TaqMan探针技术用于X—SNP位点的分型

・２２・　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｆｏｒｅｎｓｉｃ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｆｅｂｒｕａｒｙ　２０１０，Ｖｏ１．２６，Ｎｏ．１　ＴａｑＭａｎ　探针技术用于Ｘ—ＳＮＰ位点的分型　张素华　，李莉　，李成涛　，赵书民　（１．苏州大学医学部法医学系，江苏苏州２１５１２３；２．司法部司法鉴定科学技术研究所上海市法医学重　点实验室，上海２０００６３）　摘　要：目的建立一种基于ＴａｑＭａｎ探针技术的快速、准确且经济的实时荧光ＰＣＲ方法，用于检测Ｘ染　色体上的单核苷酸多态性（ｓｉｎｇｌｅ　ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，ＳＮＰ）。　方法选择Ｘ染色体上的１３个ＳＮＰ位　点（Ｘ—ＳＮＰ），针对每个位点分别设计１对ＰＣＲ引物和ＴａｑＭａｎ探针，进行实时荧光ＰＣＲ扩增，对Ｘ—ＳＮＰ位　点进行分型。　结果１３个位点均符合Ｈａｒｄｙ—Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡：多态信息含量分布为０．３４９７－０．３７５０，杂合度　为０．４５３　７～０．５０２　１，、建立的方法能够用于Ｘ—ＳＮＰ位点的基因分型，检测结果与ＤＮＡ测序结果完全一致。　结论基于ＴａｑＭａｎ探针技术的等位基因特异的实时荧光ＰＣＲ方法灵敏、简单、快速，可实现对Ｘ—ＳＮＰ位　点的分型检测：所选择的ｌ３个Ｘ—ＳＮＰ位点具有高信息量，在法医遗传学中具有潜在的应用价值。　关键词：法医遗传学：多态性，单核苷酸：Ｘ染色体；ＴａｑＭａｎ探针　中图分类号：ＤＦ７９５．２　文献标志码：Ａ　ｄｏｉ：１０．３９６９￣．ｉｓｓｎ．１００４—５６１９．２０１０．０１．００７　文章编号：１００４—５６１９（２０１０）０１—００２２—０４　Ｘ－ＳＮＰ　Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ　Ｕｓｉｎｇ　ｔｈｅ　ＴａｑＭａｎ　Ｐｒｏｂｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ＺＨＡＮＧ　Ｓｕ－ｈｕａ　ＬＩ　Ｌｉ２，ＬＩ　Ｃｈｅｎｇ－ｔａｏ￣ＺＨＡ　０　Ｓｈｕ－ｍｉｎ。　（Ｊ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　Ｄ／‘Ｆｏｒｅｎ￣ｉＣ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏ厂Ｓｏｏｃｈｏｗ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｕｚｈｏｕ　２１５１２３，Ｃｈｉｎａ；２．Ｓｈａｎｇ－　ｈａｌ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｆｏｒｅｎｓｉｃ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ｉｓｔｎｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｆｏｒｅｎｓｉｃ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｍｉｎｉｓｔｒｙ　ｈａｉ　２０００６３，Ｃｈｉｎａ）　Ｊｕｓｔｉｃｅ　Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ，Ｓｈａｎｇ－　Ａｂｓｔｒａｃｔ：　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｄｅｖｅｌｏｐ　ａ　ｒａｐｉｄ，ａｃｃｕｒａｔｅ　ａｎｄ　ｅｃｏｎｏｍｉｃａｌ　ｒｅａｌ　ｔｉｍｅ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ＰＣＲ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗｉｔｈ　