腺病毒介导的秦川牛固醇调节元件结合蛋白2基因(SREBP2)过表达载体的构建与鉴定

委　鼎　囊●生■穗　簟一　／　研究资源　Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ　…Ｏｎｌｉｎｅ　ｓｙｓｔｅｍ：ｈｔｐｔ赫：／ｕｗｒｗａｗｌ　．ｊＢａ　ｂｉｏｔｅｃｈ　．ｏｒｇ　ｙ　农１ｏｆ　Ａ　ｇｒｉｃｕｌ晶　……　盟　腺病毒介导的秦川牛固醇调节元件结合蛋白２基因（ＳＲＥＢＰ２）过表达　载体的构建与鉴定　付常振　刘扬　昝林森　”王虹　成功　王嘉力　１西北农林科技大学动物科技学院杨凌７１２１００；２国家肉牛改良中心，杨凌７１２１００　同等贡献作者　通讯作者，ｚａｎｌｉｎｓｅｎ＠１６３．ｃｏｍ　摘　要　固醇调节元件结合蛋白２（ｓｔｅｒｏｌ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　ｅｌｅｍｅｎｔ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ　２，ＳＲＥＢＰ２）属于碱性螺旋一环一　螺旋亮氨酸拉链转录因子家族，在胆固醇的代谢过程中具有重要的调控作用。克隆秦川Ｉ牛（Ｂｏｓ　ｔａｕｒｕｓ）的　ＳＲＥＢＰ２基因并构建相应腺病毒过表达载体，包装扩繁获得高滴度腺病毒，对于在细胞水平上研究　ＳＲＥＢＰ２基因的功能和作用机制具有重要作用。本研究以秦川牛脂肪组织为实验材料，提取总ＲＮＡ并反　转录为ｃＤＮＡ，依据ＧｅｎＢａｎｋ收录的牛的ＳＲＥＢＰ２基因（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　ＮＯ．ＮＭ　Ｏ０１２０５６００）ｍＲＮＡ序列设计　引物，克隆出ＳＲＥＢＰ２基因编码区（ｃｏｄｉｎｇ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ，ＣＤＳ）全长。将ＳＲＥＢＰ２基因与穿梭载体连接构建　ｐＡｄＴｒａｃｋ—ＣＭＶ－ＳＲＥＢＰ２表达载体，用Ｐｉｎｅ　１分别酶切线性化ｐＡｄＴｒａｃｋ．ＣＭＶ－ＳＲＥＢＰ２和空白对照　ｐＡｄＴｒａｃｋ—ＣＭＶ载体并转化含有骨架载体ｐＡｄＥａｓｙ一１的大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ）ＢＪ５１８３感受态进行同源　重组，得到腺病毒重组载体ｐＡｄ—ＳＲＥＢＰ２和ｐＡｄ—ＣＭＶ，分别用Ｐａｃ　Ｉ酶切后胶回收ＤＮＡ大片段，并将回　收产物转染２９３Ａ细胞包装得到腺病毒Ａｄ—ＳＲＥＢＰ２和Ａｄ．ＣＭＶ，增殖并提高病毒滴度，得到高滴度病毒　后，用绿色荧光蛋白（ｇｒｅｅｎ　ｌｆｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎ，ＧＦＰ）标记法测定显示Ａｄ—ＳＲＥＢＰ２和Ａｄ—ＣＭＶ的病毒滴度　分别为７×１Ｏ　和１．３ｘ１０　ＧＦＵ／ｍＬ。将Ａｄ—ＳＲＥＢＰ２和Ａｄ．ＣＭＶ腺病毒侵染秦川Ｉ牛前体脂肪细胞检测病毒　的有效性，实时定量ＰＣＲ检测结果显示，侵染４８　ｈ时．ＳＲＥ８Ｐ２基因的表达量提高了１０２－３倍。本研究成功　克隆了秦川Ｉ牛的ＳＲＥＢＰ２基因，构建了病毒重组体，包装增殖获得了高滴度病毒，为在细胞水平上基因功　能的研究提供了基础资料。　关键词秦川Ｉ牛，固醇调节元件结合蛋白２基因（ＳＲＥＢＰ２），胆固醇，腺病毒　Ｃｏｎｓｔ一　ｒｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｌｄｅｎｔ‘　‘　一‘　ｉｆ‘一　ｉｃａｔｉｏｎ　ｏｔ　Ｒｅｃｏｍｂｉ。ｔｏｒｔ一　。　ｎａｎｔ　Ａｄｅｎｏｖｉ‘　‘　ｒｕｓ　Ｖｅｃｔｏｒ　Ｓｐｅ—一一　一　　ｃｉｉｆｃ　ｔｏ　Ｑｉｎｃｈｕａｎ　Ｃａｔｔｌｅ（Ｂｏｓ　ｔａｕｒｕｓ）Ｄｅｒｉｖｅｄ　Ｓｔｅｒｏｌ　Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　Ｅｌｅｍｅｎｔ　Ｂｉｎｄｉｎｇ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　２　Ｇｅｎｅ（ＳＲＥＢＰ２）　ＦＵ　Ｃｈａｎｇ—Ｚｈｅｎ　ＬＩＵ　Ｙａｎｇ　ＺＡＮ　Ｌｉｎ－Ｓｅｎ　，　”ＷＡＮＧ　Ｈｏｎｇ　ＣＨＥＮＧ　Ｇｏｎｇ　ＷＡＮＧ　Ｊｉａ—Ｌｉ　ｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ａｎｉｍａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　ａｎｄ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｇｌｉｎｇ　７１２１００，Ｃｈｉｎａ；２　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｂｅｅｆ　Ｃａｔｔｌｅ　Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｏｆＮｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ａｇｒｉｃｕｌｕｒａｌｔ　ａｎｄ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｇｌｉｎｇ　７１２１００，Ｃｈｉｎａ　Ｔｈｅ　ａｕｔｈｏｒｓ　ｗｈｏ　ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅ　ｅｑｕａｌｌｙ　十　Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ａｕｔｈｏｒ，ｚａｎｌｉｎｓｅｎ＠１６３．ｃｏｍ　基金项目：“十二五”国家高技术研究发展计划（８６３）（Ｎｏ．２０１３ＡＡ１０２５０５，Ｎｏ．２０１１ＡＡ１００３０７—０２）、国家自然科学基金项目　（Ｎｏ．３１２７２４１１）、“十二五”国家转基因育种重大专项（Ｎｏ．２０１３ＺＸ０８００７—００２）￣［１国家现代农业产业技术体系建设专项（Ｎｏ　ＣＡＲＳ・３８）　收稿日期：２０１３—０４—０３　接受日期：２０１３．０５—０３　。　Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｓｔｅｒｏｌ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　ｅｌｅｍｅｎｔ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ　２（ＳＥＲＢＰ２１　ｉｓ　ａ　ｂａｓｉｃ—ｈｅｌｉｘ—ｌｏｏｐ—ｈｅｌｉｘ—ｌｕｅｃｉｎｅ　ｚｉｐｐｅｒ　ｆａｃｔｏｒ　ｗｈｉｃｈ　ｒｅｇｕｌａｔｅｓ　ｔｈｅ　ｍｅｔａｂｏｌｉｚａｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｏｆ　ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏ１．Ｗｅ　ｃｌｏｎｅｄ　ｔｈｅ　ＳＲＥＢＰ２　ｇｅｎｅ　ｆｒｏｍ　Ｑｉｎｃｈｕａｎ　ｃａｔｔｌｅ（Ｂｏｓ　ｔａｕｒｕｓ）ａｎｄ　ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ　ｔｈｅ　ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｄｅｎｏｖｉｒａｌ　ｖｅｃｔｏｒ，ａｎｄ　ｐａｃｋｅｄ　ａｎｄ　ａｍｐｌｉｉｆｅｄ　ｔｈｅ　ｖｉｕｓｒ　ｆｏｒ　ａ　ｈｉｇｈ　ｔｉｔｅｒ，ａｓ　ａ　ａｎｔｅｃｅｄｅｎｔ　ｗｏｒｋ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｃｅｌｌｕｌａｒ　ｌｅｖｅｌ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ＳＥＲＢＰ２　ｇｅｎｅ．Ｔｏｔａｌ　ＲＮＡ　ｗａｓ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ａｄｉｐｏｓｅ　ｔｉｓｓｕｅ　ｏｆ　Ｑｉｎｃｈｕａｎ　ｃａｔｔｌｅ　ａｎｄ　ｔｈｅｎ　ｒｅｖｅｒｓｅｌｙ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｅｄ　ｔｏ　ｃＤＮＡ．