牛蒡子炮制前后化学成分变化研究

２０１５年８月　第１７卷第８期　中国现代中药Ｍｏｄｅｒｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ａｕｇ．２０１５　Ｖｏ１．１７　Ｎｏ．８　・基础研究・　牛蒡子炮制前后化学成分变化研究△　袁颖，冉小库，徐煜彬，窦德强　（辽宁中医药大学药学院，辽宁大连１１６６００）　［摘要］　目的：比较牛蒡子炮制前后色谱指纹图谱，对变化成分进行分离纯化，并进行结构鉴定，进一步对牛　蒡子炮制机理进行探讨研究。方法：采用高效液相色谱法，建立牛蒡子的指纹图谱，揭示其炮制后成分变化规律，　采用系列硅胶、反相硅胶柱色谱、高效液相色谱，对变化成分进行分离纯化，结合ＮＭＲ波谱学数据，对化合物进　行结构解析，确定其结构。结果：建立了牛蒡子生品与制品在２９６　ｎｍ波长下的指纹图谱，通过对比发现了两个非　木脂素类变化成分。分离并鉴定了两个化合物，分别是３，５－二咖啡酰基奎宁酸和４，５－－￣酰基奎宁酸，二者含　量在炮制前后存在显著变化。结论：共分离得到两个酚酸类物质，并且二者为首次从牛蒡子果实中分离得到。通过　研究发现，由于牛蒡子在炮制过程中受温度影响，其所含有的３，５－二咖啡酰基奎宁酸可向４，５－二咖啡酰基奎宁酸　转化，从而使牛蒡子生品与制品在指纹图谱上出现较大差异，本研究可以为牛蒡子的炮制机理及质量标准研究提供　一定的理论依据。　［关键词］　牛蒡子；炮制；咖啡酰基奎宁酸；化学成分　Ｓｔｕｄｉｅｓ　ｏｎ　Ｃｈａｎｇｅ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｎｓｔｉｔｕｎｅｔｓｉｎ　Ａｒｃｔｉｉ　Ｆｒｕｃｔｕｓ　ａｆｔｅｒ　Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ　ＹＵＡＮ　Ｙｉｎｇ，ＲＡＮ　Ｘｉａｏｋｕ，ＸＵ　Ｙｕｂｉｎ，ＤＯＵ　Ｄｅｑｉａｎｇ　（Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆｐｈａｒｍａｃｙ，Ｌｉａｏｎｉｎｇ　ｅ　ｆ　ｏＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｅ，Ｄａｌｎｉａｎ　１　１６６００，Ｃｈｉｎａ）　［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　ＯＭｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｉｓｏｌａｔｅ　ａｎｄ　ｅｌｕｃｉｄａｔｅ　ｔｈｅ　ａｌｔｅｒｅｄ　ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ　ｉｎ　Ａｒｃｔｉｉ　Ｆｒｕｃｔｕｓ　ａｆｔｅｒ　ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ　ｂｙ　ｃｏｍｐａｒｉｎｇ　ｔｈｅ　ｖａｒｉａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｔｈｅｉｒ　ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓ，ａｎｄ　ｃｌａｒｉｆｙ　ｔｈｅ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　ｐｒｏｃｅｓｓｉｎ￣Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ　ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓ　ｗｅｒｅ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ｗｉｔｈ　ＨＰＬＣ，ａｎｄ　ａ　ｓｅｒｉｅｓ　ｏｆ　ｃｏｌｕｍｎ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｗｅｒｅ　ａｐｐｌｉｅｄ　ｔｏ　ｏｂｔａｉｎ　ｔｈｅ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｓｔｒｕｅｔｕｒｅｓｗｅｒｅ　ｅｌｕｃｉｄａｔｅｄ　ｂｙ　ＮＭＲ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｗｏ　ｐｈｅｎｏｌｉｃ　ａｃｉｄｓ　ｗｅｒｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ａｎｄ　ｅｌｕｃｉｄａｔｅｄ　ａｓ　３，５－ｄｉｃａｆｆｅｏｙｌ　ｑｕｉｎｉｃ　ａｃｉｄ，４，５－ｄｉｃａｆｆｅｏｙｌ　ｑｕｉｎｉｃ　ａｃｉｄ，　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｃｈａｎｇｅｄ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ　ａｆｔｅｒ　ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｗｏ　ｐｈｅｎｏｌｉｃ　ａｃｉｄｓ　ｗｅｒｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ，ａｎｄ　ｂｏｔｈ　ｏｆ　ｔｈｅｍ　ｗｅｒｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｉｓ　ｄｒｕｇ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｆｉｒｓｔ　ｔｉｍｅ．ａｎｄ　ｗｅ　ａｌｓｏ　ｆｏｕｎｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　３，５－ｄｉｃａｆｆｅｏｙｌ　ｑｕｉｎｉｃ　ａｃｉｄ　ｃａｎ　ｔｒａｎｓｆｏｒｍ　ｔｏ　４，５－ｄｉｃａｆｆｅｏｙｌ　ｑｕｉｎｉｃ　ａｃｉｄ，ｄｕｒｉｎｇ　ｔｈｅ　ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ　ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ，ｉｔ　ｍａｙ　ｂｅ　ｃａｕｓｅｄ　ｂｙ　ｈｅａｔ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｐａｔｉａｌ　ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｏｆ　４，５－ｄｉｃａｆｆｅｏｙｌ　ｑｕｉｎｉｃ　ａｃｉｄ　ｍａｙ　ｂｅ　ｍｕｃｈ　ｍｏｒｅ　ｓｔａｂｌｅ　ｔｈａｎ　３，５－ｄｉｃａｆｆｅｏｙｌ　ｑｕｉｎｉｃ　ａｃｉｄ，ｔｈｉｓ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｃａｎ　ｐｒｏｖｉｄｅ　ｔｈｅｏｒｙ　ｅｖｉｄｅｎｃｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ．　［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］　Ａｒｃｔｉｉ　Ｆｒｕｃｔｕｓ；ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ；ｃａｆｆｅｏｙｌｑｕｉｎｉｃ　ａｃｉｄ；ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｄｏｉ：１０．１３３１３／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３－４８９０．２０１５．８．００７　牛蒡子为菊科植物牛蒡Ａｒｃｔｉｕｍ　ｌａｐｐａ　Ｌ．的干燥　成熟果实，属辛凉解表药，具疏散风热、宣肺透疹、　解毒利咽之功效。