ＴａｑＭａｎ　ｐｒｏｂｅ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ｔｏ　ｄｅｔｅｃｔ　ｔｈｅ　Ｘ　ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ　ｓｉｎｇｌｅ　ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ（Ｘ—ＳＮＰ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔａｑ—　Ｍａｎ　ｐｒｏｂｅｓ　ａｎｄ　ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　ｃｈａｉｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｐｒｉｍｅｒｓ　ｗｅｒｅ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ　ｄｅｓｉｇｎｅｄ　ａｃｃｏｒｄｉｎｇ　ｔｏ　ｔｈｅ　１　３　Ｘ－ＳＮＰ．　Ｔｈｅｎ．ｔｈｅ　Ｘ—ＳＮＰ　ｗｅｒｅ　ｇｅｎｏｔｙｐｅｄ　ａｆｔｅｒ　ｔｈｅ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｂｙ　ｒｅａｌ　ｔｉｍｅ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ＰＣＲ．　Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ａ１ｌ　ｔｈｅ　ｌｏｃｉ　ｆｏｌｌｏｗ　ｔｈｅ　Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ　ｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ．Ｔｈｅ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ　ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｆｏｒ　１　３　ｄｉｓｔｉｎｃｔ　ｌｏｃｉ　ｖａｒｉｅｄ　ｂｅｔｗｅｅｎ　０．３４９　７　ａｎｄ　０．３７５　０　ｗｈｉｌｅ　ｔｈｅ　ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ　ｒａｎｇｅｄ　ｆｒｏｍ　０．４５３　７　ｔｏ　０．５０２　１．Ａ　ｒｅａｌ　ｔｉｍｅ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ　ＰＣＲ　ｍｅｔｈｏｄ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ＴａｑＭａｎ　ｐｒｏｂｅ　ｗａｓ　ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ　ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｗｅｒｅ　ａｃｃｏｒｄａｎｔ　ｗｉｔｈ　ｔｈｏｓｅ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｂｙ　ＤＮＡ　ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ　ｏｆ　ｔｈｅ　１３　Ｘ－ＳＮＰ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ａｌｌｅｌｅ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｒｅａｌ　ｔｉｍｅ　ｆｌｕｏｒｅｓ—　ｃｅｎｅｅ　ＰＣＲ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ＴａｑＭａｎ　ｐｒｏｂｅ　ｉｓ　ａ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ，ｓｉｍｐｌｅ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　ｓｕｉｔａｂｌｅ　ｆｏｒ　ｒａｐｉｄ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　Ｘ－　ＳＮＰ．