Ａ　ｐａｉｒ　ｏｆ　ｅｘｃｌｕｓｉｖｅ　ｐｒｉｍｅｒｓ　ｗｅｒｅ　ｄｅｓｉｇｎｅｄ　ａｃｃｏｒｄｉｎｇ　ｔｏ　ｔｈｅ　ＧｅｎＢａｎｋ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＳＲＥＢＰ２　ｇｅｎｅ（Ａｃ—　ｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．ＮＭ＿００１２０５６００）ｔｏ　ａｍｐｌｉｆｙ　ｔｈｅ　ｃｏｍｐｌｅｔｅ　ｃｏｄｉｎｇ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ（ＣＤＳ）ａｒｅａ　ｏｆ　ＳＲＥＢＰ２　ｇｅｎｅ　ｂｙ　ｐｏｌｙ—　ｍｅｒａｓｅ　ｃｈａｉｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ（ＰＣＲ）．Ｔｈｅ　ｒｆａｇｍｅｎｔｓ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　ＣＤＳ　ａｒｅａ　ｏｆ　ＳＲＥＢＰ２　ｇｅｎｅ　ｗｅｒｅ　ｉｎｓｅｒｔｅｄ　ｉｎｔｏ　ｔｈｅ　ｓｈｕｔ－　ｔｉｅ　ｖｅｃｔｏｒ　ｔｏ　ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ　ｔｈｅ　ｐＡｄＴｒａｃｋ—ＣＭＶ－ＳＲＥＢＰ２　ｐｌａｓｍｉｄ．Ｔｈｅ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｐｌａｓｍｉｄ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｂｌａｎｋ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｐＡｄＴｒａｃｋ—ＣＭＶ　ｗｅｒｅ　ｌｉｎｅａｒｉｚｅｄ　ｂｙ　ｄｉｇｅｓｔｉｎｇ　ｗｉｔｈ　ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ　ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅ　Ｐｍｅ　Ｉ　ａｎｄ　ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔｌｙ　ｔｒａｎｓ—　ｆｏｒｍｅｄ　ｉｎｔｏ　Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　ＢＪ５　１　８３　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　ｐＡｄＥａｓｙ－・１　ｔｏ　ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ　ｒｅｃｏｍｂｉｎｅ　ａｎｄ　ｏｂｔａｉｎ　ｔｈｅ　ｒｅｃｏｍｂｉ・－　ｎａｎｔ　ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ　ｐｌａｓｍｉｄ　ｐＡｄ—ＳＲＥＢＰ２　ａｎｄ　ｐＡｄ—ＣＭＶ．Ａｎｄ　ｔｈｅｎ，ｔｈｅ　ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ａｄｅｎｏｖｉｕｓｒ　ｐｌａｓ—　ｍｉｄ　ｐＡｄ・－ＳＲＥＢＰ２　ｗａｓ　ｄｉｇｅｓｔｅｄ　ｗｉｔｈ　Ｐａｃ　Ｉ　ａｎｄ　ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ　ｉｎｔｏ　２９３Ａ　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅ　ｔｏ　ｐａｃｋａｇｅ　ａｎｄ　ａｍｐｌｉｆｙ　ｔｈｅ　ｒｅ・・　ｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ａｄｅｎｏｖｉｕｓ　Ａｄ－ｒ－ＳＲＥＢＰ２　ａｎｄ　Ａｄ・－ＣＭＶ，ａｎｄ　ｔｏ　ｃｏｌｌｅｃｔ　ｖｉｒｕｓ　ｏｆ　ｈｉｇｈ　ｔｉｔｅｒ．Ｔｈｅ　ｖｉｒａｌ　ｔｉｔｅｒ　ｏｆ　Ａｄ・・　ＳＲＥＢＰ２　ａｎｄ　Ａｄ—ＣＭＶ　ｗａｓ　７×１０　ａｎｄ　１．３×１０　ＧＦＵ／ｍＬ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｍｅａｓｕｒｅｄ　ｂｙ　ｇｒｅｅｎ　ｌｆｕｏｒｅｓｃｅｎｔ　ｐｒｏｔｅｉｎ　（ＧＦＰ）ｌａｂｅｌｌｅｄ　ｍｅｔｈｏｄ．Ｑｉｎｃｈｕａｎ　ｃａｔｔｌｅ　ｄｅｒｉｖｅｄ　ｐｒｅａｄｉｐｏｃｙｔｅ　ｗａｓ　ｉｎｆｅｃｔｅｄ　ｂｙ　Ａｄ—ＳＲＥＢＰ２　ａｎｄ　Ａｄ－ＣＭＶ　ｔｏ　ｖｅｒｉｙ　ｆｔｈｅ　ａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｖｉｒｕｅｓ．Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＳＲＥＢＰ２　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｂｙ　１　０２．３　ｔｉｍｅｓ　ａｆｔｅｒ　ｉｎｆｅｃｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ　ｆｏｒ　４８　ｈ，ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ　ＰＣＲ．Ｔｈｅ　ｃｌｏｎｉｎｇ　ｏｆ　ＳＥＲＢＰ２　ｇｅｎｅ　ｏｆ　Ｑｉｎｃｈｕａｎ　ｃａｔｔｌｅ　ｏｂｔａｉｎｉｎｇ　ｏｆ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ａｄｅｎｏｖｉｕ　ｒａｎｄ　ｖｉｕｓｒ　ｏｆ　ｈｉｇｈ　ｔｉｔｅｒ　ａｒｅ　ｓｅｔ　ａｓ　ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｓｔｕｄｉｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｏｎ　ｃｅｌｌｕｌａｒ　ｌｅｖｅ１．　Ｋｅｙｗｏｒｄｓ　Ｑｉｎｃｈｕａｎ　ｃａｔｔｌｅ，Ｓｔｅｒｏｌ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　ｅｌｅｍｅｎｔ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ　２　ｇｅｎｅ（ＳＲＥＢＰ２），Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ，Ａｄｅｎｏ—　ｖｉｕｓ　ｒＨａｓｅｇａｗａ　ｅｔ　ａ１．，　固醇调节元件结合蛋白（ｓｔｅｒｏｌ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　酸和甘油三酯的催化能力较弱（ｅｌｅｍｅｎｔ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ．ＳＲＥＢＰｓ）属于碱性螺旋．　环．螺旋亮氨酸拉链转录因子家族，研究发现，　２０１２；Ｈｏｒｔｏｎ　ｅｔ　ａ１．，２００９；Ｈｏｒｔｏｎ　ｅｔ　ａ１．，１９９８；Ｐａｉ　ｅｔ　ａ１．，１９９８；Ｓｈｉｍａｎｏ　ｅｔ　ａ１．，１９９６；Ｓｈｉｍａｎｏ　ｅｔ　ａ１．，１９９７；　ｍａｎｏ　ｅｔ　ａ１．，１９９７；Ｙａｓｈｉｒｏ　ｅｔ　ａ１．，２０１２）。研究表　ＳＲＥＢＰｓ家族能够通过与下游基因启动子中的ＳＲＥ　Ｓｈｉ（５’一ＴＣＡＣＮＣＣＡＣ．３’）序列结合（Ｈｕａ　ｅｔ　ａ１．，１９９３；　明ＳＲＥＢＰ２基因被激活后能合成更多的胆固醇来　Ｓｈｉｍａｎｏ，２００１），直接激活３０多个基因的转录，调　代偿ＳＲＥＢＰ１的缺乏；而敲除ＳＲＥＢＰ２基因的小鼠　控胆固醇、脂肪酸、甘油三酯和磷脂的合成与吸收，　则在８　ｄ内全部死亡，表明ＳＲＥＢＰ１基因不能代偿　Ｓｈｉｍａｎｏ　ｅｔ　ａ１．，１９９７）。与其他　以维持动物细胞脂质的稳态（Ｂｒｏｗｎ　ａｎｄ　Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ，　ＳＲＥＢＰ２基因的缺乏（１　９９７；Ｅｄｗａｒｄｓ　ｅｔ　ａ１．，２０００；Ｈｏｒｔｏｎ　ａｎｄ　Ｓｈｉｍｏｍｕｒａ，　１９９９；Ｊｅｏｎ　ａｎｄ　Ｏｓｂｏｒｎｅ，２０１２；Ｒａｙｃｈａｕｄｈｕｒｉ　ｅｔ　ａ１．