外周血循环肿瘤细胞检测在乳腺癌微转移及疗效监测中的应用

・　１Ｏ２　・　福建医药杂志２０１７年６月第３９卷第３期Ｆｕｊｉａｎ　Ｍｅｄ　Ｊ，Ｊｕｎｅ　２０１７，Ｖｏ１．３９，Ｎｏ．３　笔者在行弹力纤维染色时，总结经验如下：１）　的处理方法。　参考文献　［１］Ｒｏｓａｉ　Ｊ．阿克曼外科病理学［Ｍ］．回允中，主译．第９版．北　京：北京大学医学出版社，２００６：１３６—１３７．　皮肤、头皮的组织富含胶原纤维，切片易脱片，故　玻片最好选用多聚赖氨酸处理后的，烤片时间也要　充分些，脱蜡时上下洗片的动作不要太剧烈，切片　的厚度最好约３．５～４／ｚｍ，太厚的组织容易掉片。　２）染色试剂中需要的酸性高锰酸钾中含硫酸，因　硫酸属一级危险品，第３类易制毒化学品，在其保　［２］李冰，刘同慎，马云．长效Ｗｅｉｇｅｒｔ弹力纤维染色液染色效果　分析口］．滨州医学院学报，２００２，２５（２）：１５７．　［３］邵学宝，陈浩，曾学思，等．皮肤色素痣与黑素瘤标本中弹力　纤维染色对比观察［Ｊ］．中国皮肤性病学杂志，２０１５，２９　（１９）：９０１—９０３．　管与配制上存在一定的风险，应注意安全操作。笔　者在实践操作中尝试用２　的高锰酸钾替代酸性高　锰酸钾同样取得较好效果，且氧化时间缩短１　ｍｉｎ　即可。３）醛品红是用乙醇配制的染液，不宜采用　滴染，但随着特殊染色试剂盒的商品化，越来越多　的医院使用试剂盒，其容量一般较小，不适合浸　染，故染色时可在组织周围用油性笔划圈以防染液　外溢，避免染色不均，浪费，其方法类似免疫组化　［４］梁英杰，凌启波，张威．Ｉ临床病理学技术［Ｍ］．北京：人民卫　生出版社，２０１１：１０２—１０５．　［５］赵辨．临床皮肤病学［Ｍ］．第２版．南京：江苏科学技术出版　社，１９９２：９９８—１０００．　［６］雷光，曾亮，陈雪，等．弹力纤维染色在恶性肿瘤中的研究进　展［Ｊ］．１｝缶床与实验病理学杂志，２０１６，３２（９）：１０３７—１０４０．　・实验诊断－Ｎ临床・　外周血循环肿瘤细胞检测在乳腺癌微转移及疗效监测中的应用　福建医科大学省立临床医学院福建省立金山医院普外科福建省立医院重点实验室（福州３５０００１）　陈炬莹　林肖鹰丁昕　【摘　要】　目的探讨外周血循环肿瘤细胞的检测在乳腺癌微转移检测及化疗疗效监测中的应用。方法　选择我院　２０１５年６月至２０１６年６月２３例乳腺癌患者，采用免疫磁珠阴性富集系统检测外周血循环肿瘤细胞数目，对比新辅助化疗前　后的变化，最终评估化疗疗效。结果　与化疗前相比，经过１个和２个周期的化疗后，外周血循环肿瘤细胞的数量均明显减　少，差异有统计学意义（Ｐ＜Ｏ．０５）。结论疗疗效，有助于及时指导临床治疗。　【关键词】乳腺癌微转移；循环肿瘤细胞；预测　【中图分类号１　Ｒ７３７．９　【文献标识码】Ｂ　【文章编号１　１００２—２６００（２０１７）０３—０１０２—０３　外周血循环肿瘤细胞的检测对乳腺癌微转移特异性较高，能较早地有效预测化　“微转移”［】　是肿瘤研究过程中，借助显微镜　或亚显微镜发现的存在于不同的组织、体液和细胞　移植模型中，但应用临床生化、病理学、影像学等　方法无法检测到的微小转移灶。研究显示，外周血　循环肿瘤细胞（ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌｌｓ，ＣＴＣｓ）的　１资料与方法　１．１一般资料：选择福建省立金山医院２０１５年６　月至２０１６年６月确诊的女性乳腺癌患者２３例。入　组条件：１）年龄小于７５岁，经粗针穿刺活检明确　为乳腺癌。