Ａｌｌ　ｔｈｅ　ｌｏｃｉ　ｓｈｏｗ　ｈｉｇｈｌｙ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ　ａｎｄ　ｍａｙ　ｂｅ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｉｎ　ｆｏｒｅｎｓｉｃ　ｇｅｎｅｔｉｃｓ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｆｏｒｅｎｓｉｃ　ｇｅｎｅｔｉｃｓ；ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，ｓｉｎｇｌｅ　ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ；Ｘ　ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ；ＴａｑＭａｎ　ｐｒｏｂｅ　单核苷酸多态性（ｓｉｎｇｌｅ　ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ．　ＳＮＰ）指不同个体基因组ＤＮＡ序列同一位置上的单　个核苷酸的差别，包括单碱基的转换、颠换以及单碱　基的插入或缺失等。由于ＳＮＰ具有分布广泛、蕴涵　国内外广泛使用的法医ＤＮＡ检测试剂所能分析的　均是常染色体ＳＴＲ或ＳＮＰ，满足不了特殊亲缘关系　鉴定的需要。对于祖母与孙女之间亲缘关系的鉴　定、同父异母姐妹之间血缘关系的鉴定等．只能通　的信息量大、突变率低以及变异程度简单、便于设计　更短的ＰＣＲ产物等特点，其在法医遗传学领域得到　了广泛的关注并被应用到了法医学实践中【】＿　目前．　过ｘ染色体上遗传学标记（如ＳＴＲ、ＳＮＰ）得到一定　的信息。　本研究采用一种较新的ＳＮＰ分型方法一ＴａⅡ．　Ｍａｎ探针法，在常规ＰＣＲ的基础上加入荧光标记探　基金项目：上海市自然科学基金资助项目（０８ＺＲ１４ｌ９８００）　针来实现其定量、分型功能＿４ｌ。即在ＰＣＲ反应系统中　作者简介：张素华（１９８５一），女，江苏常州人：硕士研究生，主　要从事法医生物学研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｓｈ—ｄａｉｓｙ＠１６３．ｃｏｒｎ。　通信作者：李莉，女。研究员，主要从事法医生物学研究。Ｅ—　ｍａｉｌ：ａｎｎｅｉｎｃｈｉｎａ＠１６３．ｃｏｎ　加入２种不同荧光标记的探针，它们可分别与２个等　位基因完全配对。正常情况下．由于探针５　端荧光基　团和３　端淬灭基团紧邻在一起．荧光被淬灭（Ｆｏｒｓｔｅｒ　法医学杂志　２【）ｌ０年２月　第２６卷　第１期　效应）。随着ＰＣＲ的有效进行．与模板完全配对的探　针逐步被Ｔａｑ　ＤＮＡ聚合酶５　一３　外切酶活性切割，　致使探针５　端上的荧光基团与３　端的淬灭基『硐分　离，Ｆｏｒｓｔｅｒ效应解除，报告荧光基团被激活：而与模板　不能完全配对的探针（代表另一种等位基凶）不能被　有效切割，故检测不到荧光信号，通过相应仪器检测　荧光值的变化，便可得到相应ＳＮＰ位点的分型结果。　现报道如下。　１材料与方法　１．】样本　无关个体血样２３８份，其中１３９份来源于日常检　案积累，９９份来源于上海市血液中心（男性：女性＝　１２５：１１３）。　实际二联体案例１２６例．包括母一女二联体案例　３２例，母一子二联体案例３ｌ例，父一子二联体案例　６３例，均已用Ｓｉｎｏｆｉｌｅｒ试剂盒得到明确的鉴定结论，　其中排除案例７２例，认定案例５４例。　１．２主要仪器与试剂　７５００实时荧光定量ＰＣＲ仪（美国ＡＢ公司），紫　外分光光度计（上海复Ｅｔ科技有限公司），高速冷冻离　心机（德围Ｅｐｐｅｎｄｏｆｆ公司）。　Ｃｈｅｌｅｘ一１００（美国Ｂｉｏ—Ｒａｄ公司）．