，　螺旋一环一螺旋亮氨酸拉链蛋白不同，ＳＲＥＢＰ２以无　活性的１ＮＳＩＧ／ＳＣＡＰ　ＳＲＥＢＰ２蛋白前体形式结合在　２０１２；Ｓａｋａｋｕｒａ　ｅｔ　ａ１．．２００１）。ＳＲＥＢＰｓ基因家族在　内质网上，胆固醇耗尽时能够促进１ＮＳＩＧ和ＳＣＡＰ　脊椎动物中表达ＳＲＥＢＰ１和ＳＲＥＢＰ２两个基因。　释放，调控ＳＲＥＢＰ２转运到高尔基体上解元，形成　ＳＲＥＢＰ１基因主要以ＳＲＥＢＰ—ｌｃ的形式存在，其转录　核型的ｎＳＲＥＢＰ２，进入细胞核促进胆固醇合成相　活性结构域较短，属于较弱的转录因子，优先特异　关基因的表达（Ｂｒｏｗｎ　ａｎｄ　Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ，１９９７；　激活脂肪酸和甘油三酯的合成，ＳＲＥＢＰ２则拥有一　Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ　ｅｔ　ａ１．，２００２；Ｈｏｒｔｏｎ　ｅｔ　ａ１．，２００２）。而ＲＮＡｉ　个长的转录活性序列，能够通过激活低密度脂蛋白　抑制ＳＲＥＢＰ２基因表达后能够很明显的改善胆固　受体（１ｏｗ　ｄｅｎｓｉｙ　ｌｔｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＬＤＬＲ）、乙酰　醇的积累（Ｌｉａｏ　ｅｔ　ａ１．，２０１２），表明ＳＲＥＢＰ２基因与胆　　辅酶Ａ合成酶（ａｃｅｔｏａｃｅｔｙｌ—ＣｏＡ　ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ，ＡＡＣＳ）　固醇的合成密切相关。等基因，有效的调控胆固醇的代谢，而对合成脂肪　鉴于ＳＲＥＢＰ２基因在胆固醇的代谢过程中有　腺病毒介导的秦川牛固醇调节元件结合蛋白２基［］（ＳＲＥＢＰ２）过表达载体的构建与鉴定　Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ　Ｖｅｃｔｏｒ　Ｓｐｅｃｉｉｆｃ　ｔｏ　Ｑｉｎｃｈｕａｎ　Ｃａｔｔｌｅ　Ｄｅｒｉｖｅｄ　ＳＲＥＢＰ２　Ｇｅｎｅ　一　取总ＲＮＡ并反转录，实时定量ＰＣＲ检测ＳＲＥＢＰ２　Ｈｕｎｔ，２００２）。本研究采用的ｐＡｄＥａｓｙ．１腺病毒载体　基因的表达量（图６），结果显示ＳＲＥＢＰ２基因的表达　系统是由Ｈｅ等（１９９８）￣Ｊ建的，操作简单，重组效率　量相对于空白对照提高了１０２．３倍。说明病毒包装　高，病毒纯度高，对人体相对安全。　成功，并且能有效转录ＳＲＥＢＰ２基因。　本研究中我们将构建的穿梭载体ｐＡｄＴｒａｃｋ—　ＣＭＶ－ＳＲＥＢＰ２以及空白对照载体ｐＡｄＴｒａｃｋ—ＣＭＶ　２讨论　与骨架载体ｐＡｄＥａｓｙ—ｌ的重组实验在Ｅ．ｃｏｌｉ　牛的ＳＲＥＢＰ２基因定位于５号染色体上，　ＢＪ５１８３大肠杆菌中进行，这样大大提高了重组效　Ｌｕｏ　ｅｔ　ａ１．，２００７）。提取　ｍＲＮＡ全长５　１９４　ｎｔ，ＣＤＳ区全长３　４２３　ｂｐ，翻译　率，更容易得到病毒重组体（１　１４０个氨基酸残基，由于基因ＣＤＳ区序列相对较　长且ＧＣ含量接近６５％，这些均不同程度增加了　ＰＣＲ扩增基因全序列的难度。为提高ＰＣＲ扩增效　率，得到基因ＣＤＳ区全序列，首先应当注意在组织　样品采集、总ＲＮＡ提取与反转录过程中防止ＲＮＡ　的降解，再者为得到基因的真实序列，确保实验结　果的可靠性，彻底排除人为等外界因素的干扰，在　ＰＣＲ扩增ＳＲＥＢＰ２基因ＣＤＳ区序列时尽量使用高　保真酶。另外，实验过程中构建的所有携带　ＳＲＥＢＰ２基因的载体均需要测序验证，以确保所得　ＳＲＥＢＰ２基因序列的准确性。为方便在克隆载体、　穿梭载体、重组腺病毒载体等过程中对ＳＲＥＢＰ２基　因的操作，在ＰＣＲ扩增引物中插入酶切位点时，应　综合分析基因序列自带酶切位点和各载体多克隆　位点信息，以方便目的基因与载体的连接。　将外源基因导入真核细胞以实现目的基因的　过表达，是目前研究基因功能的重要方法之一。目　前将外源基因导入真核细胞方法有多种，主要分为　三类：一是通过脂质体介导的化学方法；二是应用　核转仪、电转移等手段的物理方法；三是以携带外　源基因的病毒、农杆菌等为媒介的生物学方法。然　而，化学试剂和物理操作容易对细胞造成损伤，影　响细胞的正常功能，并且有许多细胞系很难实现高　效转染，尤其是大多数培养的原代细胞。因此，本　研究选择了腺病毒载体系统，将目的基因ＳＲＥＢＰ２　插入病毒基因组，利用病毒的侵染性实现目的基因　在真核细胞的过表达，并且能最大限度的保护细胞　不受损伤，使细胞保持良好的生长状态。　腺病毒载体系统与其他病毒载体系统相比具　有诸多优点，如腺病毒靶细胞种类多，可以侵染不　同分裂期、非分裂期细胞及体内组织；容易包装得　到病毒，快速提高病毒滴度，侵染效率高；可以携带　约ｌ０　ｋｂ的大片段外源基因而不与宿主基因组整合　等（Ｈｅ　ｅｔ　ａ１．，１９９８；Ｌｅｅ　ｅｔ　ａ１．，１９９６；Ｖｏｒｂｕｒｇｅｒ　ａｎｄ　腺病毒重组质粒，用Ｐａｃ　Ｉ酶切线性化并回收质粒　大片段，然后转染２９３Ａ细胞包装病毒，第一代病毒　的包装一般需要１０～１５　ｄ，为提高包装成功率，得到　高质量病毒，应去掉质粒中包含的内毒素，防止其　在细胞中积聚，影响病毒的包装。由于第一代病毒　包装时间较长，在这期间更换或添加新鲜培养基更　容易形成病毒。　ＳＲＥＢＰｓ是调控胆固醇、脂肪酸、甘油三酯和磷　脂合成与吸收重要转录因子，在维持动物细胞脂质　的稳态方面起着重要的作用。目前关于　船　基　因家族的研究，首先集中在与胆固醇、脂肪酸代谢　相关的人的疾病方面（Ｂａｕｅｒ　ｅｔ　ａ１．，２０１１：Ｂｈａｔｔ　ｅｔ　ａ１．，２０１１；Ｋｒｙｃｅｒ　ｅｔ　ａ１．，２０１２；Ｌｈｏｔａｋ　ｅｔ　ａ１．，２０１２；　Ｌｉｕ　ｅｔ　ａ１．，２０１０；Ｒｏｂｉｎｅｔ　ｅｔ　ａ１．，２００３）；其次是外源性　的药物、化学试剂等物质对５　ＥＢＰ２基因的表达情　况的影响（张培东等，２００９；窦晓兵等，２０１０；汤世　国等，２０１２；吴婷婷等，２０１２１；再者是通过建立特　定的动物模型来研究ＳＲＥＢＰ２基因的功能ｆ郝军　等，２００９）。本研究通过克隆秦川牛的ＳＲＥＢＰ２基　因，应用ｐＡｄＥａｓｙ．１腺病毒载体系统，构建获得　ｐＡｄ—ＳＲＥＢＰ２和空白对照ｐＡｄ—ＣＭＶ病毒重组体，　包装得到Ａｄ—ＳＲＥＢＰ２和Ａｄ．ＣＭＶ腺病毒，从而实　现通过直接对ＳＲＥＢＰ２基因的操作来研究其对脂　肪酸、胆固醇等的代谢过程中的作用，提供一种新　的思路。　综上，本研究获得了Ａｄ　ＳＲＥＢＰ２和Ａｄ．ＣＭＶ　重组腺病毒并用ＧＦＰ标记法测病毒滴度为７×ｌ０　和１．３ｘ１０　ＧＦＵ／ｍＬ。本研究还将病毒侵染牛的前　体脂肪细胞，实时定量检测结果显示，侵染４８　ｈ时　ＳＲＥＢＰ２基因的表达提高了１０２－３倍，验证了病毒的　有效性，为在细胞水平研究ＳＲＥＢＰ２基因功能提供　了基础资料。　３材料与方法　螂　脚～。…ｇｙ　３．１实验材料　ＰＣＲ产物大小是３　４４６　ｂｐ，将引物送英潍捷基　（上海）贸易有限公司（美国）合成。　穿梭载体ｐＡｄＴｒａｃｋ—ＣＭＶ、含有腺病毒骨架载　菌株、２９３Ａ细胞系ｆ来源于人肾纤维母细胞，组成　３．２总ＲＮＡ的提取与ｃＤＮＡ的合成　体ｐＡｄＥａｓｙ一１的大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ）ＢＪ５１８３　３．利用Ｔｒｉｚｏｌ法提取秦川牛皮下脂肪组织中的　型表达腺病毒Ｅ１Ａ和Ｅ１Ｂ蛋白的细胞系１、牛前体　总ＲＮＡ，并立即反转录ｃＤＮＡ于一８０￣Ｃ保存备用，　脂肪细胞均由西北农林科技大学国家肉牛改良中　反转录体系与详细步骤参考Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ公司　心保存；大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ）ＤＨ５ａ感受态、Ｔ　ＲｅｖｅｒｔＡｉｄＴＭ　Ｆｉｒｓｔ　ＳＶａｎｄ　ｃＤＮＡ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ试剂盒使　ＤＮＡ连接酶购白天根生化科技（ｔＬ京）有限公司（中　用说明。　国１；质粒小量提取试剂盒、无内毒素质粒小量提取　试剂盒、ＤＮＡ胶回收试剂盒均购自ＯＭＥＧＡ公司　（美国）；Ｘｂａ　Ｉ、　ｎ　Ｉ、Ｐａｃ　Ｉ和Ｐｍｅ　Ｉ限制性内切　酶购自ＮＥＢ公司（美国），九一Ｈｉｎｄ　Ｉ　ＤＮＡ　ｍａｒｋｅｒ、　ｌｋｂ　ＤＮＡ　Ｌａｄｄｅｒ购自中科瑞泰（北京）生物科技有　限公司：ＫＯＤ—Ｐｌｕｓ．