用于治疗风热感冒、咳嗽痰多、　麻疹、风疹、咽喉肿痛、痄腮、丹毒、痈肿疮毒等　症…，又名恶实、鼠粘子、黍粘子、大力子等，在　我国分布广泛，其中以浙江产“杜大力”和东北产　“关大力”最为有名［２－３］。牛蒡子中主要含有木脂素　类化合物，其中以牛蒡苷的含量最高，能达到药材　［基金项目］　辽宁省高等学校创新团队课题（ＬＴ２０１３０２０）　的５％，现代药理研究表明牛蒡子具有抗病毒、抗　菌、抗癌、抗糖尿病、免疫调节、利尿、抗氧化等　作用　剖。牛蒡子中化学成分报道以木脂素类较多，　而其他类成分鲜有报道。牛蒡子临床用药以炮制品　居多，关于牛蒡子炮制的研究较多，但是炮制后化　学成分变化情况并没有很好地得以解释，本研究通　过结合中药化学提取分离技术及核磁共振波谱解析　技术以及高效液相指纹图谱技术，对牛蒡子炮制后　【通信作者］　窦德强，教授，研究方向：中药药效物质基础及新药开发；Ｔｅｌ：（０４１１）８５８９０１４３，Ｅ—ｍａｉｌ：ｄｅｑｉａｎｇｄｏｕ＠１２６．ｅｏｍ　・７９ｌ・　２０１５年８月　第１７卷第８期　中国现代中药Ｍｏｄｅｍ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ａｕｇ．２０１５　Ｖｏ１．１７　Ｎｏ．８　化学成分进行研究，以期为牛蒡子质量控制以及炮　制机理提供依据。　１仪器与材料　１．１仪器　Ａｇｉｌｅｎｔ　１２６０高效液相色谱仪（四元泵、在线脱　气、ＤＡＤ检测器，美国安捷仑科技有限公司）；ＡＥ　系列电子分析天平：ＦＡ一１００４电子天平（上海精科天　平厂）；ＭＥＴＩ＇ＬＥＲ　ＡＢ１３５一Ｓ十万分之一电子天平（瑞　士）。Ｂｕｒｋｅｒ－ＡＲＸ－６００型核磁共振光谱仪（德国　Ｂｕｒｋｅｒ公司）；ＫＱ－２５０ＤＥ型数控超声波清洗器（昆　山市超声仪器有限公司）；ＨＩＴＡＣＨＩ　ＬＣ－７１００型高效　液相色谱仪，ＵＶ－７４００检测器（日本日立公司），　ＹＭＣ．Ｃ　色谱柱（ＯＤＳ）（Ｅｌ本ＹＭＣ公司，２５　ｃｍ　ｘ　９．４　ｍｍ，５　ｍ），Ａｇｉｌｅｎｔ　Ｅｃｌｉｐｓｅ　ＸＤＢ—Ｃ１８色谱柱　（ＯＤＳ）（美国Ａｇｉｌｅｎｔ公司，１５０　ｍｍ×４．６ｒａｍ，　５　ｍ）；高速万能粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公　司）；１０１型电热鼓风干燥箱（北京市永光明医疗仪　器厂）；中药色谱指纹图谱相似度评价系统２００４Ａ　（国家药典委员会）。　１．２材料　甲醇（天津市科密欧化学试剂有限公司，色谱　纯），甲酸（天津市凯信化学工业有限公司，优级　纯），水（娃哈哈纯净水），其他试剂均为分析纯。　实验所用１０批牛蒡子分别购自全国各药店，由　辽宁中医药大学康廷国教授鉴定为Ａｒｃｔｉｕｍ　ｌａｐｐａ　Ｌ．　的干燥成熟果实。　２方法与结果　２．１色谱条件　Ａｇｉｌｅｎｔ　Ｅｃｌｉｐｓｅ　ＸＤＢ—Ｃ１８柱（１５０　ｍｍ　ｘ　４．６　ｍｍ，　５　ｍ），流动相：甲醇（Ａ）、０．２５％磷酸水（Ｂ），梯　度洗脱，梯度程序见表１。流速：１　ｍＬ・ｍｉｎ～；检测　波长：２９６　ｎｍ，进样体积：１０　，所有组分色谱峰　均在４５　ｍｉｎ内流出完毕。　表１流动相梯度洗脱程序表　・７９２・　２．２供试品溶液的制备　取不同产地牛蒡子生制牛蒡子粉末各５　ｇ，置于　５０　ｍＬ容量瓶中，加入甲醇约４５　ｍＬ，超声处理（功　率１５０　Ｗ，频率１２０　ｋＨｚ）３０　ｍｉｎ，放冷，加甲醇定　容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。　２．３指纹图谱的建立　共采集不同产地１Ｏ批牛蒡子生品与制品色谱　图，将所得结果导人中药色谱指纹图谱相似度评价　系统２００４Ａ（国家药典委员会），得到公共指纹图谱。　见图１～４。　０　６．５２　１３．０３　１９．５５　２６．０７　３２．５８　３９．１０　４５．６２　ｄｍｉｎ　图１　１０批牛蒡子生品匹配前色谱图　０　６．５２　１３．０３　１９．５５　２６．０７　３２．５８　３９．１０　４５．６２　ｄｍｉｎ　图２　１０批牛蒡子制品匹配前色谱图　１０　ｉ　ｌ＾１．诮　０　６．５２　ｌ３．Ｏ３　１９．