２）术前按ＡＪＣＣ（２００３）分期标准判定　为Ⅱ～Ⅲ期，心肺肝肾功能检查均正常，未发现远　处转移。３）Ｋａｒｎｏｆｓｋｙ评分（ＫＰＳ）＞６０分，确　诊前未接受过任何治疗，均按ＡＣ～Ｔ方案行新辅助　化疗。　１．２研究方法：　检测对肿瘤的早期诊断、辅助治疗疗效的实时监测　有一定的临床价值，是预测治疗方案敏感性的一种　简便的“体液活检”［２］。血标本的获取相对简单，　并可反复采集，用于临床常规检查更显优势。本研　究采用免疫磁珠阴性富集系统检测乳腺癌患者新辅　助化疗前后外周血的循环肿瘤细胞数，观察化疗前　后外周血微转移的变化，预测化疗疗效。　１．２．１实验材料：低速台式离心机、原位杂交仪、　荧光显微镜、磁力架；ＣＳ１工作液（１×），ＣＳ２工　作液（１×），ＣＦ２工作液（１×），２×ＳＳＣ溶液　福建医药杂志２０ｌ７年６月第３９卷第３期Ｆｕｊｉａｎ　Ｍｅｄ　Ｊ，Ｊｕｎｅ　２０１７，Ｖｏ１．３９，Ｎｏ．３　・　１０３　・　（ｐＨ　６．７～７．２），乙醇溶液（７５　、８５　、无水），　２％ＢＳＡ溶液，０．２　ＢＳＡ溶液，甲酰胺工作液　（ｐＨ　６．７～７．２）。　１．２．２操作步骤：１）标本采集：对入组患者于新　辅助化疗开始前及化疗１、２周期后３　ｄ抽取静脉血　约３．５　ｍＬ，２４　ｈ内备检。２）ＣＴＣ检测流程：采用　免疫磁珠阴性富集系统，对患者外周血筛除白细　胞，富集血液样本中的ＣＴＣ；加入细胞固定液于富　集细胞，混匀后涂片，并自然干燥后染色；用着丝　粒８＋１７号探针进行荧光原位杂交（ＦＩＳＨ），抗　ＣＤ４５荧光抗体孵育，０．２　ＢＳＡ洗涤２次后加入　ＤＡＰＩ染液复染。　１．２．３　ＣＴＣ判定标准：ＣＤ４５阴性、ＤＡＰＩ阳性且　每种探针信号点＞２的细胞被认为是ＣＴＣ。　１．３统计学方法：用ＳＰＳＳ　２２．０软件进行统计学　分析，化疗前后两组数据之间的比较采用配对ｔ检　验，Ｐ＜Ｏ．０５提示差异有统计学意义。　２　结果　２３例患者化疗前ＣＴＣｓ的阳性率为８６．９　（２０／２３）。２０例ＣＴＣｓ阳性者年龄３０～７５岁，中位　年龄５１．５岁；ＫＰＳ　９１～１００分１９例，８１～９０分１　例；病理类型为浸润性导管癌１８例，特殊类型２　例；ＡＪＣＣ（２００３）分期为Ⅱ期９例，Ⅲ期１１例。　化疗前ＣＴＣｓ的数量为３～２５个／３．５　ｍＬ，平均　（１３－１．６）个／３．５　ｍＬ；１个周期化疗后，ＣＴＣｓ的　数量为２～１６个／３．５　ｍＬ，平均（８．５±０．７）个／　３．５　ｍＬ；２个周期化疗后数量为２～１８个／３．５　ｍＬ，　平均（６．２±０．８）个／３．５　ｍＬ。与化疗前相比，经　过１个周期和２个周期的化疗后，ＣＴＣｓ的数量均　明显减少，差异均有统计学意义（￡一６．３４７，Ｐ一　０．０００；ｔ一５．９０９，Ｐ一０．０００）。按实体瘤ＲＥ—　ＣＩＳＴ２０００疗效评价标准评价疗效，２０例中，部分　缓解（ＰＲ）１６例，疾病稳定（ＳＤ）４例。治疗随　诊过程中发现，有２例Ⅲ期三阴性乳腺癌患者化疗　后ＣＴＣ数进行性升高，其中１例患者化疗前１３个／　３．５　ｍＬ，２周期化疗后升至１６个／３．５　ｍＬ，化疗到　第７周期出现骨转移（ＰＤ，肿瘤进展），调整化疗　方案为ＴＰ（多西他赛７５　ｍｇ／ｍ。Ｄ１＋顺铂２５　ｒａｇ／　ＩＴＩ　Ｄ１—３，２１　ｄ为一周期）方案，ＣＴＣ数继续升至　２１个／３．５　ｍＬ，第８周期又发现肝转移，调整方案　为ＮＰ（长春瑞滨２５　ｍｇ／ｍ　Ｄ１，８＋顺铂２５　ｒａｇ／　ｍ　Ｄ１—３，２１　ｄ为一周期）方案，暂时ＳＤ，复查　ＣＴＣ　３１个／３．