Ｖｅｒ．２高保真聚合酶购自东洋纺　（上海）生物科技有限公司（日本）；Ｒｅｖｅ￣ＡｉｄＴ　Ｆｉｒｓｔ　Ｓｔｒａｎｄ　ｃＤＮＡ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　Ｋｉｔ、ＴｕｒｂｏＦｅｃｔ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ　Ｒｅｎｇｅｎｔ与ＣｌｏｎｅＪＥＴ　ＰＣＲ　Ｃｌｏｎｉｎｇ　Ｋｉｔ均购自Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ公司（美国）；实时定量ＳＹＢＲ￣　Ｐｒｅｍｉｘ　Ｅｘ　Ｔａｑ　试剂盒购白ＴＡＫＡＲＡ公司（日本）；　Ｔｒｉｚｏｌ、琼脂糖购自美国Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司（美国）；固相　ＲＮａｓｅ去除剂购自北京天恩泽基因科技有限公司　ｆ中国１；胎牛血清、ＤＭＥＭ／Ｆ１２和ＤＭＥＭ（ＨＩＧＨ　ＧＬＵＣＯＳＥ）均购自Ｈｙｃｌｏｎｅ公司（美国）；ＰＣＲ引物　由英潍捷基（上海）贸易有限公司合成（美国）；细胞　培养耗材均购置Ｃｏｍｉｎｇ公司（美国）。　３．２实验样品制备　以国家肉牛改良中心良繁场２４月龄秦川牛　ｆＢｏｓ　ｔａｕｒｕｓ）公牛为实验材料，屠宰后立即取适量皮　下脂肪组织置于无ＲＮａｓｅ和ＤＮａｓｅ的２　ｍＬ冻存管　中，迅速置于液氮中，运回实验室于一８０℃保存备用。　３．３　Ｓ刷　ｌＰ２基因的克隆　３．３．１　ＰＣＲ引物的设计和合成　根据ＧｅｎＢａｎｋ公布的牛的ＳＲＥＢＰ２基因序列　（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．ＮＭ　９０１２０５６００）为模板设计ＰＣＲ引　物，为方便操作，在综合分析基因序列和实验所需载　体多克隆位点信息的情况下，在上游和下游引物中　分别插入　凡Ｉ和Ｘｂａ　Ｉ酶切位点，具体引物信息：　ＳＲＥＢＰ２．Ｆ：　ＣＧＧ　ＧＣＣＡＣＣＡＴＧＧＡＣＧＧＡＡＧＣＧＧＣＧＡＣＣＴ；　ｎ　Ｉ　ＳＲＥＢＰ２．Ｒ：　ＧＣ　三］［△．　△丁ＣＡＧＧＡＧＧＣＧＧＣＧＡＴＧＧＣＧＧＴＧ。　Ｘｂａ　Ｉ　３．３－３　ＳＲＥＢＰ２基因的克隆　用ＫＯＤ—Ｐｌｕｓ．Ｖｅｒ．２高保真性ＰＣＲ反应酶扩增　ＳＲＥＢＰ２基因，ＰＣＲ反应体系为：５０　ｎｇ／￣Ｌ　ｃＤＮＡ模　板Ｉ．２　，１０　ｌａｍｏｌ／Ｌ引物各０．６　，２５　ｍｍｏ￣Ｌ　ＭｇＳＯ　１．２　Ｌ，２　ｍｍｏｌ／Ｌ　ｄＮＴＰ　２　，１０　ｘ　ＰＣＲ　Ｂｕｆｆｅｒ　２　，ＫＯＤ．Ｐｌｕｓ一（１　Ｕ／　）０．４　，用ｄｄＨ２Ｏ　补齐至总反应体系２０　ｕＬ；ＰＣＲ程序为：９５℃预变　性３　ｒａｉｎ；９５℃变性３０　ｓ，６０℃退火３０　ｓ，７２℃延伸　２１０　ｓ，３２个循环反应；７２℃延伸１０　ｍｉｎ。ＰＣＲ产物　经１％的琼脂糖凝胶电泳分析，其迁移率与预期一　致。胶回收符合目的大小的ＤＮＡ片段，回收产物与　ＣｌｏｎｅＪＥＴ　ＰＣＲ　Ｃｌｏｎｉｎｇ　Ｋｉｔ中的ｐＪＥＴ　１．２／ｂｌｕｎｔ　Ｃｌｏｎｉｎｇ　Ｖｅｃｔｏｒ连接，连接产物转化ＤＨ５ａ感受态，然　后在含有氨苄霉素的ＬＢ琼脂平板培养基上过夜培　养，挑取单克隆菌落于含有氨苄霉素的ＬＢ液体培　养基中振荡过夜培养，菌液ＰＣＲ鉴定，将鉴定正确　的扩大培养，取５　ｍＬ菌液提取质粒用Ｋｐｎ　Ｉ／Ｘｂａ　Ｉ　酶切鉴定并测序，得到ＳＲＥＢＰ２基因的克隆载体　ｐＪＥＴ－ＳＲＥＢＰ２。　３．４　ｐＡｄ—ＳＲＥＢＰ２病毒重组体的构建　３．４．１　ｐＡｄＴｒａｃｋ—ＣＭＶ－ＳＲＥＢＰ２载体的构建　用　ｎ　Ｉ／Ｘｂａ　１分别酶切克隆载体ｐＪＥＴ－　ＳＲＥＢＰ２和穿梭载体ｐＡｄＴｒａｃｋ—ＣＭＶ，电泳检测并　胶回收目的ＤＮＡ片段，将二者回收产物用Ｔ　ＤＮＡ　连接酶连接，连接产物转化ＤＨ５ａ感受态，依次在　含有氨苄霉素的ＬＢ琼脂平板培养基和液体培养　基中培养，取５　ｍＬ菌液提取质粒用　ｎ　Ｉ／Ｘｂａ　Ｉ酶　切鉴定并测序，构建得到ｐＡｄＴｒａｃｋ—ＣＭＶ－ＳＲＥＢＰ２　载体。　３．４．２　ｐＡｄ—ＳＲＥＢＰ２和空白对照ｐＡｄ—ＣＭＶ重组腺病　毒载体的构建　用Ｐｍｅ　Ｉ限制酶分别酶切线性化ＳＲＥＢＰ２基　腺病毒介导的秦川牛固醇调节元件结合蛋白２基因（ＳＲＥＢＰ２）过表达载体的构建与鉴定　Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　Ａｄｅｎｏｖｉｕｓ　ｒＶｅｃｔｏｒ　Ｓｐｅｃｉｉｃ　ｔｏ　ｆＱｉｎｃｈｕａｎ　Ｃａｔｔｌｅ　Ｄｅｒｉｖｅｄ　ＳＲＥＢＰ２　Ｇｅｎｅ　表１实时定量ＰＣＲ引物信息　Ｔａｂｌｅ　１　Ｐｒｉｍｅｒｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ　ＰＣＲ　因表达载体ｐＡｄＴｒａｃｋ．ＣＭＶ－ＳＲＥＢＰ２和空穿梭载　体ｐＡｄＴｒａｃｋ—ＣＭＶ，酶切产物分别转化含有腺病毒　骨架载体ｐＡｄＥａｓｙ一１的Ｅ．ｃｏｌｉ　ＢＪ５１８３感受态，涂布　在含有氨苄霉素的ＬＢ琼脂平板培养皿中过夜培　养，挑取单克隆菌落振荡过夜培养，分别取５　ｍＬ　菌液提取质粒，用Ｐａｃ　Ｉ对重组质粒酶切鉴定并测　序验证，得到ｐＡｄ　ＳＲＥＢＰ２和ｐＡｄ—ＣＭＶ腺病毒重　组质粒，然后将重组质粒转化ＤＨ５ａ感受态扩繁、　保菌。　３．４．３腺病毒的包装增殖　用无内毒素质粒小量提取试剂盒分别提取重　组质粒ｐＡｄ—ＣＭＶ和ｐＡｄ—ＳＲＥＢＰ２，各取５　ｇ用Ｐａｃ　Ｉ酶切并胶回收大片段，将回收产物用　ＴｕｒｂｏＦｅｃｔ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ　Ｒｅｎｇｅｎｔ转染融合　度为８０％～９０％的２９３Ａ细胞，详细操作步骤参考转　染试剂使用说明书。转染２４　ｈ后，在荧光显微镜下　观察细胞形态和绿色荧光数量与分布，以后每天观　察１次，跟踪腺病毒的包装与增殖过程；转染６－８　ｄ，一般均会出现局部绿色荧光葡萄串样聚集现象，　说明此时已有病毒形成；转染１０～１２　ｄ，绿色荧光铺　满整个培养容器，大量细胞病变变圆脱壁，出现明　显的空斑，待约有５０％细胞从培养容器底部脱落时　收集全部培养液与细胞至离心管中，即含有第１代　病毒的细胞悬液，将细胞悬液于一８０／３７℃反复冻融　并涡旋振荡２次，３　０００　ｒ／ｍｉｎ离心５　ｍｉｎ，收集上清　液，即为第１代病毒悬液。　用第１代病毒悬液侵染融合度约９０％的２９３Ａ　细胞，２～３　ｄ后，绿色荧光铺满整个培养容器，细胞　逐渐出现病变，开始变圆脱落，待脱落５０％左右，按　前述方收集和裂解细胞，离心收集病毒上清液，即　为第２代病毒悬液。然后重复“侵染一冻融　收集”等　步骤，大量增殖病毒并提高病毒滴度。用ＧＦＰ标记　法测定病毒悬液的病毒滴度，具体步骤参考　Ｌｙｂａｒｇｅｒ等（１９９６）及Ｈｉｔｔ等（２０００）。　３．５病毒有效性的鉴定　解冻复苏牛的前体脂肪细胞并在含１０％胎牛　血清的ＤＭＥＭ／Ｆ１２培养基中培养，侵染前１　ｄ将生　长状况良好的细胞于３５　ｍｍ细胞培养皿中传代培　养，待细胞生长至约９０％融合度时分别加入Ａｄ．　ＳＲＥＢＰ２和Ａｄ—ＣＭＶ病毒，４　ｈ后更换成完全培养　基，４８　ｈ后收集细胞，提取总ＲＮＡ并反转录成　ｃＤＮＡ。　以牛的甘油醛．３一磷酸脱氢酶　（ｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ一　３一ｐｈｏｓｐｈａｔｅ　ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ，　ＧＡＰＤＨ）基因（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　ＮＯ．ＮＭ　００１０３４０３４）作为　内参，实时定量ＰＣＲ检测ＳＲＥＢＰ２基因的相对表达　量，使用２０　反应体系，具体反应条件等参考　ＳＹＢＲ￣Ｐｒｅｍｉｘ　Ｅｘ　Ｔａｑ　使用说明。实时定量ＰＣＲ　引物信息见表１。　参考文献　Ｂａｕｅｒ　Ｓ，Ｗａｎｎｉｎｇｅｒ　Ｊ，Ｓｃｈｍｉｄｈｏｆｅｒ　Ｓ，Ｗｅｉｇｅｒｔ　Ｊ，Ｎｅｕｍｅｉｅｒ　Ｍ，Ｄｏｒｎ　Ｃ，Ｈｅｌｌｅｒｂｒａｎｄ　Ｃ，Ｚｉｍａｒａ　Ｎ，Ｓｃｈａ御ｅｒ　Ａ，　Ａｓｌａｎｉｄｉｓ　Ｃ　ａｎｄ　Ｂｕｅｃｈｌｅｒ　Ｃ，２０　１　１．