５５　２６．０７　３２．５８　３９．１０　４５．６２　ｄｍｉｎ　图３　１０批牛蒡子生品公共指纹图谱　２０１５年８月　第１７卷第８期　中国现代中药Ｍｏｄｅｍ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ｕ　Ｏ　Ｏ　０　０ｍ　８０　６．５２　ｌ３．Ｏ３　ｌ９．５５　２６．Ｏ７　３２．５８　３９．１Ｏ　４５．６２　ｔ／ｍｉｎ　图４　１０批牛蒡子制品公共指纹图谱　２．４结果　１Ｏ批牛蒡子生品及制品的指纹图谱与各自公共　指纹图谱相似度均在０．９以上，说明该方法稳定可　靠。通过生品与制品公共指纹图谱的对比，发现在　２９６　ｎｍ波长下，１０号和１２号色谱峰含量变化显著，　其中１０号峰物质含量明显下降，１２号峰物质含量显　著提高。牛蒡子中主要含牛蒡子苷等木脂素类成分，　木脂素类成分的紫外吸收图如图５所示，而１Ｏ、　１２号色谱峰的紫外吸收图经ＤＡＤ检测器查看得　图６，发现其并非为木脂素类成分，究竟为何物质，　未曾有人揭示，因此笔者对ｌ０、１２号峰进行了系统　分离鉴定研究。　ｍＡＵ　１２　ｌ０　８　６　４　，　０　图５牛蒡子中木脂素类成分紫外吸收图　２．５色谱峰１０和１２的化学成分研究　２．５．１提取和分离干燥的制牛蒡子３　，粉碎成粗　粉，８倍量乙醇回流提取２次，每次提取２　ｈ，滤过，　合并滤液，回收乙醇至无醇味，加水形成悬浮液，　分别用等体积的石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、正　丁醇萃取，分取有机相，得石油醚浸膏７２　ｇ，三氯　甲烷浸膏２００　ｇ，乙酸乙酯浸膏２０　ｇ，正丁醇浸　膏６０　ｇ。　取正丁醇浸膏用二氯甲烷一甲醇溶解，加入１００—　２００目硅胶１２０　ｇ拌匀，挥干溶剂。称取２００—　３００目硅胶１０００　ｇ，加二氯甲烷浸泡，使其充分溶　胀，装柱，待硅胶沉降完全，上样。以二氯甲烷．甲　醇（１００：１０～Ｏ：１００）进行梯度洗脱，每２５０　ｍＬ为１个　流分，共收集５０个流分。ＴＬＣ检识，合并相似者。　１～１５合并为成分Ｉ，１６—２８合并为成分Ⅱ，　２９～３８合并为成分Ⅲ，３９—４２合并为成分Ⅳ，４３～　５Ｏ合并为成分Ｖ。　将成分Ⅱ经反相硅胶开放柱色谱分离，甲醇．水　（２０：８０，８０：２０，１００：０）为洗脱剂洗脱，相同梯度洗　脱液合并，共收集３部分，分别标记为Ｆｒ２—１，　Ｆｒ２—２，Ｆｒ２－３。Ｆｒ２－２采用高效液相色谱法分离，以　甲醇－０．０５％甲酸水（４６：５４）为流动相，３２０　ｎｍ波长　下检识，得到纯品化合物１（３０　ｍｇ）。　将成分Ⅲ经反相硅胶开放柱柱色谱分离，甲醇．　水（２０：８０，８０：２０，１００：０）为洗脱剂洗脱，相同梯度　洗脱液合并，共收集３部分，分别标记为Ｆｒ３．１，　Ｆｒ３－２，Ｆｒ３—３。Ｆｒ３－２采用高效液相色谱法分离，以　甲醇－０．０５％甲酸水（４３：５７）为流动相，３２０　ｎｍ波长　下检识，得到纯品化合物２（３５　ｍｇ）。　２．５．２结构鉴定　化合物１：棕色粉末，易溶于甲　醇、吡啶等有机溶剂，ＵＶ　ＭｅＯ　Ｈ（ｎｍ）：２１８，２４８，　２９５，３２７。碳谱显示有２５个碳原子信号，其中３个　羰基信号碳，化学位移值为６　１６８．８，１６８．４，　１７８．５，１６个烯碳原子化学位移　１１５～１４９处，其　中１２个为苯环碳原子，其中部分碳信号重叠，结合　氢谱数据６　７．５９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．８　Ｈｚ），７．６２（１Ｈ，　ｄ，Ｊ＝１５．８　Ｈｚ），６．３４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．８　Ｈｚ），６．２６　（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．９　Ｈｚ），提示含有２个反式双键，　６．７９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０　Ｈｚ），７．