1.塑料制品作为一种新型材料，具有质轻、防水、耐用、成本低等优点，在全世界被广泛应用且呈逐年增长趋势。特别是塑料袋，成为了人们生活中不可或缺的“生活必备品”，但是由于环境中能分解塑料袋的微生物数量很少，塑料袋不易被降解，也常被人们称为“白色污染”。生物兴趣小组欲寻找土壤中可以降解塑料袋的微生物。(已知塑料袋的主要成分为聚乙烯—[CH2—CH2]n—)
(1)要寻找土壤中能降解塑料袋的微生物，需要在 的环境中采集土样。
(2)选择培养过程应制备 的培养基，从物理性质分，其为 培养基。
(3)若需要对所得菌种进行分离计数，应采用进行 接种。
(4)为避免污染，需将培养皿呈 状态放置。 (5)在对所得菌种进行大规模工业化培养之前，需要先 。
(6)为确定培养基是否被污染，该实验如需对照，对照应设
置 。
2.尿素是一种重要的氮肥，农作物不能将其直接吸收利用，而是通过土壤中的细菌将其分解为氮和CO2后才能被农作物利用。请回答下列问题：
（1）土壤中的某些细菌能分解尿素是因为该种细菌能合成____________。
（2）为筛选尿素分解而制备的培养基中含有的营养物质除尿素外还包括水、碳源
____________等，该培养基能筛选出目的菌株的原因是________________________。 （3）一般依据尿素分解菌菌落的____________、隆起程度和颜色等特征来统计菌落数目。现将10mL尿素分解菌悬液进行梯度稀释，分别取稀释倍数为106的样液接种到3个培养基上，培养一段时间后，统计菌落数分别为39、42、45，则1mL悬液中活细菌数量为____________个。上述过程采用的接种方法是________________________。
（4）为检验培养基及培养皿灭菌是否合格，可采取的措施是 3.中央电视台热播的美食纪录片《舌尖上的中国》受到广大观众的热捧，其中介绍的腐乳是我国独特的传统发酵食品，几百年来深受老百姓的喜爱。腐乳是用豆腐发酵制成，民间老法生产腐乳为自然发酵，现代腐乳生产多采用优良的毛霉菌种进行发酵。现代化生产流程如图。请回答下列问题：（15分）
（1）豆腐为毛霉的生长提供了水、无机盐、 宜制作腐乳，原因是
和
四大类基本营养物质。含水量过高的豆腐不适
。（4分）
（填“需要”或“不需要”）灭菌。（2分）
（2）民间制作腐乳时
（3）现代化生产流程中扩大培养时使用的培养基与毛霉菌种分离时使用的培养基最大的区别是后者培养基中加入了
。（2分）
（4）当豆腐上长出毛霉后，对豆腐要进行 控制在12 左右，原因是
。腐乳制作的后期要加入酒和多种香辛料配制的卤汤，其中酒的含量一般
。（5分） （5）腐乳因加入的辅料不同而产生不同的风味，如红方因加入了
而味厚醇香；
因不加辅
料，用豆腐本身渗出的水加盐腌制而成，因而绵软油滑，异臭奇香。（2分）
4.近日，在美国斯坦福大学的《食物考古学——生产、消费和仪式》课程上，L教授让学生尝试利用大麦、木薯根（富含淀粉）等酿造古中国的啤酒，最终他们酿造了两种不同的啤酒。请回答下列问题：
（1）古代酿酒需要的微生物主要是_______________。方法一“谷物→发芽”过程中，有机物的种类和含量变化情况是
现代酿酒可通过添加“某物质”而省略这一步骤，该“物质”是_____________（填植物激素）。方法二“将木薯根咀嚼”的主要目的
是 。“加热”和“煮沸”都是为了 （2）酿酒结束后学生对啤酒的酒精含量进行检测，结果发现酒精含量都为12%—16%，可能的原因是营养物质减少
及 。若学生在实验后想检测有无活菌的存在，可制作固体培养基，用____________进行计数，他们最可能的统计结果
是 。
（3）在该课程的后续学习中，他们想尝试制作古中国贵族使用的玫瑰精油，通常采用_______________法从玫瑰花瓣中提取玫瑰精油。
5.某科研小组研究发现，若长期使用杀虫剂S（一种有机磷农药）可造成其在土壤中严重残留，而木霉能有效将其降解。请分析回答下列问题：
（1）木霉可用加入___________作为唯一碳源的___________（按用途分）培养基加以分离。
（2）配制培养基还需满足木霉对pH的需求，应在灭菌___________（填“前”或
“后”）调节pH。探究木霉降解杀虫剂S的适宜pH，可向含有等量木霉、不同pH的培养基中分别加入等量杀虫剂S，几天后检测
___________ 。
（3）配制好的培养基应在适宜的环境中放置一段时间，观察培养基上