Ｓｔｅｒｏｌ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　ｅｌｅｍｅｎｔ—ｂｉｎｄｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ　２（ＳＲＥＢＰ２）ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ａｆｔｅｒ　ｅｘｃｅｓｓ　ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ　ｓｔｏｒａｇｅ　ｉｎｄｕｃｅｓ　ｃｈｅｍｅｆｉｎ　ｉｎ　ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃ　ａｄｉｐｏｃｙｔｅｓ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１５２（１）：２６￣３５　Ｂｈａａ　Ｓ　Ｐ＇Ｎｉｇａｍ　Ｐ，ＭｉｓｒａＡ，ＧｕｌｅｒｉａＲ，ＬｕｔｈｒａＫ，ＶａｉｄｙａＭ，　Ｊａｉｎ　Ｓ　Ｋ　ａｎｄ　Ｐａｓｈａ　Ｍ　Ａ．２０１１．ＳＲＥＢＰ一２　１７８４　Ｇ／Ｃ　ｇｅｎｏｔｙｐｅ　ｉｓ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｎｏｎ—ａｌｃｏｈｏｌｉｃ　ｆ－ａｔｔ）ｒ　ｌｉｖｅｒ　ｄｉｓｅａｓｅｉｎｎｏｒｔｈＩｎｄｉａｎｓ．ＤｉｓｅａｓｅＭａｒｋｅｒｓ，３ｌ（６）：３７１－３７７　Ｂｒｏｗｎ　Ｍ　Ｓ　ａｎｄ　Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ　Ｊ　Ｌ．１　９９７．Ｔｈｅ　ＳＲＥＢＰ　ｐａｔｈｗａｙ：　Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ｂｙ　ｐｒｏｔｅｏｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ａ　ｍｅｍｂｒａｎｅ—ｂｏｕｎｄ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｎ　Ｃｅｌｌ，８９（３）：　３３１－３４０　Ｄｏｕ　Ｘ　Ｂ，Ｃｈｅｎ　Ｑ，Ｗａｎｇ　Ｙ　Ｈ，Ｄｏｕ　Ｍ　Ｈ　ａｎｄ　Ｆａｎ　Ｃ　Ｌ，２０１０．　Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｃｕｒｃｕｍ　ｉｎ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＳＲＥＢＰ一２　ｉｎ　ＨｅｐＧ２．Ｇｌ０ｂａｌ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，３（３）：　１８３～１８６（窦晓兵，陈庆，王宇浩，豆敏华，范春雷，２０１０．　姜黄素对ＨｅｐＧ２细胞固醇调控元件结合蛋白．２表达　的影响．环球中医药，３（３）１８３￣１８６）　Ｅｄｗａｒｄｓ　Ｐ　Ａ，Ｔａｂｏｒ　Ｄ，Ｋａｓｔ　Ｈ　Ｒ　ａｎｄ　Ｖｅｎｋａｔｅｓｗａｒａｎ　Ａ，　２０００．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｂｙ　ＳＲＥＢＰ　ａｎｄ　ＳＣＡＥ　Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ　ｅｔ　Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ　Ａｃｔａ，１５２９（１－３）：　Ｌ０３－１１３　Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ　Ｊ　Ｌ，Ｒａｗｓｏｎ　Ｒ　Ｂ　ａｎｄ　Ｂｒｏｗｎ　Ｍ　Ｓ，２００２．Ｍｕｔａｎｔ　ｍａｍｍａｌｉａｎ　ｃｅｌｌｓ　ａｓ　ｔｏｏｌｓ　ｔｏ　ｄｅｌｉｎｅａｔｅ　ｔｈｅ　ｓｔｅｒｏｌ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　ｅｌｅｍｅｎｔ－ｂｉｎｄｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｐａｔｈｗａｙ　ｆｏｒ　ｆｅｅｄｂａｃｋ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌｉＦＩｉｄ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ．Ａｒｃｈｉｖｅｓ　ｏｆ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ，３９７（２）：１３９－１４８　农业生物技术学报　１ｏ０Ｏ　Ｊｏ啪ａ１　ｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔ啪ｌ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏ１ｏｇｙ　Ｈａｏ　Ｊ，ＷａｎｇＣ，ＷｕＨ　Ｊ，Ｚｈａｏ　Ｓ，Ｄｕａｎ　ＪＺ，ＳｈｉＹＨ　ａｎｄＤｕａｎ　Ｈ　Ｊ．２００９．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＳＲＥＢＰ－１　ａｎｄ　ＳＲＥＢＰ一２　ｉｎ　ｋｉｄｎｅｙ　ｏｆ　ｔｙｐｅ　１　ｄｉａｂｅｔｉｃ　ｒａｔｓ．Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，２３（２）：６５－７２　Ｋｒｙｃｅｒ　Ｊ　Ｒ，Ｐｈａｎ　Ｌ　ａｎｄ　Ｂｒｏｗｎ　Ａ　Ｊ，２０１２．Ａ　ｋｅｙ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒ　ｏｆ　ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ　ｈｏｍｏｅｏｓｔａｓｉｓ，ＳＲＥＢＰ一２，ｃａｎ　ｂｅ　ｔａｒｇｅｔｅｄ　ｉｎ　ｐｒｏｓｔａｔｅ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌｓ　ｗｉｔｈ　ｎａｔｕｒａｌ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２５（３）：５６６－５７１（郝军，王晨，吴海江，　赵松，段建召，史永红，段惠军，２００９．ＳＲＥＢＰ－１和　ＳＲＥＢＰ一２在Ｉ型糖尿病大鼠肾脏中的表达．中国病理　Ｊｏｕｒｎａｌ，４４６（２）：１９１－２０１　Ｌｅｅ　Ｊ，Ｌａｋｓ　Ｈ，Ｄｒｉｎｋｗａｔｅｒ　Ｄ　Ｃ，Ｂｌｉｔｚ　Ａ，Ｌａｍ　Ｌ，Ｓｈｉｒａｉｓｈｉ　生理杂志，２５（３）：５６６－５７１）　Ｈａｓｅｇａｗａ　Ｓ，Ｎｏｄａ　Ｋ，Ｍａｅｄａ　Ａ，Ｍａｔｓｕｏｋａ　Ｍ，Ｙａｍａｓａｋｉ　Ｍ　ａｎｄ　Ｆｕｋｕｉ　２０１２．Ａｃｅｔｏａｃｅｔｙｌ—ＣｏＡ　ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ，ａ　Ｃｈａｎｇ　Ｐ，Ｄｒａｋｅ　Ｔ　Ａ　ａｎｄ　Ａｒｄｅｈａｌｉ　Ａ，１　９９６．Ｃａｒｄｉａｃ　ｇｅｎｅ　ｔｒａｎｓｆｅｒ　ｂｙ　ｉｎｔｒａｃｏｒｏｎａｒｙ　ｉｎｆｕｓｉｏｎ　ｏｆ　ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ　ｖｅｃｔｏｒ－ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｒｅｐｏｒｔｅｒ　ｇｅｎｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ　ｍｏｕｓｅ　ｈｅａｒｔ．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｔｈｏｒａｃｉｃ　ａｎｄ　Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ　Ｓｕｒｇｅｒｙ，　ｋｅｔｏｎｅ　ｂｏｄｙ—ｕｔｉｌｉｚｉｎｇ　ｅｎｚｙｍｅ，ｉｓ　ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ　ｂｙ　ＳＲＥＢＰ一　２　ａｎｄ　ａｆｆｅｃｔｓ　ｓｅｒｕｌＴｌ　ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ　ｌｅｖｅｌｓ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ　ａｎｄ　Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，１０７（３）：５５３－５６０　Ｈｅ　Ｔ　Ｃ，Ｚｈｏｕ　Ｓ，Ｄａ　Ｃ　Ｌ，Ｙｕ　Ｊ，Ｋｉｎｚｌｅｒ　Ｋ　Ｗ　ａｎｄ　Ｖｏｇｅｌｓｔｅｉｎ　Ｂ，　１　９９８．　