Ｏ６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝　２　Ｈｚ），６．９７（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．０，８．０　Ｈｚ），提示具　有２个ＡＢＸ系统的苯环，结合ＨＳＱＣ、ＨＭＢＣ二维　谱，判断出该结构包含两个咖啡酰基，化学位移值　为　７４．８４，３６．１２，７２．１４，７０．８４，７２．６８，３７．８７，　１７７．６的碳信号为奎宁酸基团信号，因此该化合物　为二咖啡酰基奎宁酸类物质，经与文献［７］对照，　碳谱、氢谱数据基本相同，故判断该化合物为３，５一　二咖啡酰基奎宁酸（３，５－ｄｉｃａｆｆｅｏｙｌ　ｑｕｉｎｉｃ　ａｃｉｄ），分　子式为ｃ　Ｈ　Ｏ　：，核磁数据及结构见表２、图７。　・７９３．　１　第８期　２　３　４　２０１５年８月　第１７卷５　６　７　１　２　３　４　５　６　ｎｅｓ７　８　９　中国现代中药Ｍｏｄｅｍ　Ｃｈｉｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ａｕｇ．２０１５　Ｖｏ１．１７　Ｎｏ．８　７４．８４　３６．１２　７２．１４　７０．８４　７２．６８　７４．７５　２．１５（１Ｈ，ｄｄ，６．９，１４　ｎｚ）　５．３９（１Ｈ，ｍ）　３．９７（１Ｈ，ｄｄ，３．２，７．６　Ｈｚ）　３６．１２　７２．０６　７０．７１　７２．５６　２．１７　１Ｈ　ｍＩ　５．４０　１Ｈ　３．９８　１Ｈ　ｂｒｄ，６．５　ｎｚ）　２．８，７．２　Ｈ２．）　５．４３（１Ｈ，ｍ）　２．２２Ｈ（２Ｈ，ｍ）　５．４３　１Ｈ　２．２２　２Ｈ　ｄｔ，３．７，７．５　Ｈｚ）　ｍ】　３７．８７　１７７．６　１２７．９８　３７．６７　１７７．４３　１２７．９２　ｌ１５．２９　１４６．７０　１４９．５７　１ｌ６．４９　１　２　７．０６（１Ｈ，ｄ，２．１　Ｈｚ）　１１５．２６　１４６．７３　７．Ｏ６（１Ｈ，ｂｒｓ）　１４９．６４　３　　１６．７９（１Ｉ４，　ｄ，８　Ｈｚ）４　５　６　７　１１６．４７　　２　３　４　５　６　７　８　９　６．７７（１Ｈ　ｄ，７．２　Ｈｚ）　６．９４　Ｈ　１２２．９６　１４７．２３　１１５．１９　６．９７（１Ｈ，　ｄｄ，２，８　Ｈｚ）　７．５９（１Ｈ，　ｄ，１５．８　ｎｚ）　１２３．１３　１４７．７０　１１４．７３　１６８．８７　ｄ，７．２　Ｈｚ）　ｄ，１５．９　Ｈｚ）　ｄ，１５．９　Ｈｚ）　７．６０　Ｈ　６．３４　Ｈ　６．３４（１Ｈ，　ｄ，１５．８　ｎｚ）　１６８．４１　ＨＯ　Ｈ　２．０　Ｈｚ），提示含有２对ＡＢＸ系统的苯环，碳谱与氢　谱跟化合物１非常相似，推测为其同类物质，认为该　结构包含两个咖啡酰基，化学位移值为６　７５．９，３８．４，　６９．０，７５．９，６９．５，３９．５的碳信号为奎宁酸基团信　号，因咖啡酰基取代位置不同，因此奎宁基团碳信号　０　与化合物１有差别。与文献［７］对照，碳谱、氢谱　数据基本完全相同，故判断该化合物为４，５一二咖啡　酰基奎宁酸（４，５－ｄｉｃａｆｆｅｏｙｌ　ｑｕｉｎｉｃ　ａｃｉｄ），分子式为　ＨＯ　Ｈ　ｃ　Ｈ　０　，结构及核磁数据见图８和表３。　Ｈｎ　图７　３，５－二咖啡酰基奎宁酸（３。５－ｄｉｃａｆｆｅｏｙｌ　ｑｕｉｎｉｃ　ａｃｉｄ）　ｏＨ　化合物２：棕色粉末，易溶于甲醇、吡啶等有　机溶剂，ｕＶ　（ｎｍ）：２１８，２４８，２９５，３２７。碳谱　中共存在２５个碳原子信号，３个羰基信号碳，化学　位移值为６　１６８．３，１６８．６，１７８．５，１６个烯碳原子化　学位移　１１５～１４９处，其中ｌ２个为苯环碳原子，其　中部分碳信号重叠，结合氢谱数据６　７．５９（１Ｈ，ｄ，　Ｊ＝１５．８　Ｈｚ），７．５１（１Ｈ，ｄ，．，＝１５．８　Ｈｚ），６．２８　Ｏ　Ｏ　（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．８　Ｈｚ），６．１８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．