___________ ，以判别培养基是否被污染。欲测定木霉的数目，可用___________计数板直接计数。若将100mL含木霉的土壤样液稀释105倍，取稀释液均匀涂布在选择培养基表面，测得菌落数的平均值为121个（空白对照组无污染），则原来的100mL样液中含有木霉___________个，而原土壤样液中的实际值一般会比计算值___________。
6.自养需氧型的硝化细菌能够降低水体中的铵盐，对水体有一定的净化作用，请回答： （1）培养硝化细菌时，将含固体培养基的培养皿倒置的目的是 。培养基中加人铵盐为硝化细菌的生长提供 ，培养基中没有加人有机碳，从功能上看这种培养基属于 培养基。
（2）硝化细菌纯化并计数时，对照组应该涂布等量的 。样液稀释10倍后，取 mL涂布到四个平板，统计其菌落数分别为251、265、276、348个，可推测原样液中硝化细菌的浓度为 个/mL，该方法测定的硝化细菌的含量和实际值相比，一般 （填“偏大”或“偏小”）。
（3）若要探究弱酸弱碱条件下硝化细菌对铵盐转化能力的大小，现提供足量含某铵盐的液体培养基及pH值分别为5、9、7的弱酸和弱碱缓冲液，写出你的实验设计思路。（注：物质的具体检査方法不做要求。）
7.为提高玫瑰精油出油率，研究者对传统的玫瑰精油提取方法进行改进，具体流程如下：鲜玫瑰花+清水+NaCl→水蒸气蒸馏→提取液→石油醚→萃取→浓缩→玫瑰花精油，并研究了影响出油率的相关因素，实验结果如下图。回答下列问题：
（1）研究者在提取玫瑰精油时采用了___________法和___________法结合的工艺，其中利用石油醚对提取液进行处理依据了玫瑰精油___________的特性。 （2）玫瑰花应在花开的盛期采收，是因为
______________________ 。
（3）该实验中清水与玫瑰花的质量比一般控制在___________。为提高出油率，还应将蒸馏时间和NaCl浓度分别控___________和___________。
（4）若将提取液放置一段时间后，再进行萃取，玫瑰精油含量会下降，可能的原因是___________ 。
8.如图1是在发酵罐内利用三孢布拉氏霉发酵生产 β-胡萝卜素过程中,菌体生物量及β-胡萝卜素产量随时间变化曲线图.图2是样品层析结果及与β-胡萝卜素标准样的比对.请回答下列问题:
(1)发酵罐内三孢布拉氏霉培养基中玉米粉和豆饼为微生物的生长分别主要提供 在接入菌种前,应对培养基进行 ,以避免杂菌污染.
(2)图1中,菌体的最快增长首先出现在第 h,菌体的生物量到达最大值后下降,其
原因是 (3)β-胡萝卜素常用提取方法为 法,实验表明,石油醚的提取效果远好于丙酮和乙醚,原因是 。
(4)对 β-胡萝卜素样品进行分离鉴定的方法是 ,结果如图2.从图中分析可知,色带 为β-一胡萝卜素.
9.青蒿素是一种治疗疟疾的特效药，加热易分解。请回答下列问题：
（1）可用萃取法来提取青蒿素，说明青蒿素具有_________ 的特点，萃取的效率主要取决于______________ 。 （2）萃取前需对材料进行粉碎、干燥处理，粉碎的目的是
___________ ；干燥时一般采用低温烘干的方法，依据
是 。 （3）萃取后在浓缩之前需进行__________，以除去萃取液中的不溶物。浓缩的目的是去除萃取液中的 ，获得青蒿素。
3
（4）青蒿素可作用于疟原虫细胞内的多种膜结构，如线粒体，从而影响疟原虫的_________供应，除此外还可作用于________等细胞结构，最终导致疟原虫死亡。
10.黄精多糖是植物黄精中的一种重要成分，具有较高的药用价值。它是由单糖缩合而成的一种多聚体，易溶于水，不溶于60%以上的乙醇。常用提取流程：黄精原料→干燥粉碎→石油醚脱脂过滤→黄精渣→加蒸馏水后加热提取→滤渣后收集提取液→加入乙醇后离心→收集沉淀物后干燥→黄精多糖粗品→去除蛋白质和小分子物质→精制黄精多糖。回答下列问题：
（1）根据提取流程分析黄精多糖___________（填“溶于”或“不溶于”）石油醚。
（2）在用蒸馏水提取时加热的目的是______________________ ，从而提高提取效
率。在加热提取过程中除温度外，影响提取效率的因素还包括_________________________________ （答两点即可）。
（3）在提取液中加入乙醇的目的是
_________________________________ 。
（4）在得到黄精多糖粗品后可将其再次溶解于蒸馏水，并加入一定量的氯化钠，离心去除沉淀，则沉淀物中的主要成分是___________，再将上清液装入具有半透性的透析袋中处理一段时间，就可获得精致黄精多糖，利用透析袋处理的原理和目的