血液ＤＮＡ抽提　试剂盒（ＱＩＡａｍｐ　Ｍｉｎｉ　Ｂｌｏｏｄ　Ｋｉｔ，德国Ｑｉａｇｅｎ公司），　人源性ＤＮＡ定量试剂盒（Ｑｕａｎｔｉｉｆｌｅｒ　Ｈｕｍａｎ　ＤＮＡ　Ｑｕａｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ　Ｋｉｔ，美国ＡＢ公司）。　１＿３基因组ＤＮＡ的提取　用常规Ｃｈｅｌｅｘ一１００法和血液ＤＮＡ抽提试剂盒　进行ＤＮＡ抽提，采用人源性ＤＮＡ定量试剂盒进行　ＤＮＡ定量。　１．４　ＴａｑＭａｎ探＠ｔＳｎ引物设计　采用７５００实时荧光定量ＰＣＲ仪随机软件　Ｐｒｉｍｅｒ　Ｅｘｐｒｅｓｓ　３．０进行引物和探针的设计。针对每　个ＳＮＰ位点所设计的两条探针分别采用ＶＩＣ和ＦＡＭ　进行荧光标记．由美国ＡＢ公司合成，１３个ＳＮＰ位　点的探针和引物混合之后的贮液为４０倍浓缩液　（４０ｘＴａｑＭａｎ　ＳＮＰ　Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ　Ａｓｓａｙ　Ｍｉｘ）。　１．５　Ｘ—ＳＮＰ分型　实验反应体系为１２．５　Ｌ，其中通用ＰＣＲ混合液　（２　ｘＴａｑＭａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ　ＰＣＲ　Ｍａｓｔｅｒ　Ｍｉｘ）６．２５　ＩｘＬ，引　物与探针混合液（２０ｘＴａｑＭａｎ　ＳＮＰ　Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ　Ａｓｓａｙ　Ｍｉｘ）０．６２５　Ｌ，ＤＮＡ（１～２０ｒｉｇ）５．６２５　Ｌ。实验过程主要　包括读取扩增前信号，生成扩增数据以及读取扩增　后信号。其中扩增的反应条件为９５　ｃｌＣ　１０ｒａｉｎ；９２　１５　Ｓ，６０　ｏＣ　１　ａｒｉｎ，共４０个循环。　・２３・　１．６灵敏度检测　采用人源性ＤＮＡ定量试剂盒中的标准品ＤＮＡ　（２００　ｎｇ／ＩｘＬ）进行倍比稀释，质量浓度分别为５０、　ｌ６．７、５．５６、１．８５、０．２１、０．１　ｎｇ／￣Ｌ。　１．７　ＴａｑＭａｎ分型结果的验证　采用测序的方法对ＴａｑＭａｎ分型结果进行验证　引物设计采用Ｐｒｉｍｅｒ　Ｐｒｅｍｉｅｒ　５．０和Ｏｌｉｏｇ　６．０软件　完成，递交上海捷瑞生物有限公司合成和纯化　ＰＣＲ　产物的测序由上海生物工程有限公司完成　１．８案例应用　将ＴａｑＭａｎ检测技术应用于１２６例已用Ｓｉｎｏｆｉｌｅｒ　试剂盒得到明确鉴定结论的实际二联体案例．包括排　除案例７２例，认定案例５４例。　１．９统计学分析方法　采用ＳＮＰ　Ａｎａｌｙｚｅｒ　２．０软件对女性样本进行　Ｈａｒｄｙ—Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡检验和位点问连锁状态的分析　（对于连锁的位点按单倍型进行计算）。采用ＳＡＳ软　件对等位基因分布频率在男性和女性群体中分布有　无差异进行ｘ　检验。采用直接计数法统计Ｘ—ＳＮＰ位　点在２３８名无关个体中的等位基【天１分布频率，并计算　单个位点的等位基因杂合度（Ｈ），女性和男性个体识　别能力（ＰＤ　，ＰＤ。　）、二联体和三联体非父排除率　（ＰＥ　，ＰＥ　）以及多态信息含量（ＰＩＣ）等群体遗传学　参数（　２结　果　２．１　Ｘ—ＳＮＰ位点的选择　一般情况下，位于同一染色体上两遗传标记之间　物理距离大于１０　Ｍｂ，可以认为二者相互独立，没有　连锁关系ｌ　７ｌ。ｘ染色体长约ｌ５５　Ｍｂ．基于这一原则，在　ｘ染色体上选择了１３个ＳＮＰ位点，各位点的详细信　息见表１。　表１　１３个Ｘ—ＳＮＰ位点的特征　・２４・　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｆｏｒｅｎｓｉｃ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｆｅｂｒｕａｒｙ　２０１０，Ｖｏ１．２６，Ｎｏ．１　２．２　Ｘ—ＳＮＰ位点的ＴａｑＭａｎ分型结果　对２３８份样品的检测结果表明，ＴａｑＭａｎ探针法　１　ｒｓ２２０９４２０　２　ｒｓ２０８５１２１　３　ｒｓ５９５４９８８　４　ｒｓ２８０８７４２　５　ｒｓ５９６４２０６　均可获得明确的分型结果。