９　Ｈｚ），　ＨＯ　得出该化合物含有２个反式双键，　６．７４（１Ｈ，ｄ，　Ｊ＝８．０　Ｈｚ），６．７３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０　Ｈｚ），６．９０（１Ｈ，　ｄｄ，Ｊ＝２．０，８．０　Ｈｚ），６．９０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．０，　８．０　Ｈｚ），７．０１（１Ｈ，ｄ，２．０　Ｈｚ），７．００（１Ｈ，ｄ，　・Ｈ０　图８　４，５一二咖啡酰基奎宁酸（４，５－ｄｉｃａｆｆｅｏｙｌ　ｑｕｉｎｉｃ　ａｃｉｄ）　７９４－　２０１５年８月第１７卷第８期　中国现代中药Ｍｏｄｅｍ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ａｕｇ．２０１５　Ｖｏ１．１７　Ｎｏ．８　７５．９Ｏ　３８．４２　６９．Ｏ３　７５．９０　６９．５１　２．２３　２Ｈ　７６．０５　ｍ）　ｍ）　ｄｄ，８．５，３．０　Ｈｚ）　ｂｒｓ）　ｍ　３８．３７　６８．９７　７５．７３　２．２３　２Ｈ　４．３７　１Ｈ　５．１１　１Ｈ　ｍ）　ｍ）　４．３７　１Ｈ　５．１１　１Ｈ　５．６３　１Ｈ　２．３０　１Ｈ　ｄｄ，９．０，３．０　Ｈｚ）　１Ｈ　６９．３４　Ｈ　Ｈ　Ｈ　５．６１Ｈ　　Ｈ　Ｈ　Ｈ　Ｈ　ｄｄｄ，４．５，９．２，９．４　Ｈｚ）　３８．３７　２．３Ｏ　１Ｈ　２．１０　１Ｈ　１７６．８０　１２７．７０　１２７．６４　３９．５２　ｍ）　ｄｄ，４．０，１４．２　ｎｚ）　２．１Ｏ　ｌＨ　ｍ１　１７８．５３　１２７．７３　１２７．６７　１１５．２１　１１６．４１　３　７．叭（１Ｈ，ｄ，２．０　Ｈｚ）　７．Ｏ０（１Ｈ，ｄ，２．０　Ｈｚ）　３　１１５．１９　７．０１（１Ｈ．　ｄ，２．０　Ｈｚ）　１１５．１９　１４６．７３　７．ＯＯ（１Ｈ，　ｄ，２．０　Ｈｚ）　１４６．７５　１４７．５６　１４６．７３　４　４　１４９．６４　ｌ４９．６４　１４９．６４　１４９．６４　６．７４　６．７３　６．９０　６．９０　７．５９　７．　５１　６．２８　６．１８　５　１１６．４９　１１６．４９　ｄ，８．０　Ｈｚ）　５　１ｌ６．４７　１１６．４７　６．７４　６．７３　６．９０　ｄ，８．０　Ｈｚ）　ｄ，８．２　Ｈｚ）　ｄｄ，２．０，８　０　Ｈｚ）　ｄｄ，２．０，８　０　Ｈｚ）　ｄ，１５．９　Ｈｚ　ｄ，８．２　Ｈｚ）　ｄｄ，２．０，８　０　Ｈｚ）　６　１２３．１２　１２３．１２　６　１２３．１３　１２３．１３　１４７．４０　６．９０　７．５９　ｄｄ，２．０，８　０　Ｈｚ、　ｄ，１５．９　Ｈｚ　７　１４７．６９　１４７．５６　Ｉ１４．７５　１１４．７８　ｄ，１５．９　Ｈｚ　ｄ，１５．９　Ｈｚ　ｄ。１５．９　Ｈｚ　９　Ｈ　Ｈ　Ｈ　Ｈ　Ｈ　Ｈ　Ｈ　Ｈ　７．５１　ｄ，１５．９　Ｈｚ　Ｉ１４．７３　６．２８　ｄ，１５．９　Ｈｚ　ｄ，１５．９　Ｈｚ　６．１８　１６８．５５　９　１６８．５６　１６８．２７　１６８．２２　２．５．３色谱峰１０和１２的鉴定将分离得到的化合物　最终，笔者通过运用中药化学相关技术与方法，将　二者分离开来，并运用波谱学方法，确定二者化合　物的结构为咖啡酰基奎宁酸类化合物。同时经高效　１和２取适量，加甲醇溶解，照２．１项下色谱条件，　分别注入高效液相色谱仪，在色谱峰１０和１２保留　时间处，分别出现相同色谱峰，且二者紫外吸收图　液相色谱法验证，指纹图谱中色谱峰１０为３，５一二　咖啡酰基奎宁酸，色谱峰１２为４，５一二咖啡酰基奎　宁酸。牛蒡子在炮制过程中，由于受温度影响，３，　５一二咖啡酰基奎宁酸可以转化成立体结构更加稳定　的４，５．二咖啡酰基奎宁酸。　与图６相同，故确定色谱峰１０为３，５一二咖啡酰基　奎宁酸，色谱峰１２为４，５．二咖啡酰基奎宁酸，二　者为牛蒡子炮制后在２９６　ｎｍ波长下主要变化成分。　