Ａ　ｓｉｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｓｙｓｔｅｍ　ｆｏｒ　ｇｅｎｅｒａｔｉｎｇ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓｅｓ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＵＳＡ，９５（５）：２５０９￣２５　ｌ４　Ｈｉｔｔ　Ｄ　Ｃ，Ｂｏｏｔｈ　Ｊ　Ｌ，Ｄａｎｄａｐａｎｉ　Ｐｅｎｎｉｎｇｔｏｎ　Ｌ　Ｒ，Ｇｉｍｂｌｅ　Ｊ　Ｍ　ａｎｄ　Ｍｅｔｃａｌｆ　Ｊ．２０００．Ａ　ｆｌｏｗ　ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ　ｐｒｏｔｏｃｏｌ　ｆｏｒ　ｔｉｔｅｒｉｎｇ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ａｄｅｎｏｖｉｒａｌ　ｖｅｃｔｏｒｓ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　ｔｈｅ　ｇｒｅｅｎ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ　ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１　４　（３）：１　９７－２０３　Ｈｏｒｔｏｎ　Ｊ　Ｄ．Ｃｏｈｅｎ　Ｊ　Ｃ　ａｎｄ　Ｈｏｂｂｓ　Ｈ　Ｈ．２００９．ＰＣＳＫ９：Ａ　ｃｏｎｖｅｒｔａｓｅ　ｔｈａｔ　ｃｏ０ｒｄｉｎａｔｅｓ　ＬＤＬ　ｃａｔａｂｏｌｉｓｍ．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｌｉｐｉｄ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５０（Ｓｕｐｐｌ　Ｓ）：１７２－Ｓ１７７　Ｈｏｒｔｏｎ　Ｊ　Ｄ．Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ　Ｊ　Ｌ　ａｎｄ　Ｂｒｏｗｎ　Ｍ　Ｓ．２００２．ＳＲＥＢＰｓ：　Ａｃｔｉｖａｔｏｒｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｏｍｐｌｅｔｅ　ｐｒｏｇｒａｍ　ｏｆ　ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ　ａｎｄ　ｆａｔｔｙ　ａｃｉｄ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｌｉｖｅｒ．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ．１０９（９）：１１２５－１１３１　Ｈｏｒｔｏｎ　Ｊ　Ｄ，Ｓｈｉｍｏｍｕｒａ　Ｉ，Ｂｒｏｗｎ　Ｍ　Ｓ，Ｈａｍｍｅｒ　Ｒ　Ｅ，　Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ　Ｊ　Ｌ　ａｎｄ　Ｓｈｉｍａｎｏ　Ｈ．１９９８．Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｉｎ　ｐｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｔｏ　ｆａｔｔｙ　ａｃｉｄ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｉｎ　ｌｉｖｅｒ　ａｎｄ　ａｄｉｐｏｓｅ　ｔｉｓｓｕｅ　ｏｆ　ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ　ｍｉｃｅ　ｏｖｅｒｐｒｏｄｕｃｉｎｇ　ｓｔｅｒｏｌ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　ｅｌｅｍｅｎｔ－ｂｉｎｄｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ－２．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，１０１（１　１）：　２３３　１－２３３９　Ｈｏｒｔｏｎ　Ｊ　Ｄ　ａｎｄ　Ｓｈｉｍｏｍｕｒａ　Ｉ．１　９９９．Ｓｔｅｒｏｌ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　ｅｌｅｍｅｎｔ—　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ａｃｔｉｖａｔｏｒｓ　ｏｆ　ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ　ａｎｄ　ｆａｔｔｙ　ａｃｉｄ　ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ．Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｏｐｉｎｉｏｎ　ｉｎ　Ｌｉｐｉｄｏｌｏｇｙ，ｌ　０（２）：　１４３－１５０　Ｈｕａ　Ｘ，Ｙｏｋｏｙａｍａ　Ｃ，Ｗｕ　Ｊ，Ｂｆｉｇｇｓ　Ｍ　Ｒ，Ｂｒｏｗｎ　Ｍ　Ｓ，　Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ　Ｊ　Ｌ　ａｎｄ　Ｗａｎｇ　Ｘ，１　９９３．ＳＲＥＢＰ・２，ａ　ｓｅｃｏｎｄ　ｂａｓｉｃ・・ｈｅｌｉｘ・－ｌｏｏｐ－－ｈｅｌｉｘ・－ｌｅｕｃｉｎｅ　ｚｉｐｐｅｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｔｈａｔ　ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｂｙ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｔｏ　ａ　ｓｔｅｒｏｌ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　ｅｌｅｍｅｎｔ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　ｏｆｔｈｅ　ＵＳＡ．９０（２４）：１１６０３－１１６０７　Ｊｅｏｎ　Ｔ　Ｉ　ａｎｄ　Ｏｓｂｏｒｎｅ　Ｔ　Ｆ．２０１２．ＳＲＥＢＰｓ：Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ　ｉｎｔｅｇｒａｔｏｒｓ　ｉｎ　ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．Ｔｒｅｎｄｓ　ｉｎ　１１１（１）：２４６－２５２　Ｌｈｏｔａｋ　Ｓ，Ｓｏｏｄ　Ｓ，Ｂｒｉｍｂｌｅ　Ｅ，Ｃａｒｌｉｓｌｅ　Ｒ　Ｅ，Ｃｏｌｇａｎ　Ｓ　Ｍ，　ＭａｚｚｅＲｉ　Ａ，Ｄｉｃｋｈｏｕｔ　Ｊ　Ｇ，Ｉｎｇｒａｍ　Ａ　Ｊ　ａｎｄ　Ａｕｓｔｉｎ　Ｒ　Ｃ，　２０１２．ＥＲ　ｓｔｒｅｓｓ　ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ　ｔｏ　ｒｅｎａｌ　ｐｒｏｘｉｍａｌ　ｔｕｂｕｌｅ　ｉｎｊｕｒｙ　ｂｙ　ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ　ＳＲＥＢＰ－—２－・ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｌｉｐｉｄ　ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｐｏｐｔｏｔｉｃ　ｃｅｌｌ　ｄｅａｔｈ．Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ—Ｒｅｎａｌ　Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，３０３（２）：　Ｆ２６６－Ｆ２７８．　