实验十一色素分离层析法

实验十一 色素的分别(层析法)

一、目的要求

1．进一步认识绿叶中色素的组成及各色素的颜色和性质。 2．学会用层析法分别色素的操作技术，认识层析解析的有关知识。

二、实验原理

层析分别技术是一种物理分别方法，按分别原理的不同样，层析法可分为吸附层析、分配层析、离子交换层析、亲和层析等数种方法。按操作方式的不同样，又

可分为柱型、薄层和纸型。在本实验中采用柱吸附层析法分别叶色素，由于叶色素中各色素被吸附剂吸附的程度不同样以及它们被溶剂溶解的能力不同样，所以在层析柱中向下搬动的距离不同样而得以分别。

用合适的溶剂如石油醚、甲醇、丙酮、苯等，可将绿叶中的色素（叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素、叶黄素）提取出来，提取液经过吸附柱将其中的各种色素分开，吸附柱常用蔗糖、碳酸钙、氧化铝等吸附剂制成。

三、实验器材

抽滤瓶、研钵、带托玻璃棒、层析柱(20㎝×1㎝)、分液漏斗、烧杯，具塞试管。 ℃烘干的菠菜叶、脱脂棉

四、实验试剂 石油醚 甲醇 苯

无水硫酸钠 细粉状蔗糖 无水碳酸钙 氧化铝 海砂

五、操作步骤

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实验十一色素分离层析法

1．取烘干的菠菜叶1g置于研钵中，加少许海砂研碎。浸入含有mL的石油醚、mL苯和mL甲醇的混杂溶剂中，放置约1h。

2．将上述溶液置于分液漏斗中，加5mL水轻轻上下颠倒数次，静置后弃去水层（其中溶有甲醇），应防备激烈振荡，否则发生乳化现象。将节余的液体经过装有无水硫酸钠（5g）的漏斗过滤除去水分，即获取色素提取液(必要时可在通风橱中小心浓缩)。提取液于干燥的试管中保留，并用塞子将试管塞紧。

3．取层析柱1支（也可用25mL酸式滴定管代替），在下端塞上一块脱脂棉，将约2g细粉状氧化铝装入柱中，每装少许就用带托的玻璃棒压紧，特别四周要

与柱壁亲密相接，不得留有空隙。装到3cm高为止。用同样的方法装入约g细粉状碳酸钙，高度为5cm，尔后再用同样的方法将约g的细蔗糖粉末装入柱内，高度为7cm。最后在蔗糖上面再放一块脱脂棉，将准备好的吸附柱装在抽滤瓶上(见图实-3)。

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实验十一色素分离层析法

4．将石油醚和苯的混杂液（体积比为4∶1）从柱的上端注入，使其经过吸附柱，缓慢抽滤。

5．不要等混杂液渗干(吸附柱上还保留一些混杂液时)，将色素提取液从柱上端注入。

6．使提取液经过吸附柱，并连续加入石油醚和苯的混杂洗脱液至能区分开柱上清楚的色带为止。

7．观察各色素在吸附柱上的地址、排列次序和颜色。叶绿素a为蓝绿色、叶绿素b为黄绿色、胡萝卜素为橙黄色、叶黄素为米黄色。

图实-3

柱吸附层析表示图

离叶色素表示图 1.脱脂棉 2. 素 1.

2.大试管 3. 4.

点样线5.汽油

六、说明事项

叶黄素

叶绿素 3.叶绿滤纸 5. 胡萝卜素

图实-4 纸层析分

大木塞

6. 脱脂棉

叶色素分别最简单的方法是纸层析法(属分配层析)。当溶剂不断地从纸上流过时，

由于混杂物中各成分在两相之间拥有不同样的分配系数，使其搬动速度不同样而使各色素分别。方

法以下：

取叶粉（鲜菜叶在80℃下烘干，研成粉末）2g于小烧杯中，加95%乙醇20～30mL浸提。浸提中，用玻棒搅动，待乙醇呈深绿色，过滤于锥形瓶中备

用。

用毛细管吸取提取液，在滤纸的一端划一条直线，风干后再重复划几次。

取带木塞大试管一支，加入合适汽油并加1～2滴苯。将点样的滤纸条放入试管中，下端浸入汽油中，点样线要在液面上（见图实-4）。滤纸边缘不可以碰到试管壁，盖紧塞子，直立于暗处层析。

汽油沿滤纸上升，当溶剂前沿凑近滤纸顶部时，将滤纸取下，风干后即可看到分其他各种色素带。

2. 3. 4.

七、问题与思虑

吸附层析法的原理是什么？

为什么胡萝卜素在层析柱中搬动得最快？

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