每个ＳＮＰ位点的等位基　因１与等位基因２的探针分别采用ＶＩＣ和ＦＡＭ荧　光素进行标记。样本为等位基因１的纯合子时，ＰＣＲ　扩增过程中仅能检测到ＶＩＣ荧光；样本为等位基因２　的纯合子时，ＰＣＲ扩增过程中仅能检测到ＦＡＭ荧光；　样本为杂合子时，ＰＣＲ扩增过程中可同时检测到　６　ｒｓ２５１９５５７　７　ｒｓ６４ｌ８２５ｌ　８　ｒｓ６６３１８２８　ＦＡＭ和ＶＩＣ两种荧光　２．３测序结果　随机选取１０个样品，对１３个Ｘ—ＳＮＰ位点进行　ＰＣＲ产物测序，测序结果表明，ＴａｑＭａｎ探针法用于　Ｘ—ＳＮＰ分型结果准确、可靠。图ｌ为一女性样本在位　点ｒｓ２０８５１２１的测序结果（箭头标示处为所检测的　ＳＮＰ位点），ＴａｑＭａｎ的分型结果为ＡＧ，测序结果为　ＣＴ．由于采用的是反向引物测序，故应判读为ＡＧ，二　者结果一致。　７０　８０　９０　Ｇ　Ｃ　Ａ　Ｃ　Ａ　Ｃ　Ａ　Ｃ　Ｃ　Ａ　Ｔ　Ｎ　Ｔ　Ａ　Ｔ　Ｇ　Ｇ　Ｇ　Ｃ　Ｃ　Ｔ　Ｇ　Ｇ　Ａ　Ｇ　Ａ　Ｔ　Ｔ　Ｇ　Ｇ　图１　Ｘ—ＳＮＰ位．￣．ｒｓ２０８５１２１的测序结果（女性样本）　２．４灵敏度检测　ＴａｑＭａｎ检测技术的灵敏度高，低至０．１　ｎｇ／ｐ￣Ｌ的　标准品ＤＮＡ也可以得到准确的分型结果。另外，在实　验中发现，ＴａｑＭａｎ技术对模板的要求不高，常规　Ｃｈｅｌｅｘ法提取的ＤＮＡ上清液在冷冻保存１年后仍可　得到准确的分型结果　２．５案例应用情况分析　ＴａｑＭａｎ技术应用于５４例认定案例中，所得到的　分型结果均符合遗传规律，未检见突变；应用于７２例　排除案例中，７１例得出排除结论，１例未检出不符合　遗传规律的指标。　２．６　Ｘ—ＳＮＰ位点的连锁情况分析　应用ＳＮＰ　Ａｎａｌｙｚｅｒ　２．０软件进行Ｈａｒｄｙ—Ｗｅｉｎ．　ｂｅｒｇ平衡检验和位点问连锁不平衡状态的分析，发现　位点均符合Ｈａｒｄｙ—Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡，１３个位点之间相　互独立，见图２。　２．７　Ｘ—ＳＮＰ位点等位基因频率与法医学参数价值　评估　ｌ３个Ｘ—ＳＮＰ位点在男性及女性群体中的分布差　异无统计学意义。对独立遗传的１３个Ｘ—ＳＮＰ位点在　中国汉族人群中的等位基凶频率进行了调查，结果见　表２：统计分析各位点的群体遗传学参数结果见表３。　９　ｒｓ５９８６７５１　ｌ０　ｒｓ１４９８６Ｏ　１ｌ　ｒｓ６６３９３９８　ｌ２　ｒｓ５９２３７５０　１３　ｒｓ９７８ｌ６４５　图２　１３个Ｘ—ＳＮＰ位点连锁不平衡分析图　表２　１３个Ｘ—ＳＮＰ位点在中国汉族人群中的　等位基因频率（ｎ＝２３８）　３讨论　人类ｘ染色体与Ｙ染色体都是性染色体，男性　为ＸＹ，女性为ＸＸ。男性的ｘ染色体来自母亲，并将　其传递给女儿。女性的两条ｘ染色体分别来自父亲　和母亲，且这两条ｘ染色体中任一条均有可能或传　递给儿子或传递给女儿。所以，Ｘ染色体的遗传既不　同于常染色体，也不同于Ｙ染色体。ＳＮＰ有着其他遗　传标记不具备的优越性和潜力，除了分布广泛、蕴涵　的信息量大、突变率低以及变异程度简单等特点外，　通过对现场生物物证的ＳＮＰ分析，还可构建身源者　的人种和地域特征，这对于侦查破案具有重要的意　义。因此，ＳＮＰ在法医遗传学中具有巨大的应用潜力，　目前国内外学者已经开发出了较多的法医学ＳＮＰ分　型组合¨．５］。Ｘ—ＳＮＰ以单倍体形式传给子代，因此，ｘ—　ＳＮＰ在母一子二联体亲权鉴定、父一女二联体亲权鉴　定、祖母一孙女亲缘关系鉴定、同父异母同胞姐妹关系　鉴定等案例中具有重要应用价值。　法医学杂志　２０１０年２月　第２６卷　第１期　・２５・　表３　１３个相互独立的ｘ—ＳＮＰ位点的法医学参数（ｎ＝２３８）　ＴａｑＭａｎ探针法是适合大规模样本、单个ＳＮＰ位　点分型的一种较好的技术方法，其优点为：操作简　单．不需要ＰＣＲ后处理；工作效率和自动化程度较　高：结果的重复性好；对样本的质和量要求不高，对　于样本质量浓度低至０．１　ｎｇ／ｔｘＬ的标准品，可以得到　准确分型结果；在样本数量较大时，既节约成本又省　时间。