５　ｍＬ；另一患者化疗前ＣＴＣ数１５个／　３．５　ｍＬ，２周期化疗后升至１８个／３．５　ｍＬ，１个月　后发现肺转移（ＰＤ），继续调整方案为ＴＰ方案１　周期，ＣＴＣ数继续升至５１个／３．５　ｍＬ，肺结节部　分增大，调整为ＮＰ方案２周期，肺部结节稍缩小　达到ＳＤ。　３　讨论　早在１８９６年，Ａｓｈｗｏｒｔｈ就已经提出循环肿瘤　细胞（ＣＴＣｓ）的概念［３］，通过研究外周循环肿瘤　细胞的表型来探讨人体早期病变和最初转移的机　制。大量研究证实，在肿瘤转移的过程中，可以在　患者的外周血中检测到循环肿瘤细胞，但可能还无　法区分哪些细胞会死于凋亡、坏死，或哪些具有转　移潜能。在多种实体瘤中，包括乳腺癌、结肠癌、　肺癌等，ＣＴＣｓ可以反映肿瘤负荷，预测疾病发展，　协助治疗决策，比传统辅助检查更为精准，更具临　床意义。因此，ＣＴＣｓ的诊治价值以及在转化医学　中的作用就显得越来越突出＿４］。近年来随着免疫细　胞学技术的发展，ＣＴＣｓ的检测技术日益精准，包　括Ｃｅｌｌｓｅａｒｃｈ系统，已经在敏感性和稳定性方面得　到了充分的验证，并得到ＦＤＡ的批准［５　］。我们采　用莱尔公司的免疫磁珠阴性富集系统的优势在于利　用鸡尾酒法，通过包被ＣＤ４５、ＣＤ６１及免疫磁珠，　去除血液中大多数白细胞、巨核细胞、血小板等细　胞，再用免疫荧光染色ＦＩＳＨ技术明确肿瘤细胞，　有效避免ＣＴＣｓ表面抗原表达弱化或缺失导致的假　阴性。　三阴性乳腺癌患者年青、预后差，短期内复发　转移的概率高，尚无标准的治疗方案，除了化疗还　没有其他有效的全身治疗措施，因此尽早筛选出有　效的治疗方案显得尤其重要。本次研究过程中发　现，２例三阴性乳腺癌患者化疗后ＣＴＣ数进行性升　高，考虑原ＡＣ—Ｔ化疗方案疗效差，及时更改化疗　方案，最终使肿瘤ＳＤ。传统的化疗疗效评估手段　一般是在２周期用药后进行影像、肿瘤标志物等监　测，发现复发或转移后，再进行治疗方案调整；如　果未发现明显病灶，继续原方案治疗。而外周血　ＣＴＣ检测可以较早预测患者对化疗的敏感性，１周　期后监测ＣＴＣ发现升高即可调整方案，有助于对　患者病情的精确评估，可指导临床采取针对性的治　疗和随访措施，避免不敏感的化疗延误病情，减少　医疗资源的浪费。当然，ＣＴＣ越高，也暗示肿瘤　近期容易复发转移，预后差。本研究中这两例患者　的病情变化和ＣＴＣ数据的变化是相符的，为今后　临床实践及随访提供了参考依据，为三阴性乳腺癌　的个体化治疗带来了希望［７－８３。　・１０４・　桓建匿垫杂志２０１７年６月第３９卷第３期Ｆｕｊｉａｎ　Ｍｅｄ　Ｊ，Ｊｕｎｅ　２０１７，Ｖｏ１．３９，Ｎｏ．３　许多国内外研究支持ＣＴＣｓ是乳腺癌的独立预　后因素，第８版ＡＪＣＣ乳腺癌分期已经把ＣＴＣｓ写　入分期系统，指导临床实践，预测疗效。相信ＣＴＣ　检测的普及，必将在乳腺癌的精准治疗中具有非常　重要的临床意义。　参考文献　［１］进淑娟，黄焰．乳腺癌微转移检测指标的研究进展［Ｊ］．临床　肿瘤学杂志，２００９，１４（１２）：ｌ１４４—１１４７．　［２］Ｎｅｗｍａｎ　Ａ　Ｍ，Ｂｒａｔｍａｎ　Ｓ　Ｖ，Ｔｏ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ａｎ　ｕｌｔｒａｓｅｎｓｉｔｉｖｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｎｇ　ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ｔｕｍｏｒ　ＤＮＡ　ｗｉｔｈ　ｂｒｏａｄ　ｐａ　ｔｉｅｎｔ　ｃｏｖｅｒａｇｅ　ＥＪ］．Ｎａｔｕｒｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０１４，２０（５）：５４８—５５４．　［３］Ａｓｗｏｒｔｈ　Ｔ　Ｒ．Ａ　ｃａｓｅ　ｏｆ　ｃａｎｃｅｒ　ｉｎ　ｗｈｉｃｈ　ｃｅｌｌｓ　ｓｉｍｉｌａｒ　ｔｏ　ｔｈｏｓｅ　ｉｎ　ｔｕｍｏｒｓ　ｗｅｒｅ　ｓｅｅｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｂｌｏｏｄ　ａｆｔｅｒ　ｄｅａｔｈ［Ｊ］．Ａｕｓｔ　Ｍｅｄ　Ｊ，　１８６９，１４：１４６　１４９．　［４］Ｉ　Ｙ，Ｉ　ｉｕ　Ｑ，Ｗａｎｇ　Ｔ，ｅｔ　ａ１．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ｔｕｍｏｒ　ｃｅｉｌｓ　ｉｎ　ＨＥＲ２　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｐａｔｉｅｎｔｓ：ａ　ｖａｌｕａｂｌｅ　・实验诊断与临床・　２００８—２０１５年福州地区血液质量问题反馈情况分析　福建省血液中心（福州３５０００４）　刘丽霞林授王丽梅　【关键词】血液质量问题；反馈；退回　～一　一～一～一　一一～¨山～一　一～　一渡一　一　一一～一～．茎　一～一～一～　合判断。　【中图分类号１　Ｒ４４６．１１　【文献标识码】Ｂ　【文章编号】１００２—２６００（２０１７）０３—０１０４—０３　血液安全至关重要．血站应该保证发出的血液　质量符合国家有关标准，应当建立质量投诉、不良　反应监测和血液回收制度；但是血液在采集、检　负责在发血时将数据录入至ＣＡＡＢＢ输血服务标准　化系统。临床用血医院的血液质量问题统一反馈至　血液中心供应部门，由血液中心质量管理部门分析　测、制备、储存、运输及临床输血中存在一些不确　定因素，不可避免地导致某些血液不适合输血，造　成各种血液质量问题。本中心２００７年起建立和实　原因并给出处理意见，血液中心供应部门负责将血　液基本情况、质量问题描述及处理意见记录至《血　液质量问题记录》。判断血液质量是否存在问题以　施血液质量投诉的处理程序，对已供应临床的血液　进行质量监控，笔者整理并统计福州地区２００８—　２０１５年血液质量反馈情况。现报告如下。　１资料与方法　及是否与血站相关，以卫生部颁发的《全血及成分　血质量要求》、《血站质量管理规范》，《临床输血技　术规范》等为准绳，以血液质量检测和采供血过程　原始记录、配发血过程原始记录、输注血液的追踪　１．１　资料来源：２００８—２０１５年临床用血量数据来　源于福建省血液中心，采用北美华人输血学会　及检测结果与实验室检查等为依据，全面分析和综　１．３统计学分析：应用ＳＰＳＳ　１３．０软件进行统计　学分析，计数资料的比较采用Ｙ　检验，Ｐ＜０．０５　为差异有统计学意义。　２　结果　（ＣＡＡＢＢ）输血服务标准化系统Ｖ２．０。２００８—　２０１５年福州地区血液质量问题反馈情况统计数据来　源于福建省血液中心质量管理部门的《血液质量问　题投诉和输血不良反应报告受理及血液回收记录》　（简称《血液质量问题记录》）。　２．１　２００８—２０１５年福州地区血液质量问题反馈总　体情况：１）２００８—２０１５年福州地区临床用血共１　１．２方法：临床用血量数据由血液中心供应部门