Ｌｉａｏ　Ｊ　Ｌ，Ｚｈａｏ　Ｌ，Ｃｈｅｎ　Ｌｉ　Ｑ，Ｃｈｅｎ　Ｙ　Ｒｕａｎ　Ｘ　Ｚ　ａｎｄ　Ｃｈｅｎ　Ｙ　Ｘ．２０１２．Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ＲＮＡｉ—ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ　ｏｆ　ＳＲＥＢＰ２　ｇｅｎｅ　ｏｎ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｃｙｔｏｋｉｎｅ—ｉｎｄｕｃｅｄ　ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ　ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ　ｉｎ　ＨｅｐＧ２　ｃｅｌｌｓ．Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，２０（７）：５２６－５３　１（廖俊蕾，赵蕾，　陈曜，李青陈，昱杨，阮雄中，陈压西，２０１２．沉默胆固醇　调节原件结合蛋白２基因对炎症因子所致ＨｅｐＧ２细　胞内胆固醇异常积聚的影响．中华肝脏病杂志，２０（７）：　５２６－５３　１）　ＬｉｕＸ，Ｌｉ　ＬｕＸ，ＷａｎｇＬ，ＺｈａｏＱ，Ｙａｎｇｗ，Ｈｕａｎｇ　Ｊ，Ｃａｏ　Ｊ，　Ｌｉ　Ｈ　ａｎｄ　Ｇｕ　Ｄ．２０　１　０．Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ　ａｍｏｎｇ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｖａｒｉａｎｔｓ　ｆｒｏｍ　ＳＲＥＢＰ２　ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ—ｒｅｌａｔｅｄ　ｐａｔｈｗａｙ　ｏｎ　ｒｉｓｋ　ｏｆ　ｃｏｒｏｎａｒｙ　ｈｅａｎ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｈａｎ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ．Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，２０８（２）：４２１－４２６　Ｌｕｏ　Ｊ，Ｄｅｎｇ　Ｚ　Ｌ，Ｌｕｏ　Ｘ，Ｔａｎｇ　Ｎ，Ｓｏｎｇ　Ｗ　Ｘ，Ｃｈｅｎ　Ｊ，Ｓｈａｒｆｆ　ＫＡ，ＬｕｕＨＨ，ＨａｙｄｏｎＲＣ，ＫｉｎｚｌｅｒＫ　ＶｏｇｅｌｓｔｅｉｎＢ　ａｎｄ　Ｈｅ　Ｔ　Ｃ，２００７．Ａ　ｐｒｏｔｏｃｏｌ　ｆｏｒ　ｒａｐｉｄ　ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓｅｓ　ｕｓｉｎｇ　ｔｈｅ　ＡｄＥａｓｙ　ｓｙｓｔｅｍ．　Ｎａｔｕｒｅ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，２（５）：１２３６－１２４７　Ｌｙｂａｒｇｅｒ　Ｌ，Ｄｅｍｐｓｅｙ　Ｄ，Ｆｒａｎｅｋ　Ｋ　Ｊ　ａｎｄ　Ｃｈｅｒｖｅｎａｋ　Ｒ，１　９９６．　Ｒａｐｉｄ　ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｆｌｏｗ　ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｓｔａｂｌｅ　ＧＦＰ—ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ　ｃｅｌｌｓ．Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，２５ｆ３）：２　１　１－２２０　Ｐａｉ　Ｊ　Ｏｕｒｙｅｖ　Ｏ，Ｂｒｏｗｎ　Ｍ　Ｓ　ａｎｄ　Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ　Ｊ　Ｌ．１９９８．　Ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌ　ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ　ａｎｄ　ｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ　ａｆｔｔｙ　ａｃｉｄ　ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｉｎ　ｃｅｌｌｓ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ　ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ　ｎｕｃｌｅａｒ　ｓｔｅｒｏｌ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　ｅｌｅｍｅｎｔ—ｂｉｎｄｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ．　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２７３（４０）：２６１３８－２６１４８　Ｒａｙｃｈａｕｄｈｕｒｉ　Ｓ，Ｙｏｕｎｇ　Ｂ　Ｐ，Ｅｓｐｅｎｓｈａｄｅ　Ｐ　Ｊ　ａｎｄ　Ｌｏｅｗｅｎ　Ｃ　Ｊ，　２０１２．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌｉｐｉｄ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ：Ａ　ｔａｌｅ　ｏｆ　ｔｗｏ　ｙｅａｓｔｓ．Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｏｐｉｎｉｏｎ　ｉｎ　Ｃｅｌｌ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，２４（４）：５０２～５０８　Ｒｏｂｉｎｅｔ　Ｐ＇Ｖｅｄｉｅ　Ｂ，Ｃｈｉｒｏｎｉ　Ｇ，Ｇａｒｉｅｐｙ　Ｊ，Ｓｉｍｏｎ　Ａ，Ｍｏａｔｔｉ　Ｎ　ａｎｄ　Ｐａｕｌ　Ｊ　Ｌ，２００３．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ＳＲＥＢＰ一２　ｇｅｎｅ：Ｒｏｌｅ　ｉｎ　ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．　Ｔａｎｇ　Ｓ　Ｇ，Ｌｉ　Ｌ，Ｙａｎｇ　Ｇ　Ｌｉ　Ｋ，Ｙａｎ　Ｐ　Ｊ，Ｌｉ　Ｌ　Ｈ，Ｄｏｎｇ　Ｊ，Ｗｕ　Ｄ　Ｄ．２０１２．Ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　ＨＭＧＣＲ．ＳＲＥＢＰ一２　ａｎｄ　ＬＤＬｒ　ｍＲＮＡ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｈｉｇｈ—ｆｌａｔ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｉｎｓｕｌｉｎ　ｒｅｓｉｓａｔｎｃｅ　ａｐｏＥ一／一ｍｉｃｅ．Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｄｉａｂｅｔｅｓ，２０ｆ４）：２９２－　Ａｔｈｅｒｏｓｃ１ｅｒｏｓｉｓ．１６８（２）：３８１－３８７　Ｓａｋａｋｕｒａ　Ｓｈｉｍａｎｏ　Ｈ，Ｓｏｎｅ　Ｈ，Ｔａｋａｈａｓｈｉ　Ａ，Ｉｎｏｕｅ　Ｎ，　Ｔｏｙｏｓｈｉｍａ　Ｈ，Ｓｕｚｕｋｉ　Ｓ　ａｎｄ　Ｙａｍａｄａ　Ｎ，２００１．Ｓｔｅｒｏｌ　一丙Ｏ　ａｔｏｒｙ　ｅｌｅｍｅｎｔ—ｂｉｎｄｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｉｎｄｕｃｅ　ａｎ　ｅｎｔｉｒｅ　．舌　ｒｅｇｕｌ２９４（汤世国，李伶，杨刚毅，孙滨，李钶，晏丕军，李龙　辉，董靖，吴丹冬，２０１２．高脂诱导胰岛素抵抗ａｐｏＥ－／一　小鼠ＨＭＧＣＲ、ＳＲＥＢＰ．２和ＬＤＬｒ基因表达的变化．中国　糖尿病杂志，２０（４）：２９２～２９４）　Ｖｏｒｂｕｒｇｅｒ　Ｓ　Ａ　ａｎｄ　Ｈｕｎｔ　Ｋ　Ｋ，２００２．