但该方法也存在一定难度，如对ＳＮＰ位点侧翼　２　１——ｌｏｃｕｓ　ａｕｔｏｓｏｍａｌ　ＳＮＰ　ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ　ｆｏｒ　ｆｏｒｅｎｓｉｃ　ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａ－－　ｔｉｏｎ　ｐｕｒｐｏｓｅｓ［Ｊ］．Ｆｏｒｅｎｓｉｃ　Ｓｃｉ　Ｉｎｔ，２００５，１５４（１）：６２—７７．　¨Ｌ＇Ｌｉ　ＣＴ，Ｌｉ　ＲＹ，ｅｔ　ａ１．ＳＮＰ　ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ　ｂｙ　ｍｕｌｔｉ—　［２】　ｐｌｅｘ　ａｍｐｌｉｉｃａｔｉｆｏｎ　ａｎｄ　ｍｉｃｒｏａｒｒａｙｓ　ａｓｓａｙ　ｆｏｒ　ｆｏｒｅｎｓｉｃ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｆｏｒｅｎｓｉｃ　Ｓｃｉ　Ｉｎｔ，２００６，１６２（１－３）：７４—７９．　［３］Ｔｏｍａｓ　Ｃ，Ｓｔａｎｇｅｇａａｒｄ　Ｍ，Ｂｃｒｓｔｉｎｇ　Ｃ，ｅｔ　ａ１．Ｔｙｐｉｎｇ　ｏｆ　４８　ａｕｔｏｓｏｍａｌ　ＳＮＰｓ　ａｎｄ　ａｍｅｌｏｇｅｎｉｎ　ｗｉｔｈ　ＧｅｎＰｌｅｘ　ＳＮＰ　ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ　ｓｙｓｔｅｍ　ｉｎ　ｆｏｒｅｎｓｉｃ　ｇｅｎｅｔｉｃｓ［Ｊ］．Ｆｏｒｅｎｓｉｃ　Ｓｃｉ　Ｉｎｔ　Ｇｅｎｅｔ，２００８，３（１）：ｌ一６．　序列要求很高，有可能在目标范围上找不到合适的探　针和引物：此外在实验过程中必须使用配套的实验器　材等。　本实验中选择了１３个Ｘ—ＳＮＰ位点，它们独立遗　传，ＰＩＣ分布为０．３４９７～０．３７５　０，Ｈ为０．４５３　７－０．５０２　１，　ＰＤｋ　为０．５９７４－０．６２５０，ＰＤ。Ｔ１ａｌ　为０．４５１　８－０．５０００。ｌ３个　［４】李成涛，林源，柳燕，等．实时ＤＮＡ定量技术的应用研　究ＩＪＪ．中国司法鉴定，２００７，３０（３）：２８－３０．　［５］Ｄｅｓｍａｒａｉｓ　Ｄ，Ｚｈｏｎｇ　Ｙ，Ｃｈａｋｒａｂｏｒｔｙ　Ｒ，ｅｔ　ａ１．Ｄｅｖｅｌ—　ｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ａ　ｈｉｇｈｌｙ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ　ＳＴＲ　ｍａｒｋｅｒ　ｆｏｒ　ｉｄｅｎｔｉ—　ｔｙ　ｔｅｓｔｉｎｇ　ｐｕｒｐｏｓｅｓ　ａｔ　ｔｈｅ　ｈｕｍａｎ　ａｎｄｒｏｇｅｎ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　Ｘ～ＳＮＰ位点的累积个体识别能力（ＣＤＰ）在三联体为　ｇｅｎｅ（ＨＵＭＡＲＡ）『Ｊ］．Ｊ　Ｆｏｒｅｎｓｉｃ　Ｓｃｉ，１９９８，４３（５）：１０４６—　１０４９．　０．９９７　５．在二联体为０．９７３　５。以上结果表明本实验中　【６］Ｋｉｓｈｉｄａ　Ｔ，Ｗａｎｇ　Ｗ，Ｆｕｋｕｄａ　Ｍ，ｅｔ　．Ｄｕｐｌｅｘ　ＰＣＲ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｙ一２７Ｈ３９　ａｎｄ　ＨＰＲＴ　ｌｏｃｉ　ｗｉｔｈ　ｒｅｆｅｒｅｎｅｅ　ｔｏ　所选择的Ｘ—ＳＮＰ位点具有较高的法医学应用价值。　ＴａｑＭａｎ检测技术在１２６例实际案例中的应用表　明．这１３个Ｘ—ＳＮＰ位点所能提供的信息单独作为遗　传证据仍显薄弱，应结合更多的ｘ染色体遗传标记　（ＳＮＰ或者ＳＴＲ）或常染色体遗传标记进行分析。　参考文献：　【１】Ｄｉｘｏｎ　ＬＡ，Ｍｕｎ＇ａｙ　ＣＭ，Ａｒｃｈｅｒ　ＥＪ，ｅｔ　ａ１．Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　Ｊａｐａｎｅｓｅ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ　ｄａｔａ　ｏｎ　ｔｈｅ　ＨＰＲＴ　ｌｏｃｕｓ［Ｊ］．Ｎｉｈｏｎ　Ｈｏｉｇａｋｕ　Ｚａｓｓｈｉ，１９９７，５１（２）：６７－６９．　［７】侯一平．法医物证学［Ｍ】．第２版．北京：人民卫生出版　社．２００５：１９．　（收稿日期：２００９—０８—２５）　（本文编辑：李成涛）