３讨论　咖啡酰基奎宁酸是一类由奎宁酸与数目不等的　咖啡酸通过酯化反应缩合而成的酚酸类天然成分，　广泛存在于植物界如金银花、旋覆花、苍耳等中药　通过建立牛蒡子生品与制品的指纹图谱，揭示　了生品与制品化学成分变化规律，牛蒡子经炮制后，　部分小色谱峰消失，同时增加部分小色谱峰，但是　其含量很低。但在波长为２９６　ｎｍ下，笔者发现了两　个非木脂素类成分，其含量变化显著，二者的紫外　及茶叶、山楂等果树中。而这类植物往往与牛蒡子　一样具有疏散风热、清热解毒的作用，其可能与植　（下转第８１１页）　．物中所含有的咖啡酰基奎宁酸或绿原酸等酚酸类成　７９５・　吸收光谱相同，且二者明显存在此消彼长的趋势。　２０１５年８月　第１７卷第８期　中国现代中药Ｍｏｄｅｍ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ａｕｇ．２０１５　Ｖｏ１．１７　Ｎｏ．８　京：中国医药科技出版社，２００１：２５３．　［２］　广西壮族自治区卫生厅．广西中药材标准［ｓ］南宁：广　西科学技术出版社。１９９０：３１—３２．　高丽槐素的含量［Ｊ］．药物分析杂志，２０１０，３０（９）：　１７３５．１７３６．　［１３］　王茂媛，赖富丽，王建荣．牛大力茎的化学成分研究［Ｊ］．　天然产物研究与开发，２０１３，２５（１）：５３—５５，９１．　Ｐｒａｓａｎｎａ　ＴＢ，Ｖａｉｒａｍ　ａｎ　ｉＭ。Ｋａｓｂｅｋａｒ　ＤＰ．Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｐｉｓａｔｉｎ　［１４］　ｏｎ　ｄｉｃｔｙｏｓｔｅｌｉｕｍ　ｄｉｓｃｏｉｄｅｕｍ：ｉｔｓ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｔｏ　ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｔｏ　ｎｙｓｔａｔｉｎ　ａｎｄ　ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ　ｔｏ　ｏｔｈｅｒ　ｉｓｏｆｌａｖｏ　ｎｏｉｄ　［３］　全国中草药汇编编写组．全国中草药汇编：上册［Ｍ］．第　３版．北京：人民卫生出版社，１９８６：２００．　［４］　石焱，弓小雪，那婕．牛大力多糖对免疫抑制小鼠的免疫　调节作用［Ｊ］．临床军医杂志，２００８，３６（４）：５３０・５３２．　［５］　郑元升．牛大力多糖的提取及其药理活性研究［Ｄ］．广　州：暨南大学．２００９．　ｐｈｙｔｏａｌｅｘｉｎｓ［Ｊ］．Ａｒｃｈ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，１９９８，１７０（５）：３０９．　Ａｒａｔａｎ　ｅｅｈｅｍ　ｕｇｅ　Ｙ，Ｈｉｂａｓａｍｉ　Ｈ，ＫａｔｓｕｚａｋｉＨ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｄｕｃｔ　［１５］　［６］　刘丹丹，唐立海，王艳，等．牛大力祛痰、镇咳和平喘作用　的实验研究［Ｊ］．广州中医药大学学报，２００９，２６　（３）：２６６．　ｉｏｎ　ｏｆ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｂｙ　ｍａａｃｋｉａｉｎ　ａｎｄ　ｔｒｉｆｏｌｉｒｈｉｚ　ｉｎ（ｍａａｅｋｉａｉｎ　ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ）ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｓａｎｚｕｋｏｎ（Ｓｏｐｈｏｒａ　ｓｕｂｐｒｏｓｔｒａｔｅ　Ｃｈｅｎ　ｅｔＴ．Ｃｈ　ｅｎ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｐｒｏｍ　ｙｅｌｏｔｉｃ　ｌｅｕｋｅｍｉａ　ＨＬ－６０　［７］Ｔｏｍａｓ　Ｈ，Ｖｅｒｏｎｉｃａ　Ｃ，Ｎｅｕｍ　ａｎ　Ｎ，ｅｔ　．Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ＨＩＶ－－ｓｐｅｃｉｉｃ　ＣＴＬ　ｂｙ　ｍｕｌｆｔｉ－・ｅｐｉｔｏｐｅ　ｕｓｉｎｇ　ｇｅｎｅ　ｇｕｎ　ｉｎ　ａ　ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｏｎｃｏｌ　Ｒｅｐ，２００４，１２（６）：１１８３．　ｌｉｐ　Ｃ．Ｅｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｉｓｏｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ　ｃｉｃｅｒ　ｏｎ　［１６］　Ｍｏｎｉｑｕｅ　ＳＪ，Ｐｈｉｃｏｍｂｉｎｅｄ　ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ　ｒｅｇｉｍｅ［Ｊ］．Ｖａｃｃｉｎｅ，１９９９，１７：　５８９．５９６．　ｌａｒｖａｅ　ｏｆ　Ｈｅｌｉｏｃｏｖｅｒｐａ　ａｒｍｉｇ　ｅｒａ［Ｊ］．Ｊ　Ｃ　ｈｅｍ　Ｅｃｏｌ，２００１，　２７（５）：９６５．　［８］　周添浓，刘丹丹，唐立海，等．牛大力对四氯化碳及酒精　所致小鼠急性肝损伤的保护作用［Ｊ］．时珍国医国药，　２００９，２０（１０）：２５８５．２５８７．　［１７］　徐晓铭，赖忐辉，管艳艳，等．ＩＣＰ－ＡＥＳ法测定牛大力中　的微量元素含量［Ｊ］．现代中药研究与实践，２０１０，２４　（４）：６２　．　［９］　陈晓白，王晓平，赵仕花．彗星实验评价牛大力对射线致　小鼠ＤＮＡ损伤的防护［Ｊ］．时珍国’医国药，２０１３，２４　（１）：７６－７８．　［１８］　李移，陈杰，李尚德．中药牛大力微量元素含量的测定　［Ｊ］．广东微量元素科学，２００８，１５（２）：５６．　［１９］　高向阳，宋莲军．现代食品分析实验［Ｍ］．北京：科学出　版社．２０１３．　［１０］王呈文，陈光英，宋小平，等．牛大力的化学成分研究　［Ｊ］．中草药，２０１４，４５（１１）：１５１５—１５２０．　［１１］李冬萍．中药材牛大力离体培养与繁育的研究［Ｄ］．南　宁：广西大学，２０１３．　［２０］　王春华，王英，王国才，等．牛大力的化学成分研究［Ｊ］．　中草药，２００８，３９（７）：９７２－９７５．　［２１］　李锐，陈国彪．ＨＰＬＣ法测定牛大力中高丽槐素的含量　［１２］王春华，王勇，王英，等．ＲＰ—ＨＰＬＣ法测定牛大力药材中　［Ｊ］．中国药事，２０１１，２５（２）：１２４—１２５．　（收稿日期２０１４—１２－０２）　（上接第７９５页）　分有关，现代药理研究发现二咖啡酰基奎宁酸具有　很好的抗氧化、抗炎、抗病毒、抗纤维化、抑制平　滑肌收缩、降血脂等诸多作用　。笔者通过实验发　现牛蒡子中含有一些二咖啡酰基奎宁酸类成分，其　［Ｊ］．中国现代中药，２００８，１０（３）：３５－３６．　［３］　常禹，刘淼，陈宏伟，等．道地药材牛蒡子适宜产区划分　［Ｊ］．辽宁中医药大学学报，２００９，１１（１１）：９—１２．　［４］　王潞，赵烽，刘珂．牛蒡子苷及牛蒡子苷元的药理作用研　可能为牛蒡子疏散风热、解毒利咽的有效成分。通　过本研究所得结论，可以为牛蒡子的质量标准以及　炮制规范研究提供理论依据，为牛蒡子更好地应用　于临床及新药开发奠定基础。　参考文献　国家药典委员会．中华人民共和国药典：一部［ｓ］．北　京：中国医药科技出版社，２０１０：６６－６７．　［２］　袁媛，窦德强，康延国．牛蒡子药材道地沿革和生境研究　究进展［Ｊ］．中草药，２００８，３９（３）：４６７－４７０．　［５］　米靖宇，汪志超，宋纯清．高效液相色谱法测定不同采购　地牛蒡子中牛蒡子苷和苷元的含量［Ｊ］．时珍国医国药，　２００４，１５（１１）：９４１－９４２．　［６］　鞠玫君，窦德强，康廷国．牛蒡予提取物中牛蒡苷和牛蒡苷　元的含量测定研究［Ｊ］．中国现代中药，２００８，１０（２）：１４－１６．　［７］　滕荣伟，周志宏，王德祖，等．白花刺参中的咖啡酰基奎　宁酸成分［Ｊ］．波谱学杂志，２００２，１９（２）：１６７—１７４．　［８］　李祖晟．二咖啡酰奎宁酸药理实验研究进展［Ｊ］．医学综　述，２００４，１０（４）：２４９－２５１．　（收稿日期２０１５旬ｌ－３０）