Ａｄｅｎｏｖｉｒａｌ　ｇｅｎｅ　ｔｈｅｒａｐｙ．　ｐａｔｈｗａｙ　ｏｆ　ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，２８６（１）：１７６－　烈．的　蓥　１８３　Ｓｈｉｍａｎｏ　Ｈ．２００１．Ｓｔｅｒｏｌ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　ｅｌｅｍｅｎｔ—ｂｉｎｄｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　醇牛Ａ　固　ｒ。　（ＳＲＥＢＰｓ）：Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ　ｏｆ　ｌｉｐｉｄ　ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ　ｇｅｎｅｓ．Ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ｉｎ　Ｌｉｐｉｄ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，４０（６）：４３９－４５２　调　节　Ｓｈｉｍａｎｏ　Ｈ，Ｈｏｒｔｏｎ　Ｊ　Ｄ，Ｈａｍｍｅｒ　Ｒ　Ｅ，Ｓｈｉｍｏｍｕｒａ　Ｉ，Ｂｒｏｗｎ　Ｍ　Ｓ　ａｎｄ　Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ　Ｊ　Ｌ，１　９９６．Ｏｖｅｒｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　结　ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ　ａｎｄ　ｆａｔｔｙ　ａｃｉｄｓ　ｃａｕｓｅｓ　ｍａｓｓｉｖｅ　ｌｉｖｅｒ　合　ｅｎｌａｒｇｅｍｅｎｔ　ｉｎ　ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ　ｍｉｃｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ　ｔｒｕｎｃａｔｅｄ　蛋∞　ＳＲＥＢＰ—ｌ　ａ．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，９８（７）：　１５７５－ｌ５８４　捆　Ｓｈｉｍａｎｏ　Ｈ，Ｈｏｒｔｏｎ　Ｊ　Ｄ，Ｓｈｉｍｏｍｕｒａ　Ｉ，Ｈａｍｍｅｒ　Ｒ　Ｅ，Ｂｒｏｗｎ　腿ｍ　ｅ芎　Ｍ　Ｓ　ａｎｄ　Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ　Ｊ　Ｌ．１９９７．Ｉｓｏｆｏｒｍ　ｌｃ　ｏｆ　ｓｔｅｒｏｌ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　ｅｌｅｍｅｎｔ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｓ　ｌｅｓｓ　ａｃｔｉｖｅ　ｔｈａｎ　ｉｓｏｆｏｒｍ　ｌ　ａ　ｉｎ　ｌｉｖｅｒｓ　ｏｆ　ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ　ｍｉｃｅ　ａｎｄ　ｉｎ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｃｅｌｌｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，９９（５）：８４６－８５４　Ｓｈｉｍａｎｏ　Ｈ，Ｓｈｉｍｏｍｕｒａ　Ｉ，Ｈａｍｍｅｒ　Ｒ　Ｅ，Ｈｅｒｚ　Ｊ，Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ　Ｊ　Ｌ，Ｂｒｏｗｎ　Ｍ　Ｓ　ａｎｄ　Ｈｏｒｔｏｎ　Ｊ　Ｄ，１　９９７．Ｅｌｅｖａｔｅｄ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ＳＲＥＢＰ一２　ａｎｄ　ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｉｎ　ｌｉｖｅｒｓ　ｏｆ　ｍｉｃｅ　棼　　ｈｏｍｏｚｙｇｏｕｓ　ｆｏｒ　ａ　ｔａｒｇｅｔｅｄ　ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＳＲＥＢＰ・Ｊ　ｇｅｎｅ．Ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ｉｎ　Ｌｉｐｉｄ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，ｌＯＯ（８）：２１１５－２１２４　定　Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ，７（１）：４６－５９　Ｗｕ　Ｔ　Ｌ　Ｈｏｕ　Ａ　Ｊ，Ｈｏｎｇ　Ｚ　Ｙ　ａｎｄ　Ｚｈｕ　Ｙ　Ｚ，２０１２．Ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　Ｚａｎｔｈｏｘｙｌｕｍ　ｂｕｎｇｅａｎｕｍ　ｒｅｇｕｌａｔｅ　ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ　ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｓｔｅｒｏｌｓ　ａｎｄ　ＬＰＳ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ａｎｄ　ｉｎ　ｖｉｖｏ．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２　１（６）：　５８２－５９０（吴婷婷，侯爱君，洪臻怡，朱依谆，２０１２．花椒　提取物调节固醇和脂多糖诱导的胆固醇积聚ｆ英文）．　中国药学（英文版），２１（６）：５８２－５９０）　Ｙａｓｈｉｒｏ　Ｔ’Ｎａｎｍｏｋｕ　Ｍ，Ｓｈｉｍｉｚｕ　Ｍ，Ｉｎｏｕｅ　Ｊ　ａｎｄ　Ｓａｔｏ　Ｒ，　２０　１　２．Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ　ｉｎｃｒｅａｓｅｓ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎｄ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｌｏｗ　ｄｅｎｓｉｔｙ　ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｉｎ　ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃ　ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｔｅｒｏｌ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　ｅｌｅｍｅｎｔ—ｂｉｎｄｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，２２０（２）：３６９－　３７４　Ｚｈａｎｇ　Ｐ　Ｄ，Ｌｉｕ　Ｙ　ＧＵＯ　Ｙ　ａｎｄ　Ｍｉａｏ　Ｆ＇２００９．Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｒｏｓｕｖａｓｔａｔ　ｉｎ　ｏｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ　ｏｆ　ＡＢＣＡ　１　ａｎｄ　ＳＲＥＢＰ一２　ｍＲＮＡ　ｉｎ　ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ　ａｎｄ　ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ　ｏｆ　ｃｏｒｏｎａｒｙ　ｈｅａｒｔ　ｄｉｓｅａｓｅ．Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｇｅｒｏｎｔｏｌｏｇｙ，２９（１０）：　１２３４－１２３６（张培东，刘映峰，郭阳，缪绯，２００９．瑞舒伐　他汀对冠心病患者单核巨噬细胞ＡＢＣＡ１及ＳＲＥＢＰ一２　表达的影响．中国老年学杂志，２９（１０）：１２３４～１２３６１　肭泐鉴