是 。
11.为筛选产酸能力强的醋酸菌用于柑橘果醋酿造，实验过程如下图:
回答下列有关问题： （1）自然发酵制作柑橘醋时，先发酵得柑橘酒，然后通过改变 和 等条件可生产柑橘醋。
（2）步骤①中进行选择培养的目的是 。 （3）步骤②中需将菌液进行 操作，再取适量菌液涂布平板进行初筛，所用培养基加入碳酸钙的目的是 。 （4）步骤③复筛的目的是进一步筛选 的菌株。为保藏目的菌株，可将菌种接种到斜面培养基上进行 （填“长期”或“临时”）保藏。 （5）
利用目的菌进行醋酸发酵时，发酵液中酒精浓度过髙，醋酸产量会下降，原因是 。
12.微生物培养技术在医疗、工业生产等方面均有应用。烧伤病人容易感染绿脓杆菌，临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。请回答下列相关问题：
(1)适于绿脓杆菌生长的培养基中的营养成分一般含有___________ ，除了提供以上几种主要营养物质外，培养基还需要满足微生物生长对___________、特殊营养物质以及氧气的要求。
(2)若对绿脓杆菌进行分离计数，需要将含有绿脓杆菌的菌液采用___________法接种于固体培养基表面进行培养，这种接种方法的好处是___________ 。 (3)面对培养基进行灭菌后，待培养基冷却至50℃时，需要在___________附近倒平板。接种时所用的接种环在接种前后都需要通过___________法灭菌。
(4)将分别含等剂量不同抗生素的相同大小的小滤纸圆片均匀置于该平板上的不同位置，在适宜条件下培养一段时间，结果滤纸片周围均出现透明圈，这说明绿脓杆菌对实验所用抗生素表现为___________(填“敏感”或“不敏感”)。
1.(1)富含聚乙烯(2)以聚乙烯为唯一碳源 固体(3)稀释涂布平板法(4)倒置(5)测定菌种分解聚乙烯的能力
(6)配置以聚乙烯为唯一碳源的固体培养基，不接种任何菌种或接种等量的无菌水
2.脲酶 无机盐 只有以尿素作为唯一氮源的细菌才能在该培养基上生长 形态、大小 ×108 稀释涂布平板法 单独设置一个灭菌后不接种样液的培养皿（含培养基）进行培养
3.（1）碳源；氮源；豆腐不容易成形（2）不需要（3）琼脂（4）加盐腌制；酒精浓度过高则腐乳的成熟时间会延长，酒精浓度过低，不足以抑制微生物的生长， 可能导致豆腐腐败（5）红曲；青方
4（1）酵母菌 种类增多，含量减少 赤霉素 利用唾液淀粉酶将木薯根中的淀粉分解成麦芽糖防止（或灭菌）
（2）酒精毒害，pH变化，使酵母菌死亡率上升，酒精发酵最终停止 稀释涂布平板法培养基上没有菌（或培养基上菌落数很少）（3）水蒸气蒸馏
5.（1）杀虫剂S 选择（2）前 杀虫剂S的残留量 （3） 是否产生菌落 血细胞 （或血球） 偏大
6.（1）防止冷凝形成水滴污染培养基（或防止培养基表面的水分过快挥发） 氮源 （或氮源和能量） 选择 （2）无菌水 ×106 偏小 （3）将含铵盐的液体培养基均分成三等份，分别加入等量的弱酸、弱碱缓冲液和无菌水（作为对照）使其pH值依次调节为5、9、7，培养相同时间后，测定培养基中的铵盐的剩余量来判断硝化细菌对铵盐转换能力的大小
7.（1）水蒸气蒸馏 萃取 易溶于有机溶剂 （2） 此阶段花朵含油量最高 （3） 4:1 4h % （4） 放置过程中，一部分玫瑰精油挥发
8.(1)碳源和氮源 高压蒸汽灭菌(2)100 营养物质缺乏,有害代谢产物积累(3)萃取 萃取胡萝卜素应用水不溶性有机溶剂，丙酮是水溶性不可用。石油醚为水不溶性有机溶剂,比乙醚高,萃取效果好(4)纸层析法
9（1）易溶于有机溶剂 萃取剂的性质和使用量 （2）使萃取剂与原料充分接触，提高萃取的效率 高温加热条件下青蒿素易分解（3）过滤 萃取剂 （4）能量（ATP） 内质网 细胞膜 10（1）不溶于 （2）提高黄精多糖在蒸馏水中的溶解度 提取时间 、原料颗粒大小 （3）使提取液中的黄精多糖析出 （4）粗品中的蛋白质 利用小分子物质可通过透析袋而大分子不能通过的原理将粗品的小分子物质去除。
11（1）氧气浓度 温度（2）增加醋酸菌的浓度（3）系列稀释 鉴别产醋酸的菌株和中和产生的醋酸
（4）产醋酸能力强 临时（1分）（5）发酵液中酒精浓度过高，会抑制醋酸菌的生长和繁殖，导致醋酸产量低
12.(1)碳源、氮源、水和无机盐 pH(2)稀释涂布平板 可得到单个的菌落(或可将菌群分散成单个的细菌)
(3)酒精灯火焰 灼烧(4)敏感
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