分钟时取样，按下式计算乌司他丁的活性残留率：活性残留率＝放置x小时后的活性/放置0小时的活性×100％，x为0、10、20、40、60分钟。[0113]乌司他丁活性测定方法同上。
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